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991.
应用DNA同源重组的方法对酵母人工染色体(YAC)进行修饰,用Southern杂交和PCR等方法证实neo基因整合于YAC上,通过PEG介导的原生质体融合法将一个330kbYAC导入L929细胞,得到G418抗性克隆。 相似文献
992.
三月龄SD大鼠30只,分三组:卵巢切除组(OVX)、假手术组和卵巢切除后补充雌二醇组;每组10只,术后一月和三月每组分别各取五只。提取长骨骨组织mRNA,反转录为单链cDNA探针,以持家基因(gapdh)为内对照,针对多种胶原和细胞因子基因进行反向North-ern杂交和反向点杂交。大鼠骨组织中,colIα(1)、col Iα(2)和col Ⅲ的表达与年龄有关,与卵巢切除无关;但补充外源雌二醇可严重抑制col Ⅲ和colⅠα(2)的表达。col、Ⅴ、IL-1和IL-6的表达受雌激素抑制,切除卵巢后抑制作用消失,而补充雌二醇后它们的表达又降至正常水平。TGF-β的表达也受雌激素抑制,但雌激素的影响还与年龄有关;卵巢切除后一个月TGF-β表达增加,补充外源雌二醇后表达有所降低;但是卵巢切除三个月后的大鼠TGF-β表达的这一变化不明显。本实验为进一步研究安全可靠的骨质疏松治疗方法打下基础。 相似文献
993.
神经细胞粘连分子L1是神经系统发育过程中介导细胞-细胞相互作用的重要分子。L1能启动轴突的延伸并与神经细胞迁移有关,在神经系统发育和维持方面起重要作用。L1基因突变会导致智力迟钝,痉挛性截瘫,脑积水和其他的发育异常。L1基因突变导致遗传性神经细胞疾病的分子机理目前还不清楚,本研究介绍L1转基因小鼠的构建。在小鼠神经细胞粘连分子L1细胞外区段(L1ECD)cDNA的末端上加一终止密码子后,置于神经系统特异性的pCAMKⅡ启动子之后,构建成L1ECD转基因DNA。为验证构建物的正确性,将其与真核细胞表达载体pCEP4连接并转染C6细胞,实现了L1ECD在C6细胞中的表达,并观察了L1ECD对体外培养的C6细胞和原代培养的神经元的效应。采用显微注射的方法将L1ECD转基因DNA导入小鼠受精卵,产出的仔鼠经尾组织基因组DNA Southern杂交分析和组织RNA Northern杂交分析,证明L1ECD转基因DNA已整合在转基因小鼠基因组内,并呈脑特异性表达。 相似文献
994.
差异显示PCR技术是一种新近发展起来的在真核细胞中检测与克隆特异表达基因的手段。本文建立了用此技术克隆春化相关基因的研究系统,并提供了诸如总RNA的提取、污染DNA的去除、sscDNA的逆转录、PCR参数、扩增cDNA的电泳、特异cDNA的收集与重扩增等在方法上的细节。用这种技术分离了一个仅在春化20天这一特异时期表达的春化设定cDNA克隆VPC28。这些结果也适用于更加广泛的类似研究。 相似文献
995.
以人、牛、鼠、鸡、蜗牛的β-1,4-半乳糖苷转移酶催化区的编码核苷酸序列为探针,在NCBI GenBank EST数据库中进行同源搜寻,获得若干有高度同源的EST.在拼接序列的两端设计引物,以从人胎盘cDNA文库中PCR扩增获得的片段为探针,在人胎盘cDNA分子库中步移获得一个长1,907bp的cDNA片段,包含一个长1,179bp的开放阅读框(ORF,open reading frame),编码393个氨基酸残基。该基因与已知的人类β1,4-GalTI的氨基酸同源性为43.8%,在蛋白质催化区的同源性更高达60.9%。表达谱分析发现该基因在人体16种组织中均有不同程度的表达,转录本大小约为2.4kb.通过该cDNA人/啮齿类杂种细胞株DNA Southern杂交将该基因定位在1号染色体。 相似文献
996.
小动物浸制标本简易制法 总被引:1,自引:0,他引:1
小动物浸制标本简易制法学习动物学,制作标本是十分重要的教学环节。利用废物品制作动物标本,既经济又实用,具有推广的价值。本文介绍一种制作小型动物浸制标本的简易方法;(1)处理把采集到的小动物(长小于2.scm、直径小于1.5cm),如家蚕、蜘蛛、蚜虫、... 相似文献
997.
998.
超声波介导法转化玉米愈伤组织及可育转基因植株的获得 总被引:8,自引:0,他引:8
应用超声波介导法,首次成功地将Bt毒蛋白基因导入了重要的禾谷类作物玉米,并获得了可育的转基因植株及后代.Southern分子杂交结果证明,外源基因已整合进R_0植株和R1代的染色体组中.超声波声强和处理时间是决定超声波介导法转化效率的2个最重要的参数,以 0.5W/cm2的声强、30min处理的转化效果最佳,最高相对转化频率达到13.3%.适当参数的超声波处理能使细胞表面形成大量的小孔,又减少了外源DNA分子的断裂,从而使外源DNA分子进入细胞. 相似文献
999.
1000.