柚木无性系愈伤组织诱导及植株再生

以柚木优良无性系71-14组培苗节间茎段为材料,MS 为基本培养基,采用正交设计对6-BA、IBA、TDZ、NAA 等4个生长调节剂各4水平进行愈伤组织诱导,并以最佳组合使用不同浓度的 TDZ 进行柚木愈伤组织再生.结果表明：TDZ 对形成具再生能力的致密型愈伤组织影响最大,低浓度水平的 TDZ 和6-BA 更易形成致密型愈伤组织;以愈伤组织大小、诱导率和致密型所占比例采用隶属函数法评定得出最优的愈伤组织诱导培养基为 MS＋0．9 mg·L-16-BA＋0．04 mg·L-1 IBA＋0．02 mg·L-1 TDZ＋0．8 mg·L-1 NAA,愈伤组织诱导率达80．78％、平均直径1．65 cm,获致密型愈伤组织83．0％;得出优化的再生培养基为 MS＋0．132 mg·L-1 TDZ,分化率为34．22％;初步建立了以茎段为外植体的柚木优良无性系71-14的再生体系,为柚木转基因技术的研究提供技术支撑.     

短叶省藤种质离体培养保存研究

本文对短叶省藤种质的离体培养保存进行了探索性研究。结果表明：种质以丛芽形式,采用ＲＥＯ保存培养基,在温度１２．５℃和光照３００１Ｘ×１２ｈ／ｄ的保存条件下,可安全保存１８个月以上,保存率＞２５％,丛芽平均高生长小于２．２ｃｍ。种质保存一年后,转接至增殖或生根培养基,仍可诱导增殖和生根．结果表明离体保存具一定可行性,其保存模式可预定为：增殖培养２个月＋离体保存１８个月的循环模式．     

巨桉AGO基因家族的生物信息学分析

为了解巨桉(Eucalyptus grandis)中Argonaute (AGO)的功能, 经全基因组序列分析, 巨桉中存在14 个AGO基因家族成员, 基因长度为2676~3225 bp, 编码的蛋白质具有保守的Piwi、PAZ、DUF1785 结构域。巨桉EgrAGOs 基因可分为3 组, 内含子和外显子结构具有明显的组织特异性。组内成员核苷酸序列和氨基酸序列保守性较高, 同源性分别达到88.14% 和82.97%。EgrAGO基因分布于第2、4、7、8、10、11 条染色体上, 在进化过程中存在着串联复制和大片段基因复制机制。预测巨桉的大部分AGO 蛋白定位于细胞核和胞质中, 表现出偏碱性和亲水性, 具有较高的脂溶指数。基因表达分析表明, 桉树EgrAGO成员在不同组织中的表达有明显差异, 与木材形成相关的组织/ 器官中有较高的表达。这些为深入研究EgrAGO基因的功能奠定了基础。     

米老排的组织培养和快速繁殖

以米老排人工林成年优树当年生枝条茎段为外植体,建立了“以芽繁芽”的组织培养快速繁殖体系。丛芽诱导培养最快的无性系,经过3个月的培养,一个外植体可获得17．2个芽。在添加6-BA1．0mg·L-1的Ms培养基上增殖率最高,月增殖率为2．43。促进苗高生长的最有效培养基是Ms＋6-BA0．4mg·L-1＋GA30．4mg·L-1。生根培养基为1／2MS＋IBA0．4nag·L-1＋O．1g．L-1活性炭,生根率达81．8％以上,每株苗生根7．8条,平均苗高为1．2cm。经生根培养20d和目光温室炼苗15d后,试管苗移植入黄泥和泥炭土（4：1,刃功混合基质中,成活率达85％以上。     

农杆菌介导巨桉Eg5高效遗传转化

以巨桉(Eucalyptus grandis)无性系Eg5叶片为外植体, 探讨了农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)侵染时间、共培养pH值和共培养时间对瞬时转化效率的影响, 分析了不同筛选策略对遗传转化植株筛选效果的影响。结果表明, 外植体侵染45分钟, 共培养pH值为5.8, 共培养3天所得到的瞬时转化效率最高; 逐步提高卡那霉素(Km)浓度筛选转基因植株有效, 筛选率达到15%, 转化率达到0.26%。经过GUS染色分析和PCR检测, 证实为转基因植株。     

巨桉BRI1基因的克隆和表达分析

为了解BRI1基因在巨桉中的功能,采用PCR技术克隆了EgrBRI1基因,分析了EgrBRI1的生物信息学和亚细胞定位,并对EgrBRI1基因响应激素和胁迫的差异表达进行了分析。结果表明,EgrBRI1基因全长3 893 bp,编码1 197个氨基酸。EgrBRI1蛋白稳定,空间结构复杂,存在3个motifs,主要定位于细胞膜。茉莉酸甲酯和油菜素内酯(BR)处理后,EgrBRI1基因在叶片中的表达上升,而水杨酸处理则没有明显的变化。盐胁迫和冷胁迫下,EgrBRI1基因表达表现为先下降后上升的趋势。因此,EgrBRI1基因能快速对外施激素做出响应,并在巨桉抗逆方面发挥重要作用,这可能是通过对BR信号的响应来实现的。     

