严重急性呼吸综合征(SARS)冠状病毒N蛋白基因的表达及其初步应用

SARS coronavirus N gene w as expressed by Ecoli expression systemThe expressed protein was p urified and an ELISA method was se t up for detection of SARS virus i nfected patient's serum antibodyT he recombinant SARS coronavirus N protein offers an efficient way fo r serological diagnosis and is use ful for epidemiological study and vaccine development     

严重急性呼吸综合征(SARS)患者不同组织中冠状病毒的分离和鉴定

严重急性呼吸综合征(SARS)自2002年11月在中国广东爆发后,已迅速蔓延成为全球性传染疾患。为了了解SARS冠状病毒的特征,对先前SARS冠状病毒PCR检测呈阳性的来自广东的3份尸检肺组织标本、2份尸检脾组织标本：来自北京的2份咽拭子标本和1份血清标本,利用10种不同的细胞系分离病毒。结果显示,上述标本在感染细胞后,分别可在293、Vero—E6、Vero、RD和HeLa细胞系中产生细胞病变(CPE)。不同标本在上述细胞系中致CPE的能力不同,但CPE出现的时间和病变形态学特征无显著性差异。以恢复期SARS病人血清为抗体,用间接免疫荧光法对感染后细胞培养的检测,冠状病毒RT-_PCR对感染后细胞RNA的检测,初步证明分离的病毒为冠状病毒。结果再次证明冠状病毒为SARS的病原,它具有较广泛的器官分布和细胞感染能力。血清中SARS冠状病毒的分离,高度提示在SARS发病过程中存在有病毒血症。     

在传染性非典型肺炎患者组织和血液中发现冠状病毒

用RT-PCR从广东两例传染性非典型肺炎(非典型肺炎)死亡病例的肺和脾标本中,以及北京、辽宁和宁夏非典型肺炎患者血清中,扩增出冠状病毒核苷酸序列。这些PCR产物为冠状病毒RNA聚合酶基因部分片段,所有测定的序列和国内外SARS病毒序列相同。这些发现提示,冠状病毒和非典型肺炎关系密切,有助于确定我国非典型肺炎的病因。所建立的套式PCR方法可以用于检测临床标本。由于血液中存在SARS病毒,进行血清操作时需要注意安全保护。     

子宫颈糜烂病毒病因的探讨

491份宫颈拭子病毒分离结果表明:糜烂宫颈单纯疱疹病毒(HSV)分离阳性率(30.8％)是正常宫颈(2.6％)的11.8倍,用人干扰素治疗一个疗程后,病毒分离率下降至疗前的1/4.36例糜烂宫颈活体组织DNA分子杂交表明,乳头瘤病毒16型(HPV-16)阳性者占52.8和,HPV-18占17.9％,HPV-6B占28.1％,HPV-11占7.7％,251例宫颈糜烂患者经人(?)D型基因工程干扰素双盲对比治疗后,总有效率达93.8％,显效率达60％,分析临床疗效与HSV分离率的变化表明,临床有效病例中有35％(49/140)在治疗后病毒阴转,有57％在疗前疗后均未分离出HSV,有5％在疗前疗后保持阳性不变,有2.9％疗前阴性,疗后阳性,上述结果表明,HSV和HPV与慢性宫颈炎有一定关系。     

金属催化剂有效快速裂解SARS冠状病毒和其他微生物

目的研究两种金属催化剂Ag/Al2O3和Cu/Al2O3对SARS冠状病毒和其他呼吸道疾病传播的阻断作用。方法100μL 106TCID50/mL SARS-CoV,100μL 106PFU/mL。表达重组仓鼠朊蛋白的杆状病毒和106大肠杆菌分别缓慢地滴加至两种圆形金属催化剂的表面,吸附5~20 min。使用不同培养液洗涤金属催化剂表面,检测洗涤物的病毒感染性和细菌的增殖。结果病毒和细菌分别吸附5和20 min后,SARS-CoV和杆状病毒的病毒滴度下降到非常低的水平,甚至难以检测到;大肠杆菌组经培养后无克隆生长。5 min吸附后,杆状病毒表达的重组PrP的表达下降到21.8%;20 min吸附后,没有PrP的表达。电镜检测发现大肠杆菌的细胞壁崩解,细胞破碎。结论与金属催化剂Ag/Al2O3和Cu/Al2O3表面接触后,破坏了SARS-CoV,杆状病毒和大肠杆菌的复制增殖能力。两种金属催化剂利用空气中的氧分子有效的杀灭吸附于其表面的病毒和细菌,有希望用来作为医院、家庭和公共场所的空气消毒。     

严重急性呼吸综合征(SARS)冠状病毒刺突蛋白基因片段的表达及其初步应用

SARS virus spike gene fra gment was expressed by Ecoli expr ession systemThe fragment enclose s major neutralization epitope of the virusThe expressed protein wa s purified and an ELISA method was set upBy using the recombinant,tw elve patients' sera were detected The recombinant SARS coronavirus s pike protein offers an efficient wa y for serological diagnosis and is useful for epidemiological survey and vaccin e development     

人白细胞介素—2 cDNA在大肠杆菌中的高效表达及其纯化

白细胞介素—2(IL-2),过去曾称为T细胞生长因子(TCGF),是在促有丝分裂素或特异性抗原刺激下,由辅助性T细胞产生的一种淋巴因子,能在体外长期维持T细胞生长。它可调节免疫反应,促进细胞毒性T细胞和NK细胞增殖,诱生γ干扰素。因而是治疗肿瘤和免疫缺陷病人的非常有希望的药物之一。     

人源抗严重急性呼吸综合征(SARS)病毒基因工程抗体的初步研究

严重急性呼吸道综合征(severe acute respiratory syndrome,SARS)或称传染性非典型肺炎,已严重威胁人民健康和生命安全。快速研制一种可用于紧急预防SARS病毒感染的基因工程抗体预防制剂迫在眉睫。为此,运用噬菌体表面呈现技术,从多个SARS病人恢复期血中获得淋巴细胞,通过基因工程手段,构建了人源抗SARS病毒基因工程抗体文库,并筛选获得37株特异抗SARS病毒基因工程Fab抗体,其中ll株人源抗体结合基因工程重组的SARS病毒核(N)蛋白,其中的1株在Western blot分析中与SARS病毒结合,识别SARS病毒N蛋白线性位点。对所获抗体的功能鉴定及基因分析正在进行中。人源抗SARS病毒基因工程抗体的获得,将对SARS疾病的特异性预防,治疗和诊断提供新的途径。     

我国痘苗病毒天坛株基因组左端限制酶位点的变异

本文用分子杂交及酶谱分析的方法,证明了我国痘苗病毒天坛株基因组Hind Ⅲ Dc片段来自Hind Ⅲ C片段,是由于后者Hind Ⅲ酶切位点变异造成的。     

应用P_RP_L串联启动子和CIts857调控基因高效表达人γ干扰素

应用DNA重组技术,将去信号肽的人γ干扰素(HuIFN_γ)cDNA插到质粒p HE 6的P_RP_L启动子下游。该质粒含有CIts857抑制子基因。转化大肠杆菌DH5a后,通过升温诱导法,即将培养温度从30℃升到42℃,人γ干扰素cDNA可获得高效表达。分子量约为17.5kd,滴度可达2.4×10~3单位/升菌液。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳后的扫描表明,γ干扰素的表达量约占细菌可溶性蛋白总量的30％。对细菌生长与干扰素表达的关系做了动力学研究。本文对重组人γ干扰素的发酵生产提供了技术基础。