白血病抑制因子mRNA的表达受雌激素的调控

运用RT-PCR方法检测了体外培养的大鼠成骨样细胞Ros 17/2.8在17β雌二醇(E2)刺激前后细胞中一些细胞因子的mRNA水平。发现在E2刺激后,细胞中白血病抑制因子(LIF)的mRNA水平明显上升,且呈现E2浓度依赖的特点。该结果提示,LIF可能参与替代性治疗过程中雌二醇对于骨质硫松症的缓解作用。这为进一步研究细胞因子与骨质疏松症的相关性,阐明细胞因子在骨代谢中的作用打下了基础,并将有利于发展治疗骨代谢疾病的药物。 Abstract　With RT-PCR techniques,we examined the expression pattern of some cytokines in rat osteoblast-like cell line ROS 17/2.8, which was stimulated with 17 β-estradiol. After treatment, the obvious increase of LIF(Leukaemia Inhibitory Factor)mRNA level in the cell was observed. It indicates that LIF may involve in the estrogen replacement treatment of osteoporosis. This work will found the base for clarifying the relationship between expression of cytokines and bone remoldeling, and may even facilitate the developement of drug for bone metabolism abnormality.     

小鼠腹腔内腺病毒介导的基因表达和分布

本文报道了重组腺病毒——带有报道基因1acZ的Ad/RSV-β-gal注入小鼠腹腔后,在胃、小肠、大肠、子宫、肝、脾、膀胱、体壁、膈和睾丸的腹膜面均出现被X-gal染成蓝色的细胞,腹膜面下未见染色细胞。结果表明重组腺病毒可广泛感染腹腔内的组织并使外源基因表达,但不扩散出体腔。另一带有单钝疱疹病毒胸苷激酶基因(HSV-tk)的重组腺病毒Ad/RSV- tk,注入小鼠腹腔后并给以药物ACV,未发现急性毒性反应。在此基础上,讨论了TK/ACV 系统对腹腔内肿瘤作基因治疗的可行性。     

鼠伤寒沙门氏菌/微粒体系统检测三十六种化学物质的诱变性试验

近年来,Ames 等人用鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium)的组氨酸缺陷型突变菌株建立了化学诱变物的检测系统。由于化学物质对微生物的诱变作用,     

鼠伤寒沙门氏菌/微粒体系统和姐妹染色单体互换检验化学物质致癌性的试验及其比较

用鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium)的组氨酸缺陷型突变株TA1535、TA1537、TA1538、TA98和TA100,结合大鼠肝脏微粒体酶系(“S-9”)作为化学诱变剂的检测系统,测定了农药、药物、食品添加剂、化学试剂和环境污染物共36种化学物质的诱变作用。所用方法基本参照Ames等人(1975)所用的纸片点样测定和平皿菌落计数的方法。大鼠肝脏微粒体酶系是先用五氯联苯注入雄性大鼠腹腔,5天后杀鼠取肝,冰冻离心     

rhLTα衍生物的构建,细菌表达和纯化

应用ＰＣＲ方法,构建了Ｎ端缺失２７个氨基酸的重组人淋巴毒素α衍生物ｃＤＮＡ,将其插入表达载体后转化大肠杆菌并诱导表达。表达产物以包涵体形式存在,其量占菌体总蛋白的６０％～８０％。溶解包涵体,将产物复性并纯化后,其纯度达９５％以上。以小鼠Ｌ９２９细胞检测表达产物的细胞毒活性,比活性高于２×１０８国际单位每毫克蛋白质。抗人淋巴毒素的单克隆抗体能中和它的细胞毒活性。初步研究了这种人淋巴毒素衍生物的体外和体内抗肿瘤活性。     

Preliminarily functional analysis of a cloned novel human gene ADAM29

ADAM is a family of type I integral membrane proteins which are characterized by sharing a disintegrin and metalloprotease domain and involved in many important physiological processes such as fertilization, neurogenesis and inflammatory response. A novel human ADAM gene--ADAM29, which was cloned in our laboratory, is exclusively expressed in human testis and contains a potential fusion domain. A full-length cDNA of ADAM29 was obtained by using multiple-step PCR. Phylogenetic tree of known mammalian ADAMs specifically expressed in testis was reconstructed. Polyclonal antiserum was raised by immunizing the rabbits with sub-peptide of ADAM29 (Leu268-Asp374) as immunogen. The result of immunohistochemical test on human testis showed that ADAM29 is expressed in different stages of spermatogenesis and in interstitial cells. ADAM29 may play a certain role in the signal transduction during the maturation of testis-associated cells.     

人淋巴毒素基因在中国仓鼠细胞中表达

将人淋巴毒素(HuLT)基因插入哺乳动物细胞表达载体质粒p91023,经磷酸钙-DNA共沉淀法转入中国仓鼠二氢叶酸还原酶缺陷型(CHO-DHFRˉ)细胞,获得了DIIFR 细胞克隆。RNA点渍杂交分析和MTT染料还原测定淋巴毒素的生物活性,均证明HuLT基因在DHFR 细胞里巳被转录和转译,并被分泌到细胞外。其杀伤靶细胞——L929细胞的生物活性不低于每毫升培养液200单位。     

人新基因ADAM29功能的初步分析

ADAM家族是一类具有去整合素域和金属蛋白酶域的Ⅰ型跨膜蛋白,广泛参与各种重要的生理过程,如精卵结合、神经系统发育、成肌细胞融合以及炎症反应等.ADAM29是一个新发现的人类基因,它特异性地表达于人睾丸组织中,包含一段潜在的融合蛋白域.用PCR方法克隆了其全长cDNA,并比较分析了在哺乳动物睾丸组织中专一表达的ADAM家族成员的氨基酸顺序.此外,以ADAM29的一个肽段(Len268~Asp374)制成融合蛋白后作为抗原制备多克隆抗体.人睾丸组织切片免疫组织化学的检测结果表明,ADAM29分布于多种细胞内,但主要集中于间质细胞,因而推测ADAM29可能与信号传导有关.     

ADAM22蛋白与14-3-3β蛋白之间的相互作用

ADAM家族是一类具有去整合域和金属蛋白酶域的跨膜蛋白, 广泛参与各种重要的生理过程, 如精卵结合、神经系统发育、成肌细胞融合以及炎症反应等. 该家族蛋白具备潜在的粘连和蛋白酶活性. adam22在脑部高度表达, 基因剔除小鼠则出现严重的共济失调, 并在断奶前死亡, 但其作用机制不详. 用酵母双杂合系统筛选到与ADAM22相互作用的蛋白质14-3-3b, 离体结合实验、免疫共沉淀进一步证实了ADAM22与14-3-3β蛋白相互作用的专一性. ADAM22胞内部分系列缺失实验表明, C端第864~892氨基酸残基是14-3-3β的结合基序. 14-3-3β在脑部大量表达, 具有介导细胞的扩散、迁移及调节细胞周期等重要功能. 因此, 本实验证实这两种蛋白质之间存在相互作用,为阐明ADAM22在神经系统发育中的功能奠定了基础.