异株藤的离体快繁

1植物名称异株藤(Calamus dioicus)。 2材料类别胚。 3培养条件(1)胚芽生长培养基：MS+6-BA 2．0 mg·L一(单位下同)+4％蔗糖;(2)丛芽诱导培养基：MS+6-BA 4．0+IBA 1．0+NAA 1．0+4％蔗糖;(3)生根培养基1／2MS(大量元素减半)+IBA 0．5+NAA 0．5+3％蔗糖。培养基(1)和(2)加0．7％卡拉胶,培养基(3)加0．73％卡拉胶,pH 5．8±0．2。培养温度(28±2)℃,每天光照10 h,光照度为2 000 k。 4生长与分化情况 4.1 萌发果实大量成熟前一个半月采集近成熟果实,去除果肉得干净种子,用75％酒精浸泡30 s,0．1％升汞表面消毒加～30 min,无菌水冲洗4～5次,在超净台上用刀片将发芽孔打开后转接至培养基(1)。种子在培养基(1)上30 d,与田间播种相同,胚根先长出发芽孔,但受6-BA的作用,胚根长至0．5～1．0 cm即不再进一步生长。接种∞d,胚芽长出发芽孔,∞d长至1．5～2．0 cm高,即可切下胚芽转入丛芽诱导培养基(2)。 4.2 丛芽诱导在培养基(2)中,胚芽高生长明显减缓,基部开始横向膨胀生长,约40d分化出丛芽,丛芽诱导率为30％～35％。     

6-BA、IBA、2;4-D对杖藤组培增殖的影响

研究了6 BA、IBA和2,4 D对杖藤组培物增殖的影响。结果表明,6 BA对增殖芽数、丛芽率和母芽高均有显著的作用,IBA和2,4 D仅对增殖芽数有显著影响。适宜于增殖培养的激素浓度分别为6 BA4.0mg/L,IBA0.25mg/L,2,4 D0.25mg/L。以此激素浓度组合,连续增殖培养6～7代后,平均的增殖芽数可稳定在10个左右。     

不同光源对柚木组培苗生长发育的影响

该研究采用不同光源处理柚木组培继代苗,通过测定株高、叶宽、叶鲜重、全株干重、叶绿素含量和观察叶片上下表皮结构,研究不同光源对柚木组培苗生长发育的影响,并筛选适宜其快速生长发育的光环境。结果表明:不同光照下顶芽培养的植株高生长顺序为H_(FL)﹥H_(1RB)﹥H_S﹥H_(2RB)﹥H_(3RB)﹥H_D,茎段培养的腋芽高生长顺序为h_(FL)﹥h_S﹥h_D﹥h_(1RB)﹥h_(2RB)﹥h_(3RB)。LED红蓝组合灯(2RB、3RB)处理下植株最大叶宽显著大于荧光灯(FL)、全光谱灯(S)和无补光设备(D)处理,并随RB光强增加,最大叶宽及叶鲜重显著增加。全株干重以D和S光照处理显著低于其它光照处理。RB系列和S光照处理下的叶绿素总含量高于对照FL和D处理组。2RB和3RB光照处理下叶片的上表皮细胞不规则多角形,相互镶嵌排列,其它光照处理下上表皮细胞呈圆形。下表皮气孔数量在有补光设备处理(S、RB、FL)时是无补光设备处理(D)的1.5倍以上,2RB和3RB光照处理下气孔张开度大于对照FL和D处理组,且保卫细胞呈井型突起。参试光源中,柚木组培苗增殖阶段选择荧光灯或全光谱灯为好,高生长显著,腋芽分化和生长快,有利于提高增殖率;而RB红蓝组合灯(3RB、2RB)适合壮苗培养,叶大苗壮,全株生物量大,且叶表面结构发育成熟,有利于提高光合作用。     

油菜素内酯对巨桉组培中不定根诱导、苗木生长和茎基部细胞结构的影响

以巨桉优良无性系EG5和GL1组培苗为材料,在生根培养基中分别加入0、0.005、0.01、0.05、0.10、0.20 mg.L-1的油菜素内酯,研究其对桉树组培苗中不定根的诱导、茎的生长以及茎基部细胞分化的影响。结果表明：油菜素内酯对巨桉无性系EG5的生根率和苗高具有显著影响,无性系EG5在含有0.005 mg.L-1油菜素内酯的生根培养基中达到最高为76.6％的生根率,同时组培苗的苗高随着油菜素内酯浓度的增加而呈现出逐渐降低的趋势。对于巨桉无性系GL1,在生根培养基中添加0.05 mg.L-1油菜素内酯达到最高为88.3％的生根率,不同浓度的油菜素内酯对苗高没有显著影响。同时也发现油菜素内酯明显抑制了无性系EG5不定根的根长,随着其浓度的增加根长逐渐变短;而根条数表现为低浓度时无显著影响,在高浓度时显著性降低,且油菜素内酯对侧根的诱导和分化不起作用。另外通过对无性系EG5生根植株基部的组织切片和化学染色分析表明,油菜素内酯在0.10 mg.L-1时能促进桉树基部的形成层和木质部的分化,这可能是抑制不定根诱导和分化的原因之一。