基因工程技术在食品品质改良中的应用

概述了用基因工程技术改良食品的食用品质,提高食品加工性能的研究和应用现状。     

发酵食品中氨基甲酸乙酯形成机理和快速检测方法研究进展

氨基甲酸已酯(EC)是一种广泛存在于酒类、腐乳和酱油等发酵食品中的2A级致癌物,近年来其安全性引起研究者关注。为了更好地监测和控制发酵食品中的EC含量,从EC污染情况出发,分析了发酵食品中EC的形成原因和对应的控制方法,系统阐述了目前发酵食品中EC的快速检测方法,以期为发展高效、快速、经济的EC快速检测方法提供一定的参考。     

抗克伦特罗单链抗体表达载体的构建与鉴定

为构建克伦特罗(Clenbuterol, CBL)单链抗体(scFv)表达载体, 实现其在大肠杆菌中的表达。以pCANTAB5E- CBL质粒为模板, 扩增CBL的scFv基因, 与pPICZaA载体重组, 然后以重组质粒pPICZaA-scFv为模板扩增scFv及其相连的6 个组氨酸(6×His)片段, 再与载体pBV220连接, 转化大肠杆菌DH5a, 阳性克隆质粒经酶切和PCR鉴定后进行目的片断的序列测定。重组菌经温度诱导表达重组单链抗体, 并通过SDS-PAGE和Western blotting对其鉴定。采用竞争ELISA检测重组单链抗体的抗原结合活性。结果表明重组质粒pBV220-scFv含有插入片段, 与原序列的同源性达99.8%。重组蛋白的分子量接近37 kD, 能够被抗His标签单克隆抗体特异性识别且可被游离的CBL竞争性抑制, IC50值为4.55 ng/mL。这说明我们成功构建了重组质粒pBV220-scFv并实现了其在大肠杆菌中的表达, 为进一步进行CBL免疫法快速检测奠定了一定的基础。     

魔芋葡甘聚糖的分光光度法测定

魔芋为天南星科(Araooae)魔芋属(Amorphophallus blume)植物,是唯一大量提供葡甘聚糖(Glucomannan,下称GM)的新兴特种经济作物。魔芋GM是由D-葡萄糖和D-甘露糖主要通过β-1,4糖苷键结合的高分子多糖,在食品、医药、石油、化工、轻纺等工业中有着重要的用途。GM的定量测定虽有过甘露糖腙重量法和斐林试剂沉淀     

树状分子在提高免疫分析性能方面的应用进展

基于抗原-抗体识别的免疫分析技术在小分子化学性污染物监测领域占有重要地位,已成功应用于农药、兽药、生物毒素等的快速检测,为保障食品安全发挥了重要作用.但是,如何提高小分子半抗原的免疫原性及抗体的亲和力仍然是制约该领域发展的关键技术瓶颈.树状分子作为一类新型的高分子化合物,具有分子组成明确、结构规整、高度支化、纳米尺寸、单分散性以及表面呈现高密度功能团等众多优良的结构特性和良好的组织相容性,在小分子免疫分析领域具有潜在的应用优势.本文主要综述了树状分子作为载体在抗体制备及免疫分析方面的应用,重点介绍了树状分子作为载体在免疫原及包被原制备、作为免疫佐剂提高抗原免疫原性以及作为信号放大载体在提高免疫分析灵敏度等方面的研究现状,最后对其在小分子化学性污染物免疫检测领域的应用前景进行了评述,期望能为本领域研究人员提供借鉴.     

枯草芽孢杆菌SA-22 β-甘露聚糖酶的纯化及其特性

利用硫酸铵沉淀、羟基磷灰石柱层析、Sephadex G-75凝胶过滤和DEAE-52离子交换柱层析的方法,将枯草芽孢杆菌SA-22 β-甘露聚糖酶纯化了30.75倍,同时,该酶比活达到3478056 u/mg,收率达到23.43%。利用SDS-PAGE凝胶电泳和Sephadex G-75凝胶过滤的方法测得枯草芽孢杆菌SA-22 β-甘露聚糖酶的分子量分别为38 kD和34 kD。实验发现该酶的最适pH为6.5,在pH 5～10的范围内稳定;该酶最适温度为70℃,在50℃保温4h后其活力不变,在60℃保温4 h后剩余酶活为74.2%,70℃的酶活半衰期为3h。实验还发现Hg²⁺对酶活力有明显抑制作用。该酶对槐豆胶和魔芋胶的K_m和V_max值分别为11.30mg/mL, 4.76mg/mL和188.68(μmol·mL^-1·min^-1), 114.94(μmol·mL^-1·min^-1)。     

枯草芽孢杆菌β-甘露聚糖酶活性中心氨基酸的化学修饰

运用化学修饰方法对枯草芽孢杆菌β-甘露聚糖酶活性中心的结构进行了研究。结果表明,除了色氨酸和巯基(Cys)外,羧基(Asp/Glu)和丝氨酸残基亦是该酶活性必需氨基酸残基;尽管组氨酸残基对酶活性的维持有重要作用,但不位于酶的活性中心。     

花魔芋球茎发芽抑制物质的提取、分离与鉴定

从休眠花魔芋球茎中获得挥发性、酸性、酚类、碱性和中性５类提取物,分别用它们及其硅胶薄层层析带处理小白菜种子和已解除休眠的魔芋种子,其中酸性提取物对两种种子发芽均有显著的抑制作用。酸性提取物用ＤＥＡＥ－纤维素柱层析和硅胶薄层层析分离纯化,气谱－质谱联用仪鉴定含有脱落酸、阿魏酸和油酸。用其外源有机酸溶液分别处理已解除休眠的魔芋球茎,ＡＢＡ和阿魏酸对球茎顶芽萌发及生长有明显的抑制作用。     

枯草芽孢杆菌SA-22β-甘露聚糖酶的纯化及其特性

利用硫酸铵沉淀、羟基磷灰石柱层析、SephadexG 75凝胶过滤和DEAE 5 2离子交换柱层析的方法 ,将枯草芽孢杆菌SA 2 2 β 甘露聚糖酶纯化了 30 75倍 ,同时 ,该酶比活达到 34780 5 6u mg ,收率达到 2 3 4 3%。利用SDS PAGE凝胶电泳和SephadexG 75凝胶过滤的方法测得枯草芽孢杆菌SA 2 2 β 甘露聚糖酶的分子量分别为 38kD和34kD。实验发现该酶的最适pH为 6 5 ,在pH 5～ 10的范围内稳定 ;该酶最适温度为 70℃ ,在 5 0℃保温 4h后其活力不变 ,在 6 0℃保温 4h后剩余酶活为 74 2 % ,70℃的酶活半衰期为 3h。实验还发现Hg2 对酶活力有明显抑制作用。该酶对槐豆胶和魔芋胶的Km 和Vmax值分别为 11 30mg mL ,4 76mg mL和 188 6 8(μmol·mL- 1 ·min- 1 ) ,114 94(μmol·mL- 1 ·min- 1 )     

重组乙酰胆碱酯酶的表达及其分子进化研究进展

乙酰胆碱酯酶(Acetylcholinesterase,AChE)是酶抑制法检测农药残留的核心试剂。但天然提取的AChE存在含量低、纯化困难、稳定性差等不足,因此,高性能的重组AChE制备成为研究学者关注的热点。文中综述了重组AChE的表达、和分子进化等方面的研究成果,并指出酶定向进化策略与表面展示技术结合是重组AChE活性改造的未来趋势。