全文获取类型
收费全文 | 12113篇 |
免费 | 1328篇 |
国内免费 | 4373篇 |
出版年
2024年 | 86篇 |
2023年 | 342篇 |
2022年 | 411篇 |
2021年 | 395篇 |
2020年 | 447篇 |
2019年 | 435篇 |
2018年 | 309篇 |
2017年 | 411篇 |
2016年 | 425篇 |
2015年 | 478篇 |
2014年 | 822篇 |
2013年 | 595篇 |
2012年 | 714篇 |
2011年 | 859篇 |
2010年 | 788篇 |
2009年 | 835篇 |
2008年 | 1121篇 |
2007年 | 754篇 |
2006年 | 717篇 |
2005年 | 721篇 |
2004年 | 741篇 |
2003年 | 664篇 |
2002年 | 622篇 |
2001年 | 557篇 |
2000年 | 399篇 |
1999年 | 423篇 |
1998年 | 300篇 |
1997年 | 315篇 |
1996年 | 336篇 |
1995年 | 263篇 |
1994年 | 313篇 |
1993年 | 257篇 |
1992年 | 210篇 |
1991年 | 194篇 |
1990年 | 152篇 |
1989年 | 165篇 |
1988年 | 57篇 |
1987年 | 46篇 |
1986年 | 23篇 |
1985年 | 59篇 |
1984年 | 13篇 |
1983年 | 9篇 |
1982年 | 11篇 |
1981年 | 9篇 |
1955年 | 1篇 |
1950年 | 10篇 |
排序方式: 共有10000条查询结果,搜索用时 31 毫秒
991.
斑鳢肝脏解偶联蛋白2cDNA核心片断的克隆及分析 总被引:1,自引:0,他引:1
解偶联蛋白2(uncouplingprotein 2,UCP2)可使氧化磷酸化解偶联。本研究首次成功从斑鳢(Channa maculata)肝脏通过简并引物克隆获得UCP2基因cDNA核心序列,该片段长502bp,编码167个氨基酸残基。使用vector NTI suite 6.0软件进行氨基酸同源性序列比较分析表明,斑鳢UCP2与真鲷、鲤鱼、草鱼、斑马鱼UCP2同源性高达91%、73%、72%、71%,与人、大鼠、小鼠UCP2同源性较高为70%、71%、70%。UCP2编码区在鱼类、哺乳类中均具有较高保守性,提示着脊椎动物UCP2可能在线粒体有氧呼吸代谢过程中承担某种最基本的生命功能。 相似文献
992.
本文采用纯化蛋白Hsp70-NP,NP,Hsp70分别免疫C57/BL6小鼠,取各组小鼠脾淋巴细胞进行淋巴细胞增殖试验和细胞毒试验.此外,为了获得细胞毒实验的靶细胞,本文还采用脂质体介导质粒pcDNA3.1/S转染黑色素瘤细胞B16,通过G418筛选稳定克隆,并用RT-PCR,Western blots以及免疫荧光染色证实N蛋白在胞浆中表达.淋巴细胞增殖实验表明,Hsp70-NP,NP组小鼠脾淋巴细胞均能够对体外抗原刺激产生增殖反应,而Hsp70-NP组的增殖指数明显高于NP免疫组.细胞毒实验结果表明,LDH的释放具有效应细胞依赖性,Hsp70-NP,NP免疫组脾淋巴细胞均可以特异性杀伤靶细胞B16-N,而Hsp70-NP免疫组的杀伤率显著高于NP免疫组.实验结果显示,Hsp70可以增强NP诱导产生特异性CTL的能力.本研究结果为进一步设计基于NP的合成肽疫苗或基因疫苗提供了重要实验依据. 相似文献
993.
利用噬菌体展示的线性12肽库从马抗SARS-CoV IgG筛选SARS-CoV的抗原表位.经生物淘洗富集的噬菌体克隆被测序.获得两个共有序列DXXDP和TXTLL.它们分别与SARS-CoV N蛋白341-345和392-396位氨基酸序列高度同源.含共有序列的克隆在ELISA竞争抑制试验中与SARS-CoV N蛋白竞争结合马抗SARS-CoVIgG.将两个共有序列肽通过基因重组技术成功展示到大肠杆菌鞭毛,获得重组菌F1和F2.用重组菌F1和F2免疫接种试验Balb/c小鼠产生的血清均能与SARS-CoVN蛋白特异结合.说明DXXDP和TXTLL是SARS-CoVN蛋白的两个连续抗原表位. 相似文献
994.
995.
新城疫病毒F蛋白在昆虫细胞中的表达及其融细胞作用 总被引:1,自引:0,他引:1
用RT-PCR方法扩增出新城疫病毒标准强毒株F48E8的F基因,并将其克隆到pGEM-T载体,命名为pGEM-NDF.鉴定正确后,以BamHI和XbaI双酶切将F基因从pGEM-NDF中释放出来,并插入到pFast Bac I载体中,得到重组转移载体pFast-NDF.然后将该重组质粒转入含有穿梭质粒的感受态DH10Bac中,通过转座作用获得重组穿梭质粒reBacmid-NDF.再用reBacmid-NDF转染Sf9昆虫细胞,获得含有新城疫病毒F48E8株F基因的重组杆状病毒.间接免疫荧光和Western-blot分析结果表明F蛋白在昆虫细胞中获得表达,而且主要表达于细胞膜上,并使感染重组杆状病毒的昆虫细胞在96h发生融合作用.动物试验表明,表达的F蛋白能够产生中和抗体.本文的研究结果为F蛋白的进一步开发奠定了基础. 相似文献
996.
