PCR方法制备地高辛标记DNA探针检测中国对虾非包涵体型杆状病毒

A pair of primers created from information of PmNOBⅢ genome DNA Sal I fragment produced a 355bp band by using Penaeus chinensis non occluded baculovirus (PcNOBV),the WSBV isolate from P.hinensis in mainland China,as the DNA template.The specific PCR product was cloned,sequenced and labeled with digoxigenin (DIG)DNA labeling kit(Boehringer Mannheim).The DIG labeled fragment was tested by dot blot hybridization for sensitivity and specificity with purified PcNOBV nucleocapsid,PcNOBV infected shrimp tissues and healthy shrimp tissues.The detection limit of the DNA probe is 6.8pg of purified PcNOBV DNA.No hybridization signals were observed using DNA from healthy shrimp as template.Healthy P.chinensis,artificially infected P.chinensis and pond reared adult P.chinensis were screened for PcNOBV infection by both PCR and the hybridization assay.The results showed a good relationship between PCR and the hybridization assay.These findings demonstrate that the DIG labeled probe can be used as a sensitive,specific and cost effective reagent for detection of PcNOBV.     

健康查体人群非酒精性脂肪肝发病的相关危险因素分析

目的:探讨非酒精性单纯性脂肪肝以及由其演变的脂肪性肝炎各指标的差异,并分析非酒精性脂肪肝病(Nonalcoholic Fatty Liver Disease,NAFLD)的相关影响因素,为NAFLD防治提供依据。方法:入选病例分为正常组(A组,n=189)、单纯性脂肪肝组(B组,n=162)、脂肪肝伴肝功能改变组(C组,n=23),分析其体检结果及生活方式等影响因素,应用单因素及Logistic回归分析进行统计学处理。结果:C组大多数各项指标均比B组有所升高,其中体质量指数(BMI)、丙氨酸转氨酶(ALT)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、尿素氮(BUN)、空腹胰岛素(FIns)、餐后2小时胰岛素(2h PIns)差异有统计学意义(P0.05)。在B组和C组中ALT、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、甘油三酯(TG)、Fins、2hPIns、腰臀比(WHR)与A组比较均有显著差异(P0.05);男性NAFLD的发病率比女性高,差异有统计学意义(x2=6.86,P0.05)。有高脂血症组单纯性脂肪肝发病率高于没有高脂血症组,差异有统计学意义(x2=26.11,P0.05)。有高血压病史的NAFLD发病率比无高血压病史的高,差异显著(x2=7.39,P0.05);Logistic回归分析显示,BMI、TC、HbA1c、有高血压病史是NAFLD的危险因素。结论:NAFLD与代谢综合征密切相关,NAFLD中伴肝功异常组存在更明显的胰岛素抵抗、血脂紊乱现象,更易于患慢性肾脏疾病。     

缝隙连接蛋白Connexin 26在乳腺导管上皮癌变中的调节作用

目的研究缝隙连接蛋白Connexin 26（Cx26）与乳腺癌发生的相关性。方法选取手术切除的人乳腺导管内癌和浸润性导管癌标本88例，应用免疫组化S-P法及Western blot研究癌组织和癌旁组织中Cx26蛋白表达，统计学分析癌组织和癌旁组织中Cx26蛋白表达的差异，探讨Cx26表达与乳腺癌发生的相关性。结果癌旁组织中Cx26蛋白弥散于细胞浆中，在癌组织中Cx26蛋白明显减弱或消失，卡方检验表明Cx26蛋白在乳腺癌组织和癌旁组织中的表达差异具有统计学意义（P〈0．05），Western blot结果亦清楚显示在癌组织中Cx26蛋白表达减弱（P〈0．001）。结论Cx26蛋白减弱或缺失参与调控乳腺导管癌的发生过程。     

黄牛、牦牛和犏牛睾丸组织中Cdc2、Cdc25A基因mRNA表达水平

黄牛和牦牛远缘杂交后代犏牛雄性不育是牦牛杂交改良中的一大难题。Cdc2和Cdc25A是减数分裂的两个关键基因, 其表达水平的下降将使精子发生不能正常进行, 导致雄性不育。为了探讨Cdc2、Cdc25A基因mRNA表达水平与犏牛雄性不育的关系, 文章采用荧光定量PCR技术对Cdc2和Cdc25A基因的组织表达特征以及在黄牛、牦牛和犏牛睾丸组织中的表达水平进行了分析。结果表明: Cdc2和Cdc25A基因在牦牛各种组织中广泛表达, 说明Cdc2和Cdc25A基因在各种组织细胞分裂和细胞周期运行中均发挥作用; 黄牛和牦牛睾丸组织中Cdc2、Cdc25A基因表达水平均显著高于犏牛(P<0.05), 说明睾丸组织中Cdc2和Cdc25A基因的低表达可能与犏牛雄性不育相关。     

