酵母双杂交系统的发展及其衍生系统的比较

酵母双杂交及其衍生系统是鉴定及分析蛋白质-蛋白质、蛋白质-DNA、蛋白质-RNA相互作用的最常用、最有效的工具之一。本文系统介绍了该技术的背景、发展过程,以及由Fields和Song初次描述的由酵母双杂交系统衍生而来的几种主要的双杂交系统的特点,并简要比较了各系统的优缺点。     

“基因”概念的发展

叙述了基因概念的产生和发展简史,并在此基础上从不同角度讨论了基于当前科学认知水平的基因概念,以达到提高教师的生物学教学水平、对科学理解文献有所帮助的目的,同时对研究课题的设计也有所启发。     

旅游生态补偿研究现状及趋势

近年来,旅游活动带来的环境问题日益受到关注,旅游领域的生态补偿研究也不断升温。旅游生态补偿作为一种系统化的制度安排,其主要目的是保护旅游生态系统、调和旅游业发展与生态保护之间的矛盾,以促进旅游业可持续发展。因此,旅游生态补偿的研究引起国内外研究者的重视。本文对旅游生态补偿的相关内容包括概念梳理、主客体界定、标准核算、补偿途径4个方面进行述评,阐述了国内外旅游生态补偿的研究现状,并通过国内外研究现状对比分析,寻找我国旅游生态补偿研究存在的问题,为完善我国旅游生态补偿理论研究和实践探索提供借鉴;提出旅游生态补偿应深化研究的方向,如旅游生态补偿的绩效考核、时空分配、等级区划及政策等问题。     

脆性组氨酸三联体与复制蛋白A相互作用关键氨基酸残基的鉴定

目的：研究脆性组氨酸三联体（Fhit）对ATR/CHK1通路的影响,在确定Fhit与复制蛋白A（RPA）存在相互作用的基础上鉴定Fhit与RPA相互作用的关键氨基酸残基,为进一步研究Fhit特异的信号通路奠定基础。方法：构建一系列Fhit缺失突变体基因Fhit1～Fhit11及6种Fhit点突变体基因,将这些基因插入含GST基因的原核表达载体中,在大肠杆菌中表达并纯化GST-Fhit1～GST-Fhit11融合蛋白、突变体GST-FhitSIYEEL、GST-FhitIY、GST-FhitEL、GST-FhitF、GST-FhitA,以及GST-FhitD融合蛋白,用GST沉降技术研究Fhit与RPA相互作用的关键氨基酸残基。结果：Fhit蛋白第112～117（SIYEEL）残基可能是Fhit与RPA相互作用的关键区域,而第114（Y）残基可能是Fhit与RPA相互作用的关键氨基酸残基。结论：确定了Fhit与RPA相互作用的关键氨基酸残基,为阐明Fhit在维持基因组完整性方面的机理提供了线索。     

C1—抑制物缺乏的分子生物学

C1－抑制物（C1－INH）是含478个氨基酸的单链糖蛋白,为补体经典激活途径主要调节因子,C1－INH与靶酶相互作用时,反应中心关键的P1和P11位点为Arg^444-Thr445,C1－INH遗传性和获得性缺乏可引起血管神经性水肿,其分子发病机制各不相同,其它多种疾病包括系统性红班狼疮（SLE）,遗传性C4缺乏症等也与C1－INH缺乏或功能障碍有关,IFN－γ,TNF＜L-6,M-CSF,糖皮质激素有增强C1－INH基因表达的作用。     

抗人Cl-INH McAb可变区基因的克隆及序列结构分析

近年来迅猛发展的基因工程抗体研究,已成为抗体应用研究的核心。构建重组抗体的前提是从杂交瘤细胞、免疫脾细胞或外周血淋巴细胞中分离免疫球蛋白(Ig)的重链和轻链可变区(VL和VH)基因,PCR技术为可变区基因     

脆性组氨酸三联体基因小干扰RNA的构建及干扰效果检测

目的:构建脆性组氨酸三联体(FHIT)基因的小干扰RNA(siRNA),并检测其对293T细胞内源性FHIT基因表达的干扰效果。方法:根据FHIT基因序列,通过生物信息学网站预测可能的siRNA,从中筛选出2条合理的FHIT-siRNA,将其克隆到siRNA表达载体pSilencer2.1-U6Hygro中,转化大肠杆菌DH5α,挑取阳性克隆进行测序鉴定;将构建成功的FHIT-siRNA重组载体转染人胚肾细胞293T,Western印迹检测siRNA对293T内源性FHIT表达的干扰效果。结果:构建了2个FHIT-siRNA重组质粒,2条siRNA都有干扰作用,其中一条的作用效果可达50%以上。结论:构建的FHIT-siRNA为进一步研究FHIT的功能提供了有利的工具。     

Taq DNA聚合酶结构改造与功能改进及其在医药领域的应用前景

TaqDNA聚合酶（ThermusaquaticusDNApolymerase）是重要的生物技术工具酶,广泛应用于疾病诊断与治疗、传染病检测、药物作用机理等医药领域。TaqDNA聚合酶在结构上由三部分构成：DNA聚合酶区、3’核酸外切酶区和5’核酸外切酶区。由于3’核酸外切酶区的氨基酸序列的变化而使其失去了3’-5＇的外切校读功能,因此TaqDNA聚合酶有错误复制倾向。利用特定位点的突变、与其他酶互换功能区和删除N末端的5’核酸外切酶区等方式可以改进TaqDNA聚合酶的性能,使它的忠实性、热稳定性和聚合性能得到提高。本文介绍了TaqDNA聚合酶的结构与功能改造的研究现状,并展望了TaqDNA聚合酶在医药领域的应用前景。     

可摘局部义齿戴入后义齿区微生态的改变

可摘局部义齿是口腔活动修复中运用最久最为广泛的一种修复方式,其通过卡环的固位,基托的稳定,连接体的连接,可以使人工牙在患者缺牙间隙发挥相应的咀嚼功能。但是,可摘局部义齿作为一个外源性的异物戴入患者口内后,由于其理化性质与口腔正常环境差别极大,并且占据了口腔中的天然间隙,势必会导致口腔内环境的相应改变。口腔微生物依附于口腔内环境,与宿主共生。当口腔内环境变化时,口腔微生态也会产生相关的变化。研究可摘局部义齿戴入后口腔内微生态的变化可以使我们更好地评估可摘局部义齿的适应证,并指导我们新义齿的设计及开发方向。目前相关研究已相当充分,本文就可摘局部义齿戴入后,口腔微生态的变化作一简单综述。     

G蛋白偶联受体激酶5在稳定表达α-Synuclein的SHSY5Y细胞中的基因表达调控功能

目的观测G蛋白偶联受体激酶5（G protein-coupled receptor kinase,GRK5）在稳定表达hα-synuclein（人突触核蛋白）的SHSY5Y细胞的胞核、胞浆中的表达情况并对其在帕金森病中的可能作用进行研究。方法应用Western blotting、组蛋白去乙酰化酶（histone deacetylase,HDAC）活性检测技术以及shRNA干扰技术等对稳定表达hα-synuclein的SHSY5Y细胞中GRK5的表达及其亚细胞分布、胞核内GRK5蛋白的功能进行研究。结果发现GRK5蛋白在过表达hα-synuclein的细胞核以及细胞浆内均表达增加,胞核中的GRK5蛋白通过影响组蛋白去乙酰化酶的活性对bcl-2基因的转录和表达进行调控。结论帕金森模型中GRK5通过对bcl-2基因的表达进行调控发挥作用。