粗糙脉孢菌基因组分泌蛋白的初步分析 总被引:4,自引:0,他引:4
文章报道利用信号肽预测软件SignalP v3.0和PSORT,跨膜螺旋结构预测软件TMHMMv2.0和THUMBUP,GPI-锚定位点预测软件big-PI Predictor和亚细胞器中蛋白定位分布预测软件TargetP v1.01对粗糙脉孢菌全基因组数据库中已公布的10 082个氨基酸序列进行预测分析。结果表明在粗糙脉孢菌中有437个蛋白为分泌蛋白,编码这些蛋白最小的可读框(open reading frame,ORF)为252 bp,最大为6 604 bp,平均1 433 bp,分泌蛋白信号肽长度介于15~59个氨基酸之间。在437个分泌蛋白中,205个具有功能描述,主要包括各种酶类、细胞能量生成、运转以及自身修复、防卫等多种功能。这些蛋白所参与的生化过程可能发生在膜外的周质空间或是菌体外的场所,为该物种营养的摄取,以及对环境做出响应服务。
相似文献
997.
为阐明温州地区青霉素耐药肺炎链球菌(PRSP)的青霉素结合蛋白(PBPs)的基因和氨基酸序列的变异特点,对温州医学院自2000年11月~2004年1月收集的26份肺炎链球菌进行分离、鉴定及青霉素药敏实验,并对每株链球菌的PBP1A、PBP2B、PBP2X基因进行PCR扩增和直接测序,通过序列比对与生物信息学分析。结果表明,研究中的PBP1A的主要突变位点是保守基序KTG之后的4个连续氨基酸替换Thr574Ala、Ser575Thr、Gln576Gly、Phe577Tyr和保守序列STMK内的氨基酸替换Thr371Ser;PBP2B的主要突变位点是保守序列SSN之后的氨基酸替换Thr451Ala;PBP2X的主要突变位点是保守基序STMK 内的氨基酸替换Thr338Ala。以上突变类型以及菌株的青霉素耐药水平与文献报道相符。研究检测的PRSP的PBPs基因中暂未发现本地区特有的(新的)基因突变,也未检测出文献报道的某些与青霉素抗性相关的氨基酸替换。 相似文献
998.
999.
Bt毒蛋白Cry1Ac在人造土壤中对赤子爱胜蚓毒理及生化影响 总被引:3,自引:2,他引:1
Bt毒素能通过转基因作物的花粉、根和残株进入土壤.为评估转基因作物对土壤动物的影响,本文模拟转基因棉的Bt毒素进入土壤的发生程度,用含不同浓度Bt毒蛋白Cry1Ac的人造土壤处理蚯蚓,测定蚯蚓存活率、重量变化及体内总蛋白含量和过氧化氢酶(CAT)、乙酰胆碱酯酶(AchE)、谷胱甘肽-S-转移酶(GST)和纤维素酶活性.结果表明,Bt毒蛋白对蚯蚓的生物量和生理水平影响均不明显,不存在急毒性和亚致死毒性影响,对蚯蚓比较安全. 相似文献
1000.
为了研究果蝇中SR蛋白家族新成员Dxl6的功能,通过RT-PCR得到Dxl6的全长cDNA,并根据Dxl6基因产物的功能区,分别将Dxl6中间区域(Dxl6 middle part, Dxl6MP)、Dxl6 C末端RS结构域(Dxl6 RS domain, Dxl6RSD)序列亚克隆至pGEX-4T-1(His)6C 及pET32a 表达载体中,表达和纯化获得融合蛋白。用纯化的融合蛋白GST-Dxl6RSD-His和GST-Dxl6MP-His免疫家兔,分别得到抗Dxl6RSD和抗Dxl6MP两种抗体。WESTERN BLOT结果显示两种抗体能特异地识别在原核表达系统内表达的抗原,抗Dxl6RSD的抗体对果蝇组织中的Dxl6具有较高的特异性。Abstract: In order to study the function of Dxl6 which is a novel member of SR protein family, its cDNA was cloned by RT-PCR, and the sequences of its RS domain and its middle part were subcloned into two fusion express vectors, pGEX-4T-1His(6)C and pET32a. After expressing in E.coli BL21, the truncated proteins of Dxl6 RS domain part and Dxl6 middle part in pGEX-4T-1His(6)C were purified and used to immunize rabbits. Purified antibodies against the RS domain and Dxl6 middle part were obtained by affinity chromatography with the expressed products of Dxl6 RS domain part and Dxl6 middle part in pET32a, respectively. The result shows the antibody against Dxl6 RS domain has a good specificity to Dxl6 in Drosophila larvae by Western blot analysis. 相似文献