天然抗凝血酶多肽研究进展

凝血过程与血栓性心脑血管疾病密切相关。人们从多种途径出发去寻找抗凝血药物，其中从天然吸血动物体内提取抗凝血物质并克隆其基因进行人工表达是一重要的方法。本文对业已发现的13种天然抗凝血酶抑制剂、凝血酶的结构及其与抑制剂的相互作用的研究进展和天然抗凝血酶抑制剂的应用前景进行了综合评述。     

冻伤大鼠血浆中抗凝血酶Ⅲ含量与活性改变的研究

本文用免疫火箭电泳地和单赂免疫扩散法对不同程度冻伤大鼠在冻后不同时间的血浆中抗凝血酶Ⅲ（ＡＴⅢ）的含量与活性的改变进行了观察,实验表明,冻后各冻伤组织 大鼠血交中ＡＴ－Ⅲ的含量一活性呈不同程度的降低,其改变３程度与冻伤程度有密切关系,冻伤愈重,其含量与活性降低愈明显,恢复亦愈慢,结果提示,并举务引起血液抗凝机制减弱,促进或引起血凝机制亢进而导致血液凝固性增强,造成冻伤组织血液徨障碍最终发生组织坏死     

沙丁胺醇联合布地奈德雾化吸入对支气管哮喘患儿血清AT-III、CD5L以及炎症水平的影响

摘要 目的：探讨沙丁胺醇联合布地奈德雾化吸入对支气管哮喘患儿血清AT-III、CD5L以及炎症水平的影响。方法：选取我院2018年10月到2020年10月共收治的78例支气管哮喘患儿作为研究对象,将所有患儿随机分为观察组与对照组,每组39例。对照组患儿应用布地奈德雾化吸入治疗,观察组患儿应用沙丁胺醇联合布地奈德雾化吸入治疗,对比两组患儿的治疗效果、治疗前后的FeNO、肺功能指标、血气指标、血清AT-III、CD5L以及外周血单个核细胞NLRP3炎症小体变化情况。结果：观察组患儿的治疗总有效率为97.44%,显著高于对照组的82.05%（P＜0.05）;两组患儿治疗前PEF、FVC、FEV1指标对比无显著差异（P＞0.05）,通过治疗后观察组患儿的PEF、FVC、FEV1指标明显优于对照组,组间对比,差异具有统计学意义（P＜0.05）;通过对比各项肺功能指标发现,两组患儿治疗后PaO₂、PaCO₂、SaO₂指标对比差异均无统计学意义（P＞0.05）;两组患儿治疗前FeNO、AT-III、CD5L以及外周血单个核细胞NLRP3炎症小体表达对比无明显差异（P＞0.05）;治疗后,观察组患儿FeNO、AT-Ⅲ水平以及NLRP3 mRNA表达均显著低于对照组,CD5L水平高于对照组（P＜0.05）。结论：对支气管哮喘患儿应用沙丁胺醇联合布地奈德雾化吸入治疗,能够减轻患儿临床症状,提高治疗效果,提升患儿肺功能,稳定血气指标,减轻慢性缺氧状态,提升免疫力,降低炎症反应,值得临床应用推广。     

抗凝血酶Ⅲ转基因山羊外源基因拷贝数及其蛋白表达量的测定

目的:检测抗凝血酶Ⅲ(ATⅢ)转基因山羊外源基因的拷贝数及ATⅢ蛋白的表达量,分析拷贝数与蛋白表达量的相关性。方法:用Primer 5.0软件设计外源基因ATⅢ及山羊管家基因GAPDH的引物,以倍比稀释的标准品进行实时荧光定量PCR,制作标准曲线,通过标准曲线计算外源基因拷贝数;通过酶显色底物法检测ATⅢ蛋白的含量。结果:依据ATⅢ和GAPDH基因标准曲线方程计算得到的山羊个体间外源基因的拷贝数相差很大,最少的为5,最多为25,且不同转基因山羊间ATⅢ表达水平的差别达10倍以上。结论:外源基因表达水平在受到拷贝数的影响外,也受到整合位点等其他因素的重要影响。     

人抗凝血酶Ⅲ转基因羊的外源基因漂移风险分析

目的:研究转基因羊发生基因漂移的可能性.方法:利用实时荧光定量PCR技术检测人抗凝血酶Ⅲ转基因羊及与其密切接触的野生型山羊、转乙肝表面抗原基因羊、转β-干扰素转基因羊、狗、鸡和鹅的血样中人抗凝血酶Ⅲ基因的含量.结果:人抗凝血酶Ⅲ转基因只在人抗凝血酶Ⅲ转基因羊血液中检测呈阳性.结论:人抗凝血酶Ⅲ基因没有在转基因羊和非转基因羊及其它动物间发生漂移,提示转基因羊对于环境是安全的.     

