抗虫的转AaIT基因杨树的获得

通过根癌农杆菌叶盘法将构建在双元载体上的昆虫特异性神经蝎毒素AaIT基因转化至中国南方杨树N106(小叶杨×美洲黑杨,P.deltoides×P.simonii)中,共获得了62株再生植株。PCR分析及PCR产物Southernblotting的分析结果表明,AaIT基因整合在再生植株的基因组上。对部分转AaIT基因植株进行了杀虫实验,转基因植株A5对一龄舞毒蛾(Lymantriadispar)幼虫有明显的抗性,饲喂转基因杨树叶片的幼虫死亡率显著高于未转基因对照植株,其取食面积小,存活幼虫体重明显小于对照。ELISA分析证明了AaIT蛋白的表达。     

一种检测细胞微量点突变的方法——等位基因特异的PCR

为了灵敏、方便地检测出细胞群体中含量极低的点突变,利用一β珠蛋白基因簇Gγ -202 C→G突变的杂合细胞株,优化传统的等位基因特异PCR的反应条件,以定量的PCR产物为模板,在含5%甲酰胺的体系中用半巢式的等位基因特异引物进行扩增.结果表明,该方法灵敏可靠,可快速检测到细胞群体中低于0.025%的点突变.     

PCR方法制备地高辛标记DNA探针检测中国对虾非包涵体型杆状病毒

A pair of primers created from information of PmNOBⅢ genome DNA Sal I fragment produced a 355bp band by using Penaeus chinensis non occluded baculovirus (PcNOBV),the WSBV isolate from P.hinensis in mainland China,as the DNA template.The specific PCR product was cloned,sequenced and labeled with digoxigenin (DIG)DNA labeling kit(Boehringer Mannheim).The DIG labeled fragment was tested by dot blot hybridization for sensitivity and specificity with purified PcNOBV nucleocapsid,PcNOBV infected shrimp tissues and healthy shrimp tissues.The detection limit of the DNA probe is 6.8pg of purified PcNOBV DNA.No hybridization signals were observed using DNA from healthy shrimp as template.Healthy P.chinensis,artificially infected P.chinensis and pond reared adult P.chinensis were screened for PcNOBV infection by both PCR and the hybridization assay.The results showed a good relationship between PCR and the hybridization assay.These findings demonstrate that the DIG labeled probe can be used as a sensitive,specific and cost effective reagent for detection of PcNOBV.     

靶向转录研究新进展

靶向转录（ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ ｔａｒｇｅｔｉｎｇ）是指在转录水平将目的基因界定于靶位点进行有效表达的过程,有许多因子参与这一复杂调控,包括许多顺序作用元件如组织特异性启动子／增强子、可被内、外源刺激诱导的启动子以及绝缘子、静息子等,它们与靶组织内的转录因子相互作用实现基因的定位表达,而结合基因开关、二步转录激活系统及Ｃｒｅ／ＬｏｘＰ系统又可控制表达产物的消长。     

DNA纤维上的原位杂交技术

ＤＮＡ纤维上的荧光原位杂交（Ｆｉｂｅｒ－ＦＩＳＨ）技术是一种非重要的分子细胞遗传学技术。对于高分辨物理图的绘制、基因组和染色体结构的研究、致病基因的定位克隆等都有很大作用,本文介绍了该技术的基本操作和应用,以及与引物原位ＤＮＡ合成（ＰＲＩＮＳ）等技术相结合进行更精确基因定位的潜力。     

应用免疫-PCR检测癌症的初步研究

探索一种简便、灵敏度高、特异性强且易推广的血清中突变型ｐ５３蛋白检测方法,用于肿瘤早期诊断。用突变型ｐ５３蛋白的单克隆抗体,与特定ＤＮＡ片段连接制成基因探针,用免疫－ＰＣＲ技术,对１１７例病人血清样品进行检测。在１１７例病人血清样品中,检测总阳性率为４１．８８％（４９／１１７）,在临床怀疑为癌症及肿瘤病人中阳性率达５２．１１％（３７／７１）。     

棉铃虫种群遗传变化的研究(英文)

利用重复序列引物扩增DNA多态性方法研究了几个产棉区的棉铃虫的种群遗传结构变化。结果表明 :实验室种群比自然种群的遗传变化低 ,自然种群间的遗传差异不显著 ,同一地点不同年间种群间存在较大遗传差异 ,表明棉铃虫的迁飞扩散现象比较明显 ;聚类分析结果表明 ,来自辽宁的朝阳种群 (CY)与来自山东高唐 (GT)、江苏大丰 (DF)的种群间的有较强的基因流 ,为我国东北地区棉铃虫主要来自河北、山东等地的假说提供了一定的理论依据。本研究所选用的遗传标记能灵敏地检测种群的遗传结构变化     

凝胶成像系统对核酸扩增产物的定量检测

目的 建立一种PCR-凝胶成像系统定量分析核酸扩增产物的方法．方法：1．用PCR荧光定量分析仪实时监测PCR扩增曲线,并选择合适的扩增循环次数,2．将梯度标准血清(10^1～10^6拷贝／u1)分别进行40,35及32次循环次数的扩增,在琼脂糖电泳,EB染色后,进行凝胶分析;3．选择凝胶分析软件中能客观反映核酸实际含量的最适参数,制定标准曲线。结果:40及35次循环时,在10^1～10^4拷贝／ul,线性良好,而在10^4,10^5及10^6拷贝／ul三个梯度时直线上升缓慢,趋于平坦;32次循环时,10拷贝／ul未能检出,10^2～10^6拷贝／ul的5个梯度的模板(对数值)与产物(体积)有良好的线性关系(r=0．97)。结论：32次循环线性范围较广,为最适循环次数;在UVIband的光密度定量分析指标中,以体积或体积百分比作为定量指标较好;本法除可用于常规PCR产物定量(HBV-DNA,TB—DNA),也适用于RT-PCR(HCV-RNA)。     

引物间同源性和裂口对PCR扩增的影响

采用ＰＣ／Ｇｅｎｅ软件对能扩增出特异睡不能扩增的ＰＣＲ引物进行同源性比较,同源间“裂口（ｇａｐｓ）”差数的统计,得出源率小于或等于３５％,“裂口”差数大于或等于３,是获得理想ＰＣＲ扩增效果的关键参数之一的结论,为引物设计提供了一条直观的依据。     

PCR筛选阳性克隆方法的改进

ＰＣＲ筛选阳性克隆具有简便、快速的优点,但常发生假阳性错误。用与载体匹配的引物和目的的基因引物组合进行ＰＣＲ,可以消除假阳性,同时可以判断插入目的基因的方向。