东亚钳蝎氯毒素BmKCT的表达和功能鉴定(英文)

从中国东亚钳蝎ButhusmartensiiKarsch的毒腺cDNA文库中分离得到了一个编码毒素蛋白多肽 (命名为BmKCT)前体的全长cDNA序列 .该毒素多肽与已报道的氯毒素 (chlorotoxin)高度同源 ,其蛋白质一级序列有 6 8%的同源性 .为了鉴定BmKCT的生物学功能 ,通过pGEX系统成功地表达了BmKCT ,并用GST亲和层析和凝胶过滤的方法获得了纯化的重组BmKCT毒素蛋白 (rBmKCT) .通过膜片钳实验 ,记录了rBmKCT对人脑星型胶质瘤细胞 (gliomascell)表面的氯离子通道电流的作用 .结果显示 ,BmKCT可以显著抑制人脑星型胶质瘤细胞表面的氯离子通道电流 ,并且这种抑制作用在一定程度上是可逆的 .实验证明 ,在细胞水平上 ,BmKCT是一种新的短链氯离子通道抑制剂 .     

马氏正钳蝎的形态和结构特征

马氏正钳蝎(Mesobuthus martensii)又称东亚钳蝎,是中国最常见的蝎种。针对该蝎种系统性研究相对薄弱的现状,本文通过扫描电子显微镜、体视显微镜、解剖学等手段对马氏正钳蝎的形态结构进行了研究,全面系统地描述了马氏正钳蝎的外部形态和内部结构特征,完善了该蝎种生物学特征的基础数据,特别是对其呼吸系统、生殖系统及毒腺的结构进行了详细的研究,观察和分析了马氏正钳蝎的螯肢、眼睛、步足及听毛、生殖孔、栉齿感受器、书肺、毒腺等结构特征及相关功能,探讨了不同视觉蛋白的差异性表达、感光功能差异性与蝎子生存进化的相关性。     

端粒相关锌指蛋白基因TASL30在人早期胚胎与组织中的mRNA表达及染色体定位

采用原位杂交和RNA点杂交方法,观察了一种新的端粒相关锌指基因TASL30在早期人胚与50种器官组织中的mRNA表达。结果表明,TASL30基因在早期人胚神经管中有明显表达,其中在神经管的头端表达最强,而在人的50种器官组织中均未检测到该基因的明显表达。另外通过G－显带和染色体原位杂交,将TASL30基因定位于人染色体12q24～qter。 Abstract:By means of in situ hybridization and RNA dot blot,mRNA expression of a telomereic-associated zinc finger gene（TASL30 ）was observed.The results showed that TASL30 gene was expressed in significant amount in neural tube of early human embryo and the cephalic expression level was the highest,but none of recognizable positive signal was detected in 50 human tissues.By G-banding and chromosome in situ hybridization,TASL30 gene was located in chromosome 12q24～qter.     

端粒相关锌指蛋白基因TASL30在人早期胚胎与组织中的mRNA表达及染色体定位

采用原位杂交和RNA点杂交方法,观察了一种新的端粒相关锌指基因TASL30在早期人胚与50种器官组织中的mRNA表达。结果表明,TASL30基因在早期人胚神经管中有明显表达,其中在神经管的头端表达最强,而在人的50种器官组织中均未检测到该基因的明显表达。另外通过G－显带和染色体原位杂交,将TASL30基因定位于人染色体12q24～qter。 Abstract:By means of in situ hybridization and RNA dot blot,mRNA expression of a telomereic-associated zinc finger gene（TASL30 ）was observed.The results showed that TASL30 gene was expressed in significant amount in neural tube of early human embryo and the cephalic expression level was the highest,but none of recognizable positive signal was detected in 50 human tissues.By G-banding and chromosome in situ hybridization,TASL30 gene was located in chromosome 12q24～qter.     

作用于钾离子通道蝎毒素的结构特征及活性表面研究进展

对作用于钾离子通道的蝎毒素的空间结构特点进行了简要归纳,发现高含量碱性残基在不同结构单元广泛分布而少量酸性残基特征性分布等新特点。蝎毒素活性表面研究进展表明,利用空间结构的分子模建结合残基突变是确定活性表面的有效方法。基于少量酸性残基特征分布与活性表面取向的相关性,提出酸性残基为活性调节残基的新观点和简单的“拇指”规则预测钾毒素活性表面的方法,从而可望加速蝎毒素的结构与功能关系研究。     