管氏肿腿蜂毒液抗凝血酶Ⅲ基因的克隆与表达分析

[目的]克隆和表达管氏肿腿蜂Scleroderma guani毒液抗凝血酶Ⅲ(AntithrombinⅢ)基因SgAT-Ⅲ,为深入研究该毒液基因的生理功能奠定基础.[方法]利用逆转录PCR技术克隆SgAT-Ⅲ基因开放阅读框(Open reading frame,ORF)序列,使用生物信息学软件分析其基因序列结构特征,通过qPCR技术分析其在雌成虫不同组织中的表达模式,采用载体pCzn1对其进行原核表达.[结果]克隆得到SgAT-Ⅲ基因的ORF,长1338 bp,编码446个氨基酸,其中第1-19位氨基端为信号肽,理论分子量49.49 ku,等电点6.23.多序列比对分析表明,SgAT-Ⅲ与蚂蚁AT-Ⅲ具有较高的氨基酸一致性(＞64％),C末端具有serpin蛋白家族典型反应中心环区,含有供靶标蛋白识别的活性裂解位点.系统发育分析表明,SgAT-Ⅲ与膜翅目其他昆虫的AT-Ⅲ亲缘关系较近,且与蚂蚁的AT-Ⅲ聚为一支.qPCR分析表明,SgAT-Ⅲ基因在毒液器官中高表达.SDS-PAGE电泳检测发现,成功表达SgAT-Ⅲ重组蛋白,纯化得到高纯度的重组蛋白.[结论]克隆得到SgAT-Ⅲ基因,其在毒液器官中高表达,纯化得到SgAT-Ⅲ重组蛋白,为进一步研究该毒液基因的生理功能奠定了基础.     

重组人抗凝血酶发酵条件的优化

目的:通过实验室发酵条件优化工作,实现在巴斯德毕赤酵母中高效表达重组人抗凝血酶。方法:在摇瓶培养条件下,应用正交实验方法考查人抗凝血酶重组毕赤酵母菌pPIC9K-AT-02的培养温度、培养基pH值、接种比例、甲醇补加间隔时间及甲醇补加浓度等5种因素对重组人抗凝血酶活性的影响,确定最优发酵条件。结果与结论:筛选出的最终发酵条件为培养温度30℃、培养基pH6.0、接种比例20%、甲醇补加间隔时间24 h、甲醇补加浓度2%,重组人抗凝血酶在巴斯德毕赤酵母中表达活性为4098 U/L,比原始活性提高了150%。     

聚氨酯表面偶联重组水蛭素及其抗凝血酶活性的评价

在PU和Chro表面上涂覆含羧基硬段的PU1溶液并用次甲基蓝吸附法测定表面羧基含量;用EDC接枝牛血清白蛋白并用FT-ATR-IR谱的差减测定表面BSA接枝量;用EDC偶联rHir并用放射性同位素测定表面rHir偶联量,最后用白陶土部分凝血酶时间测定(KPTT)、凝血酶原测定(PT)、凝血酶时间测定(TT)试验评价样品的抗凝血酶活性.CPU和C-Chro表面羧基含量分别为3.77和3.03 mmol/m²,CPU-BSA和C-Chro-BSA表面BSA含量分别为426和262 mg/m²,CPU-BSA-¹²⁵I-rHir和C-Chro-BSA-¹²⁵I-rHir表面rHir含量分别为716.7和691.1 μg/m²,比对照样品都有很大的提高.抗凝血酶试验评价表明,rHir偶联样品的KPTT、PT、TT时间都明显延长,它们的抗凝血酶活性确有提高,抗血栓性能得到有效的改善.     

血清抗凝血酶Ⅲ、血浆单胺氧化酶与急性冠状动脉综合征的关系及对介入手术后近期主要不良心血管事件的预测效能研究

摘要 目的：探讨血清抗凝血酶Ⅲ（ATⅢ）、血浆单胺氧化酶（MAO）与急性冠状动脉综合征的关系及对介入手术后近期主要不良心血管事件的预测效能。方法：选取我院2020年1月到2023年1月收治的85例急性冠状动脉综合征患者作为研究对象,依照患者心内科非ST段抬高型急性冠状动脉综合征缺血评估（GRACE）评分对患者进行分组,将GRACE评分＞140分的20例患者分为高危组,将109~140分的30例患者分为中危组,将≤108分的35例患者分为低危组,另选取同期来我院体检的40名健康者作为对照组,对比四组受检者血清ATⅢ、血浆MAO表达水平,分析血清ATⅢ、血浆MAO与急性冠状动脉综合征严重程度的相关性。随后将85例急性冠状动脉综合征PCI术后近期是否发生不良心血管事件（MACE）分为非MACE组（n=64）和MACE组（n=21）,对比两组患者临床特征、血清ATⅢ、血浆MAO表达水平,并分析血清ATⅢ、血浆MAO对急性冠状动脉综合征介入手术后近期主要不良心血管事件的预测效能。结果：四组受检者ATⅢ、MAO水平对比差异显著,高危组ATⅢ水平明显低于中危组、低危组和对照组,高危组MAO水平明显高于中危组、低危组和对照组（P＜0.05）;Spearman相关分析结果显示：ATⅢ、MAO与急性冠状动脉综合征严重程度呈正相关,MAO与急性冠状动脉综合征严重程度呈负相关（P＜0.05）;非MACE组与MACE组患者年龄、心功能分级、左室射血分数、TIMI评分、ATⅢ以及MAO表达水平对比差异显著（P＜0.05）;logistic回归分析结果表明：ATⅢ、MAO为急性冠状动脉综合征介入手术后近期主要不良心血管事件的独立危险因素（P＜0.05）。结论：血清ATⅢ、血浆MAO水平与急性冠状动脉综合征严重程度具有明显相关性,且ATⅢ、MAO为急性冠状动脉综合征介入手术后近期主要不良心血管事件的独立危险因素。提示临床上对于ATⅢ降低和MAO升高的急性冠状动脉综合征患者注意及时采取相关措施预防近期不良心血管事件的发生。