重组阳离子抗肿瘤肽AIK的原核表达、纯化及活性测定

利用Gateway克隆技术构建重组抗瘤肽AIK的原核表达体系,建立表达及纯化重组AIK的最优条件,为深入研究和利用AIK奠定基础。首先,设计含AttB重组位点的引物,通过重叠PCR技术扩增出Att B-TEV-FLAG-AIK序列,利用BP重组反应将目的序列TEV-FLAG-AIK克隆到供体载体pDONR223中,构建入门载体,再通过LR重组反应,将目的序列转移到目的载体pDEST15中,构建GST-AIK融合蛋白原核表达质粒。随后,在BL21(DE3)工程菌中优化诱导融合蛋白表达的条件。以谷胱甘肽磁珠纯化GST-AIK融合蛋白,再以rTEV酶切除GST,获得FLAG-AIK重组蛋白。最后以MTS法检测FLAG-AIK对白血病细胞HL-60的细胞毒性。菌液PCR验证和测序分析表明成功构建了重组抗瘤肽AIK的入门质粒和原核表达质粒。在BL21(DE3)工程菌中实现了GST-AIK融合蛋白的高效可溶性表达。并测得在37℃下以0.1 mmol/L IPTG诱导工程菌(OD600=1.0)4 h,重组蛋白表达量占菌体总蛋白的30%以上。经GST亲和层析、rTEV酶切除GST标签及二次GST亲和层析获得纯度高于95%的FLAG-AIK蛋白。MTS法测得所制备的FLAG-AIK蛋白抑瘤活性与化学合成的AIK相当。总之,本课题应用Gateway克隆系统成功构建了抗瘤肽AIK的原核表达质粒,实现了GST-AIK融合蛋白的高效可溶性表达,经亲和层析获得了有生物活性的重组AIK多肽,为后续深入研究和大规模制备奠定了基础。     

2014—2016年大连地区血流感染肺炎克雷伯菌的耐药性特征分析

目的分析肺炎克雷伯菌所致血流感染患者的科室分布及其病原菌耐药性特征,为指导临床合理应用抗菌药物,有效控制感染提供依据。方法选择2014-2016年大连医科大学附属第一医院送检血液标本中分离得到的289株肺炎克雷伯菌,对其进行细菌鉴定、药敏试验及ESBL确认试验,分析肺炎克雷伯菌所致血流感染患者的科室分布特征及其病原菌耐药性变迁。结果患者血液中肺炎克雷伯菌检出率以急诊科(24.91%)和ICU为最高(23.88%)。3年中肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类抗生素和阿米卡星耐药率较低,均在20.00%左右。产ESBL肺炎克雷伯菌共135株,占46.71%,对常用抗生素的耐药率均显著高于非产ESBL菌株(P<0.01)。碳青霉烯类抗生素耐药菌株对常用抗生素耐药率均高于敏感菌株(P<0.01),对四环素、复方新诺明和阿米卡星耐药率相对较低,分别为66.10%、66.10%、71.19%。结论我院2014-2016年患者血液中肺炎克雷伯菌检出率以急诊科和ICU为最高。该菌对碳青霉烯类抗生素及阿米卡星的耐药率较低,碳青霉烯类抗生素耐药菌株对四环素、复方新诺明和阿米卡星尚有一定敏感性。     

血栓形成后大鼠腹主动脉收缩和舒张功能和变化

血栓形成后大鼠腹主动脉收缩和舒张功能和变化＊徐晖朱妙章裴建明臧益民韩海潮１（第四军医大学生理学教研室,西安７１００３２;１西安交通大学生物力学研究室）血栓形成是心血管系统的主要病变之一,可导致临床许多疾病,如心肌梗塞、脑梗塞和弥漫性血管内凝血等,是引...     

阳春砂辐射诱变及基于ISSR的变异分析

用组织培养结合辐射诱变的方法进行药用植物阳春砂的育种,对于加快其育种速度、实现高产优质具有重要意义.本研究通过不同浓度的6-BA和NAA配比筛选阳春砂组织培养不定芽的最适培养基,再以组培不定芽为材料,设置不同辐射剂量,进行60Co-γ射线辐射诱变;采用ISSR分子标记技术,对部分诱变材料进行遗传变异分析.结果表明,添加4.0mg/L6-BA和0.1mg/L NAA的MS培养基不定芽诱导率和出芽倍数最高,分别达到91.4％和2.44;用于阳春砂组培不定芽γ射线辐射的合适剂量为16Gy;ISSR分析结果显示,16Gy辐照获得的2个植株AV16-1和AV16-2在遗传上发生了明显变异,与对照的遗传相似系数分别为0.549和0.563.本研究建立了组织培养结合辐射诱变培育阳春砂新种质的方法,为基于ISSR分子标记技术的诱变育种提供了参考.     

