Preliminarily functional analysis of a cloned novel human

ADAM is a family of type I integral membrane proteins which are characterized by sharing a disintegrin and metalloprotease domain and involved in many important physiological processes such as fertilization, neurogenesis and inflammatory response. A novel human ADAM gene--ADAM29, which was cloned in our laboratory, is exclusively expressed in human testis andcontains a potential fusion domain. A full-length cDNA of ADAM29 was obtained by using multiple-step PCR. Phylogenetic tree of known mammalian ADAMs specifically expressed in testis was reconstructed. Polyclonal antiserum was raised by immunizing the rabbits with sub-peptide of ADAM29 (Leu268-Asp374) as immunogen. The result of immunohistochemical test on human testis showed that ADAM29 is expressed in different stages of spermatogenesis and in interstitial cells. ADAM29 may play a certain role in the signal transduction during the maturation of tes-tis-associated cells.     

The interaction between ADAM22 and 14-3-3β

ADAM family consists of a number of transmembrane proteins that contain a disintegrin and metalloprotease domain. ADAMs are involved in a highly diverse set of biological processes, including fertilization, neurogenesis, myogenesis and inflammatory response. The ADAM proteins have both cell adhesion and protease activities.Adam22 is highly expressed in human brain. Theadam22-/- mice presented severe ataxia and died before weaning, but the function of ADAM22 is still unknown. 14-3-3 β interacting with ADAM22 was detected by using yeast two-hybrid assay. The specificity of interaction between ADAM22 and 14-3-3β was proved byin vitro binding assay and immunoprecipitation. The major 14-3-3β binding site was located in the last 28 amino acid residues of ADAM22 cytoplasmic tail. Protein 14-3-3β is abundant and plays an important role in mediating cell diffusion, migration and cell cycle control. The interaction of ADAM22 and 14-3-3β suggests that the ADAM22 may play a crucial role in neural function and development.     

HTLV-Ⅰ tax反义RNA逆转小鼠神经纤维瘤

来源于转基因小鼠 (HTLV ⅠLTRtax基因 )的神经纤维瘤细胞系的细胞中 ,外源基因HTLV I tax高表达产生mRNA和蛋白质 ,使细胞出现转化表型 .当将反向插入了HTLV I taxcDNA的逆转录病毒导入这种细胞后 ,转录生成的反义RNA可抑制tax基因的表达 ,mRNA和蛋白质均减少 40 %强 ;细胞的形态和生长特征也随之发生明显变化 ;原先由Tax蛋白质激活的基因如GM -CSF ,IL -6,LT/TNF (蛋白质水平 ) ,c -myc和LIF(mRNA水平 )等的表达均下调 ;M -CSF(蛋白质水平 )和原癌基因c src(mRNA水平 )的表达上升 ;β 肌纤蛋白mRNA则不受影响 .这些变化可能是由于tax反义RNA降低了细胞内Tax蛋白质浓度的缘故 .这表明HTLV ⅠTax蛋白质维持转化细胞的形态、生长和增殖起关键性作用 ;由Tax蛋白质激活的细胞内源基因的表达受阻 ,则是转基因小鼠发生神经纤维瘤的原因 .     

鉴别差异表达基因的新方法──抑制消减杂交法(SSH)

抑制消减杂交法（SuppressicSubtractiveHybridization,SSH）是最近（1996）报道的能有效鉴别两个不同细胞群差异表达基因的新方法［1,2］。该方法是以抑制PCR和消减杂交法为基础,在一轮反应中实现mRNA的均等化和消减步骤。本文对SSH法的原理、优缺点作了介绍,并与其它检测差异表达基因的方法,如mRNA差别显示法（DDRT－PCR）、代表性序列差异分析（RDA）比较,认为SSH方法具有高效快速、高敏感性和假阳性低等优点。同时,625个克隆中有很大一部分是转录物丰度很低的基因,40％的克隆可能为新的基因。因此,SSH可作为鉴别差异表达基因和克隆新基因的有效方法。     

神经干细胞研究进展

神经干细胞(neural stem cells, NSCs)是中枢神经系统中保持分裂和分化潜能的细胞,对它的研究和应用已成为近年来脑科学研究的一个重要领域.神经干细胞体外培养技术的建立提供了对其进行研究的有力手段.目前的研究主要集中于神经干细胞在脑中的起源、分布及在中枢神经系统疾病治疗中的应用等方面.     

白血病抑制因子mRNA的表达受雌激素的调控

运用RT—PCR方法检测了体外培养的大鼠成骨样细胞Ros17／2．8在17β雌二醇(E2)刺激前后细胞中一些细胞因子的mRNA水平．发现在E2刺激后,细胞中白血病抑制因子（LIF）的MRNA水平明显上升,且呈现E2浓度依赖的特点．该结果提示,LIF可能参与替代性治疗过程中雌二醇对于骨质疏松症的缓解作用．这为进一步研究细胞因子与骨质疏松症的相关性,阐明细胞因子在骨代谢中的作用打下了基础,并将有利于发展治疗骨代谢疾病的药物．     

血小板生成素基因治疗血小板减少症的研究

血小板生成素 (TPO)有望成为特异性治疗血小板减少症的理想药物 .对TPOcDNA离体细胞表达和基因治疗血小板减少症进行了初步尝试 :构建了pcDNA3 TPO高表达质粒 ,基因转移离体细胞 ,检测表达产物rhTPO具有完整的生物学活性 ;pcDNA3 TPO分别注射正常小鼠和血小板减少症小鼠 ,小鼠血浆中检测到rhTPO的表达 ,并且正常小鼠血小板水平上升至 1 .9倍 ,血小板减少症小鼠血小板降低的幅度减小、恢复的速度加快并达到原来值的 1 .8～ 2 .0倍 .该结果为TPO基因治疗血小板减少症提供了实验依据 .     

水稻条叶枯病毒(RStV)基因组组分4的克隆与序列分析

利用RTPCR技术合成并扩增了水稻条叶枯病毒(RStV)中国云南分离物基因组组分4的全长cDNA,将PCR产物克隆在载体pCRII上,并进行全序列测定,所得核苷酸序列及推测的氨基酸序列与日本分离物T进行比较。结果表明,在核苷酸水平,两分离物的vORF、vcORF及基因间非编码区序列的同源性分别为94.9%、94.1%、86.1%,5’端非编码区序列相同,而3’非编码区同源性为96.1%,仅有两个核苷酸不同;在氨基酸水平,vORF及vcORF编码蛋白的同源性分别为99.4%和98.3%。可见,编码区的大小及其氨基酸序列和两末端序列都是很保守的。因此,中国云南分离物Y与日本分离物T可能有很近的亲缘关系。     

四种抗寄生虫药物的诱变性的细菌检测试验

我们以前报道了化学诱变物的细菌检测试验,就是用鼠伤寒沙门氏菌的突变菌株与大鼠肝脏微粒体组成检测系统,观察待检化学物质诱发突变菌株出现回复突变的菌落数,以判定有无诱变性(Ames法)。此后,我们用哺乳动物细胞的姐妹染色单体互换(SCE)为指标,检测化学物质的诱变性,所得结果与细菌检测法符合一致。这表明细菌检测法确可作为化学诱变物的初筛和预警系统。本实验就是用这种方法来鉴定一些常用的抗寄生虫药物和新合成的试验性药物有无诱变性。