增温和外源碳输入对泥炭地土壤碳氮循环关键微生物功能基因丰度的影响

为探讨温度升高和外源碳输入对泥炭地土壤碳氮循环关键微生物的影响,于2017年7月采集多年冻土区泥炭地表层(0—10 cm和10—20 cm)土壤样品,在10、15℃两个温度下开展为期42d的增温模拟试验,同时设置葡萄糖添加处理,利用荧光定量PCR技术分析泥炭地土壤碳氮循环关键微生物丰度变化,同时分析增温和外源碳输入对泥炭地土壤活性碳组分和无机氮含量的影响。结果表明:温度升高可导致北方泥炭地表层土壤微生物丰度以及群落结构变化,0—10 cm土壤微生物比10—20 cm土壤微生物更加敏感。增温条件下微生物首先快速分解活性有机碳,同时温度升高加快土壤氮周转速率,增加有效氮含量。外源碳输入整体提高了深层土壤微生物丰度,使得10—20 cm土壤细菌、产甲烷菌、甲烷氧化菌、氨氧化细菌以及反硝化细菌丰度显著增加,说明外源碳输入可能会促进10—20 cm土壤甲烷氧化过程、氨氧化过程和反硝化过程。温度和葡萄糖的交互作用对泥炭地表层土壤碳氮循环关键微生物丰度均有显著影响。在增温和外源碳输入条件下,北方泥炭地表层土壤微生物丰度受土壤碳氮活性基质的影响。     

紫外辐射诱导植物叶片DNA损伤敏感性差异

单细胞凝胶电泳（彗星检测,cometassay）技术已广泛应用于动物细胞DNA损伤检测,但在植物细胞DNA损伤检测中的应用尚不多见。本研究通过对动物细胞彗星检测方法的改进,利用植物细胞原生质体作为材料,研究了不同发育期九里香（Murraya panicuata）叶片对UV-B诱导的DNA损伤的敏感性差异。彗星检测结果表明,九里香叶片DNA的损伤程度与UV-B辐射的剂量呈正相关：在相同UV—B辐射剂量下,九里香幼嫩叶片比成熟叶片的DNA损伤量大,表明其幼嫩叶片对UV-B辐射的敏感性比成熟叶片高。     

魔芋葡苷聚糖（KGM）凝胶为亲和层析载体与Sepharose4B的比较 …

将ＫＧＭ和Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ４Ｂ凝胶在相同条件下活化、偶联接上染料Ｃｉｂａｃｒｏｎ Ｂｌｕｅ Ｆ３ＧＡ制成了ＫＧＭ和Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ４Ｂ染料亲和吸附剂,并用来与牛血甭白蛋白（ＢＳＡ）作用,每毫升ＫＧＭ亲和吸附剂可吸附ＢＳＡ ２８ｍｇ,用ＮａＳＣＮ洗脱时间为８４．５％,而Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ４Ｂ染料样和吸附剂每毫升可吸附ＢＳＡ １５．３ｍｇ,用ＮａＳＣＮ洗脱时间收迷８１．７％,并对两种凝胶的染     

采用蛋白质工程技术将αB-晶状体蛋白导入心肌细胞的初步研究

为将αB-晶状体蛋白（αB-crystallin, αB-C）导入心肌细胞,采用蛋白质工程技术将人αB-晶状体蛋白全长cDNA基因克隆至具有细胞膜通透能力的膜移位序列（membrane-translocating sequence,MTS）的碱基顺序的下游,在大肠杆菌中表达谷胱甘肽5-转移酶(GST)-MTS-αB-C融合蛋白.用谷胱甘肽-Sepharose4B亲和层析分离表达产物,用Xa因子将其中GST切除,并通过阴离子交换层析纯化MTS-αB-C.纯化的MTS-αB-C在SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)上呈单一条带,分子质量23 ku;免疫印迹显示GST-MTS-αB-C与MTS-αB-C均能为人αB-C抗体识别而在相应位置出现清晰条带.GST-MTS-αB-C与MTS-αB-C均有分子伴侣活性.用异硫氰荧光素（FITC）标记的MTS-αB-C与心肌细胞共培养后,在荧光显微镜下观察到其进入了心肌细胞.     

AS-mCLB1重组质粒体外抗肿瘤及化疗增敏作用

研究反义全长小鼠细胞周期蛋白B1重组质粒(pAS-mCLB1)体外抗肿瘤及化疗增敏作用。扩增后少量抽提并纯化pAS-mCLB1,通过脂质体将其转染入小鼠露易丝肺癌(LL/2)细胞,RT-PCR和Western印迹测定细胞内细胞周期蛋白B1的表达,观察转染后细胞形态变化,MTT法检测细胞增殖活性,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡。细胞转染48h后,用化疗药物健择(gemcitabine;0.2μmol/L)处理24h,MTT法测定健择对细胞的杀伤作用。研究提示pAS-mCLB1转染后LL/2细胞形态明显异常,细胞内细胞周期蛋白B1表达显著下调,细胞周期阻滞于G1期,增殖受抑,凋亡增加;健择对pAS-mCLB1转染后LL/2细胞的杀伤作用显著增强。重组质粒pAS-mCLB1体外具有明显的抗肿瘤作用,并能增强肿瘤细胞对化疗药物的敏感性,估计上述作用与其下调肿瘤细胞内细胞周期蛋白B1表达,从而诱导细胞周期阻滞及凋亡等作用相关。     