穿心莲ent-柯巴基焦磷酸合酶基因的克隆与生物信息学分析

旨在克隆穿心莲CPS的编码基因,并进行序列分析.通过RT-PCR和cDNA末端快速扩增的技术从穿心莲叶片中获得目的基因;并利用生物信息学的方法对其编码蛋白进行功能分析.结果显示,获得了全长2 499 bp的cDNA序列,编码一个833aa的蛋白.序列同源性比较表明,该蛋白与野甘草、咖啡等其他植物来源的CPS具有较高的同源性.保守功能结构域分析显示,该蛋白包含一个富含Asp残基的植物萜类合酶的共有保守功能域“DXDD”,归属于萜类生物合成酶Ⅰ类超级家族和顺式聚异戊二烯焦磷酸合酶超级家族.初步推测克隆得到了穿心莲CPS的编码基因(命名为ApCPS,GenBank登录号为JN216843.1).     

肝素钠精制工艺研究

为提高肝素钠粗品效价,改善产品色泽,采用二次盐解、双氧水氧化和脱色等工艺对肝素钠粗品进行精制,并探讨工艺条件对产品效价、收率的影响。结果得到最佳精制工艺条件:盐解质量浓度为2％,盐解pH为8.0,醇沉体积浓度45％,氧化剂(双氧水)体积分数为3％。该精制工艺能够有效地提高效价(平均比粗产品提高1.5倍),收率较高,并具有操作简便、省时等特点。     

阿尔茨海默病的预防与临床治疗及护理

阿尔茨海默病(alzheimer's disease,AD)是一种神经退行性疾病,通常起病缓慢并逐渐恶化,是60％～70％痴呆症的病因.截至2020年,全球约5000万人患有各种形式的痴呆症,最常见的是65岁以上的人,因此,俗称老年痴呆症.迄今为止,对阿尔茨海默病的病因仍知之甚少.一般认为许多环境和遗传风险因素与阿尔茨海默病的发展有关.大量的实验研究和病例证明,没有任何一种治疗可以阻止或逆转阿尔茨海默病的病程,只有少数方法或许可以暂时缓解或改善症状.本文概述了对阿尔茨海默病的基本认识,系统地提出了对阿尔茨海默病的预防、临床治疗及护理对策,期望对医护人员和社会大众提供有益的建议和参考.     

损伤神经元自发放电的整数倍节律及其动力学机制

实验采用大鼠背根节慢性压迫动物模型,记录术后３～１０天背根节的自发放电,在１５６根纤维中观察到１７根（１１％）出现的动作电位峰峰间期以某一基础间期的整数倍出现的时间节律形式,其回归映射图为晶格状点阵结构。同时观察到Ｎａ＾＋通道特异阻剂ＴＴＸ和Ｋ＾＋通道阻断剂４－ＡＰ能对整数倍放电节律产生影响。结果表明,看似不规则的整倍数放电时间序列是有着内在的结构和规律性的, 膜上通道和环境的状态决定。建立针对本     

大鼠实验性血栓模型的建立及其评价

根据Ｖｉｒｃｈｏｗ血栓形成原理,采用机械性损伤内膜,同时降低血流速度方法制备大鼠实验性血栓模型。结果显示,利用此方法制备血栓模型成功率为７８．４％,血栓平均长度８．５３±１．４２ｍｍ,血栓形成后,腹主动脉的收缩功能明显下降。     

半散放条件下普通斑马的种群特征

<正>普通斑马又称平原斑马(Equus burchelli),隶属于奇蹄目马科,是一种极具观赏价值的大型哺乳动物。广泛分布于非洲,喜欢栖息在平原和草原,随季节和食物迁徙。普通斑马是社会性动物,习惯群体生活,规模较小的群体由1只雄性和2-6只雌性以及它们未成年的子女组成;或是由十几只未成年的雄性普通斑马组成;较大的群体则有几百只,它们通常是由若干个小规模的群体组成。雄性