一个东亚钳蝎蝎毒素BmTXKβ基因的克隆及其基因表达调控

从东亚钳蝎 (ButhusmartensiiKarsch ,BmK)毒腺组织cDNA文库中分离的长链钾通道毒素BmTXKβcDNA序列 ,克隆了BmTXKβ基因组序列 .BmTXKβ基因含有一个长度为 886bp的内含子 ,定位于BmTXKβ成熟肽中 ,与其它蝎毒素基因内含子定位于信号肽的基因结构不同 .并且 ,BmTXKβ基因的内含子特征也与其它蝎毒素基因不同 .研究结果从基因水平上证实了BmTXKβ是一个新的蝎毒素样肽 .以BmTXKβcDNA序列为探针与蝎基因组DNASouthern杂交出现 2条特异性杂交带 .杂交结果为蝎毒素基因可能通过DNA重排、多拷贝或多基因家族来调控基因表达提供了证据 .     

一种新的蝎毒素BmTXKβ的基因组结构及分析

根据从东亚钳蝎(Buthus Martensii Karsch,BmK)毒腺cDNA文库中筛选得到的长链钾离子通道毒素BmTXKβ基因序列设计引物,采用Vectorette方法克隆其5′及3′侧翼区。结果表明：BmTXKβ在编码信号肽的基因序列中有—大于997bp的内含子,并且其成熟肽中也有一个886bp内含子,而目前已知的其他蝎毒素只在信号肽中有一个内含子或没有内含子。BmTXKβ基因组结构的独特性更进一步证实BmTXKβ是一个新的长链钾离子通道毒素成员。     

东亚钳蝎蝎毒素BmKBT基因组序列的克隆及其分析

东亚钳蝎 (ButhusmartensiiKarsch ,BmK)蝎毒素BmKBT(又名BmKabT)是一个在初级结构上相似于β类哺乳动物毒素和功能接近于α类哺乳动物毒素的Na+ 通道毒素 .基于从毒腺cDNA文库中筛选得到的全长BmKBT前体核苷酸序列设计引物 ,以蝎基因组总DNA为模板进行聚合酶链式反应 (PCR) ,将PCR产物克隆至T载体、测序 .序列分析表明 :在BmKBT信号肽编码区的 3′端的- 4位Gly密码子的第 1位与第 2位碱基中有 1个长 2 2 5nt的内含子 ,插入位点距离该基因的起始密码子 4 6nt ,AT含量为 78 7% ,其内含子可能的剪接分枝位点距离 3′剪接受体位点 4 7nt.内含子的大小及其基因组织结构分析表明 :BmKBT具有与α类哺乳动物毒素类似的基因组织结构 ,进一步说明BmKBT是一个介于α类和β类Na+ 通道毒素之间的中间型蝎毒素 ,可以作为研究蝎毒素分子进化的合适材料     

人细胞中QuOX-1基因的定位、表达和多态性

用Southern杂交法研究Quox-1基因在人正常白细胞、LCE细胞及其HeLa细胞中的限制性酶切片段多态性;免疫组织化学方法研究Quox-1基因在人细胞中的表达。结果表明：在正常人细胞DNA中存在鹌鹑Quox-1基因的同源序列,在LCE等肿瘤细胞中Quox-1基因表现出明显的限制性酶切片段多态性和基因扩增现象。Quox-1蛋白在HeLa、LCE等肿瘤细胞中激活表达,而在正常人白细胞未检测出Quox-1基因的表达。Quox-1基因同人类的肿瘤发生、发展和癌变具有一定的相关性。     

东亚钳蝎毒素BmαTX14的基因组克隆、真核表达纯化及功能的初步研究

以东亚钳蝎(Buthus martensii Karsch,BmK) BmαTX14全长cDNA序列设计引物,克隆BmαTX14成熟肽,插入毕赤酵母表达载体pPIC9K中,转化酵母,诱导表达。TricineSDS PAGE和Western blot分析显示,表达产物以可溶性分子形式存在于培养上清中,诱导84h时的表达量达到高峰,约为120mg/L。通过Ni金属螯合层析柱亲和层析、聚乙二醇沉淀、凝胶分子筛层析获得纯化的rBmαTX14融合蛋白,经毒性实验表明,具有明显的抗昆虫活性。同时以蝎基因组总DNA为模板进行PCR扩增,得到BmαTX14基因克隆,序列分析显示： BmαTX14在编码信号肽的基因序列中有1个长408bp的内含子,其基因组织结构具有α型Na⁺通道毒素的特征。从功能活性和基因组织结构两个角度证实BmαTX14为α型Na⁺通道毒素。