OX-M-AdmCLB1重组腺病毒制备及其诱导的体内抗肿瘤效应

构建小鼠细胞周期蛋白B1(mcyclinB1)重组腺病毒(AdmCLB1),将氧化型甘露聚糖(OX-M)与AdmCLB1偶联,制备OX-M-AdmCLB1,研究OX-M-AdmCLB1诱导的抗肿瘤效应。利用AdEasy系统构建携带靶基因小鼠细胞周期蛋白B1的复制缺陷型重组腺病毒AdmCLB1,抽提AdmCLB1基因组DNA,进行PCR扩增。重组病毒经扩增、纯化后与OX-M混合,制备OX-M-AdmCLB1;OX-M-AdmCLB1体外感染小鼠树突状细胞(DC),RT-PCR扩增分析靶基因表达;OX-M-AdmCLB1处理BALB/C小鼠,处理后再荷瘤,观察小鼠肿瘤生长及生存情况。重组病毒AdmCLB1终滴度为2.1×1011pfu/ml;DC内靶基因的表达量在OX-M-AdmCLB1组较AdmCLB1组高;体内研究提示OX-M-AdmCLB1可明显抑制CT26肿瘤增殖(抑瘤率44%)、延长动物生存期(P<0.01)。实验制备的新型重组腺病毒OX-M-AdmCLB1体内能够诱导明显的抗肿瘤效应,估计此效应的产生与DC特异识别OX-M-AdmCLB1,进而激活机体抗肿瘤免疫有关。     

温度和水分变化对冻土区泥炭地土壤氮循环功能基因丰度的影响

以大兴安岭多年冻土区泥炭地为研究对象,通过室内模拟增温实验,研究温度升高对不同深度（0-150 cm）土壤氮循环功能基因丰度的影响。同时针对0-20 cm和20-40 cm土壤设置两个水分处理,分别为土壤原始含水量和淹水状态,研究水分变化对表层土壤氮循环功能基因丰度的影响。结果表明温度升高显著提高了活动层（0-60 cm）、过渡层（60-80 cm）、永冻层（80-100 cm）中nifH、nirK基因丰度,温度升高显著提高了活动层（0-40 cm）和过渡层（60-80 cm）中nirS基因丰度。温度升高显著提高了过渡层（60-80 cm）NH₄⁺-N和较深永冻层（140-150 cm）NO₃^--N的含量,但降低了过渡层（60-80 cm）NO₃^--N和较深永冻层（120-150 cm）NH₄⁺-N的含量,相关性分析表明,NH₄⁺-N含量与nifH和nirS基因丰度呈显著正相关,NO₃^--N含量与nirK基因丰度呈显著正相关,说明温度升高能够通过改变微生物丰度促进过渡层固氮作用和反硝化作用。在增温条件下,淹水处理使表层土壤nirS和nirK基因丰度及NH₄⁺-N含量降低,但提高了NO₃^--N含量,说明淹水造成了过度还原的条件使反硝化底物浓度降低,降低反硝化微生物活性进而抑制了土壤反硝化作用。该结果对于明确未来气候变化影响下冻土区泥炭地土壤氮循环过程具有重要意义。     

以魔芋葡甘聚糖凝胶为载体亲和层析分离纯化猪血SOD

以魔芋葡甘聚糖（ＫＧＭ）凝胶作为铜金属螯合亲和层析的载体一步亲和纯化猪血ＳＯＤ,得到电泳均一,比活为８６２２Ｕ／ｍｇ,纯化倍数为７７．８倍的ＳＯＤ,其回收率为８５．４％．探讨了魔芋葡甘聚糖凝胶作为亲和载体的可能性及前景．     

UV-B辐射对拟南芥细胞周期G1/S期转变的影响

以同步化的拟南芥（Arabidopsis thaliana）根尖细胞为材料,研究了UV-B辐射对拟南芥细胞周期G1／S期转变的影响。细胞周期荧光显微图像分析表明,UV-B辐射延缓了拟南芥根尖细胞G1／S期的转变。基因表达的RT-PCR检测表明,在UV-B辐射下G1／S期转变的标志基因HistoneH4和E2Fa的表达受抑制,而G1／S期转变的抑制因子KRP2基因表达则受诱导上调。单细胞凝胶电泳检测结果表明,UV-B辐射引起拟南芥根尖细胞内积累大量的环丁烷嘧啶二聚体。以上结果表明,UV-B辐射抑制植物的生长可能受细胞周期和DNA损伤调控。     

Mip1对大鼠心肌细胞凋亡基因Bid转录调控作用的初探

目的:研究转录因子Mip1对大鼠心肌细胞H9C2凋亡相关基因Bid的转录调控作用.方法:以H9C2细胞基因组DNA为模板,扩增Bid核心启动子片段,将其克隆入荧光素酶报告基因质粒PGL3-Basic中,构建重组载体,并采用双酶切法、PCR法及基因测序对其进行鉴定.用脂质体转染法将该载体转入Mip1不同程度过表达的H9C2细胞,检测该细胞Bid基因启动子区的转录活性.结果:成功克隆Bid基因启动子区,双酶切、PCR和基因测序均显示PGL3-Basic-Bid promoter重组载体构建成功.荧光素酶相对活性检测显示在H9C2细胞中,随着Mip1转入的增多,Bid启动子区转录活性逐渐下降.结论:Mip1作为一个新的转录抑制因子,可以下调凋亡基因Bid的转录.