红菜薹春化相关基因的克隆与表达

红菜薹是一种不经春化处理就可开花的天然早花突变体.根据已报道的拟南芥和芸薹属植物春化相关基因的保守区域设计引物,通过PCR和RT-PCR方法从红菜薹中克隆得到了4个春化相关的关键基因片段:BrFRI、BrFLC、BrVIN3、BrSOC1,获得BrFRI起始密码子附近的关键序列,其中BrVIN3基因序列为首次报道,含有PHD区关键区域.Northern和半定量RT-PCR表达分析表明:BrFRI的表达不受春化作用的影响,BrFLC受春化作用的抑制,BrVIN3和BrSOC1受春化作用的诱导.     

CRISPR/Cas9介导的USP30基因敲除细胞系的建立及其对塞内卡病毒增殖的影响

【目的】利用规律成簇的间隔短回文重复序列/Cas9核酸酶（clustered regularly interspaced short palindromic repeats/Cas9 nuclease,CRISPR/Cas9）技术建立USP30基因敲除的人胚胎肾细胞（human embryonic kidney 293T cells,HEK-293T）细胞系,为开展宿主泛素特异性蛋白酶30（ubiquitin-specific protease 30,USP30）蛋白的功能研究建立了细胞模型;同时,初步探究USP30蛋白在病毒感染过程中的作用。【方法】根据Ensemble数据库查询USP30基因序列,定位USP30在基因组中不同转录本重叠区的第一个外显子段,设计并合成2对引导RNA （single guide RNAs,sgRNA）,分别构建在pX459载体中;将pX459-USP30-sgRNA质粒转染HEK-293T细胞,并用嘌呤霉素处理,筛选出转染阳性的细胞,然后通过有限稀释法筛选单克隆细胞,通过Western blotting及测序检测USP30基因的敲除。通过Western blotting及实时荧光定量PCR分析比较塞内卡病毒（Senecavirus A,SVA）在野生型和USP30基因敲除HEK-293T细胞中的复制差异。【结果】Western blotting及测序证实USP30基因敲除单克隆细胞系构建成功。进一步实验发现,SVA在USP30基因敲除细胞中的复制水平显著低于野生型细胞。【结论】成功构建USP30基因敲除的HEK-293T细胞系,首次证明USP30对SVA的复制具有促进作用,为进一步揭示USP30相关免疫反应和SVA感染过程的作用机制提供了良好的细胞模型,也为开展宿主USP30蛋白调控病毒复制的机制研究提供了关键工具和一定的理论依据。     

植物同源结构域指蛋白在拟南芥等十字花科植物春化作用途径中的功能

春化低温处理可以使拟南芥等十字花科植物提前开花,该过程中涉及到一个重要的植物同源结构域指(PHD-finger)蛋白VERNALIZATION INSENSITIVE3(VIN3)。PHD-finger结构域是真核生物中一种进化保守的锌指结构域,通常参与蛋白质之间的相互作用,特别是对核小体组蛋白进行甲基化、乙酰化、磷酸化等修饰。在春化处理过程中,VIN3及其同源基因编码的蛋白都具有PHD-finger结构域,该结构域通过对开花抑制基因FLOWERING LOCUS C染色质组蛋白进行H3K9、H3K27甲基化、H3K9和H3K14去乙酰化等修饰,调节FLC染色质结构状态,使其从松弛状态转变为高度凝缩状态而关闭其功能,从而影响FLC转录活性进而促进开花。以下综述了拟南芥等十字花科植物春化作用途径中PHD-finger蛋白的功能,并且概述了春化作用机制。     

自然杀伤细胞对妊娠期糖尿病患者并发高脂血症的影响

目的：观察自然杀伤细胞（NK 细胞）对妊娠期糖尿病患者并发高脂血症的影响。方法：选择2013 年2月至2015 年4 月在我 院确诊的妊娠期糖尿病高脂血症患者95 例,作为研究组,同期选择体检健康孕妇100 例,作为对照组,对比两组的血糖、糖化血 红蛋白、身体质量指数（BMI）、总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、白 细胞介素-2（IL-2）、IL-6、干扰素-r（IFN-r）、NK 细胞及细胞亚型,并采用Person相关性分析NK细胞与血脂的相关性。结果：①研 究组空腹血糖、餐后2 h 血糖、糖化血红蛋白、BMI均明显高于对照组,差异具有统计学意义（P<0.05）;②研究组TC、TG、LDL-C 均明显高于对照组,HDL-C明显低于对照组,差异具有统计学意义（P<0.05）;③研究组IL-2、IFN-r明显低于对照组,差异具有统 计学意义（P<0.05）;IL-6 明显高于对照组,差异具有统计学意义（P<0.05）;④研究组的NK 细胞数量、CD4+/ CD3+、CD4+/ CD8+、 CD56++CD4+/ CD3+均低于对照组的（P<0.05）;CD8+/ CD3+、CD18+/ CD8+、CD19+/ CD3+均高于对照组的（P<0.05）;两组CD28+/ CD8+差异无统计学意义（P＞0.05）。⑤NK 细胞数量与TC、TG、LDL-C水平均呈负相关（r=-0.527、-0.598、-0.485）,NK 细胞数量与 HDL-C 水平呈正相关（r=0.528）。结论：NK 细胞在妊娠期糖尿病孕妇中数量减少,活性也降低,可能与参与免疫反应的NK细胞 不同表型细胞含量发生变化,导致血脂调节失衡,引发高血脂症的过程有关。     

拟南芥春化作用相关基因FLC的表达调控及天然早花突变体的研究进展

植物开花是从营养生长到生殖状态的重要发育转变,是多种内在因子和环境因素共同作用的结果。在拟南芥开花调控网络中,开花抑制基因FLC处于枢纽地位。FLC的表达受许多来自环境和生长发育的信号调控,主要包括：PAF1复合体、SWR1复合体成员,FRI依赖途径、自主途径和春化作用途径基因。本文主要综述了影响FLC表达的春化相关基因及天然早花突变体的研究进展,并根据最新的研究成果提出该研究领域的研究方向和重点。     

抗凝血蛋白的抗凝溶栓机制

自然界中存在着大量具有抗凝溶栓活性的生物大分子,如水蛭素、蚓激酶等。这些生物大分子主要是通过抑制凝血酶及凝血因子活性,水解纤维蛋白或纤溶酶原,或是抑制血小板聚集来达到抗凝溶栓的作用。该文对这些活性物质的抗凝溶栓机制进行综述。