乳酸菌素-安全、天然的食品防腐剂

乳酸菌素是一类由乳酸菌在代谢过程中通过核糖体合成机制产生的抗菌多肽或蛋白,胞外分泌,能够通过在细胞膜上形成孔道或抑制细胞壁合成来达到溶菌目的。主要从乳酸菌素在食品中应用的安全性、影响乳酸菌素生物合成的条件、乳酸菌素活性的影响因素、以及目前乳酸菌素在食品领域的应用等方面进行了评述,揭示了乳酸菌素广阔的市场应用前景,从而使乳酸菌素这种天然防腐剂能获得更好地开发和利用。     

1996年中国对虾暴发性流行病病毒病原研究

１９９６年６月至８月,青岛地区养殖的中国对虾大面积暴发流行病,死亡率达９０％以上。发病对虾典型表征为甲壳白斑。病虾鳃组织匀浆滤液经微孔滤膜过滤除菌后,注射给健康对虾进行人工感染试验,９天内累计死亡率达１００％,发病症状及体征与自然发病对虾相似。电镜下自然发病对虾鳃、胃、头胸甲下表皮、淋巴样器官、触角腺等组织细胞核内发现大量杆状病毒,未见包涵体;人工感染对虾相同组织中可见大量同样病毒。切片中病毒粒子     

中国对虾呼肠孤样病毒感染的电镜观察

呼肠孤病毒在自然界广泛存在于脊椎动物、无脊椎动物和植物中.水产动物呼肠孤病毒感染曾见于鱼、贝、蟹.近几年随着对对虾病毒病害研究的日益重视,在对虾中也发现呼肠孤病毒的感染.Tsing等[1]最早于1987年在法国南部养殖的日本对虾(P.japonicus)幼虾中发现呼肠孤病毒感染.Krol等[2]于1990年在试验感染的南美白对虾(P.vannamei)中发现呼肠孤样病毒与对虾杆状病毒混合感染.中国大陆养殖的中国对虾自1993年全面暴发流行病以来,许多学者进行了对虾流行病的病原学、流行病学及诊断和防治方法的研究,部分学者曾在中国对虾(P.chinensis)中观察到呼肠孤样病毒颗粒[3],但未报道较详细的电子显微镜观察资料.     

一株抗真菌解淀粉芽孢杆菌的分离鉴定及其发酵条件的初步研究

从堆肥中分离到一株对植物病原菌尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)具有强烈抗菌活性并具有较广抗菌谱的细菌Q-12菌株。通过形态观察、生理生化实验1、6S rDNA同源性序列分析以及部分特异性基因序列分析,鉴定该菌为解淀粉芽孢杆菌。该菌的最适培养基组成为:葡萄糖5g/L,NH4Cl 1g/L,牛肉膏0.8g/L,氯化镁5g/L。最适培养温度为33℃,最适培养pH为6.0,最适培养时间为40h。     

对虾白斑病毒感染的电子显微镜观察及DNA杂交证据

中国大陆养殖的中国对虾从1993年开始至今连年爆发病 毒性流行病,俗称“白斑病”(WSBV),死亡率近100%,造成巨大经济损失。为进一步明确虾病暴发原因,利用电子显微镜技术,对1993年至1998年收集的发病中国对虾组织进行观察,发现病原体为直径(125±76)nm、长约(345±16)nm大小的带包膜的非包涵体型杆状病毒。 经氯化铯密度梯度超速离心技术获得了纯化的病毒核衣壳,大小为(80±13)nm×(380±24)nm。形态学特征与台湾地区发现的白斑杆状病毒(WSBV)相似。利用地高辛标记的WSBV DNA探针对病虾标本及纯化病毒DNA进行斑点杂交检测,均呈阳性反应,而与正常对虾组织无杂交反应。从形态学及分子生物学角度证明WSBV感染是造成中国大陆养殖对虾连年暴发流行病的重要原因。     

中国对虾非包涵体型杆状病毒核衣壳的分离纯化

An effective procedure for isolation and purification of nucleocapsids of Penaeus chinensis non-occluded baculovirus (PcNOBV) which has destroyed the Chinese shrimp industry since 1993 was described. Gill, stomach, gut and cuticle epidermis under exoskeleton were excised from cultured P. chinensis diseased with typical white spot syndrome and homogenized in liquid nitrogen with TNE buffer containing PMSF and β-ME. The homogenized mixture was filtered through a 0.45μm millipore filter membrane to remove cell debris and ultracentrifuged to pellet the remaining material.The pellet was suspended in PMTNE buffer and laid onto a handmade CsCl gradient. An obvious viral band was observed in the middle of the gradient. Large amounts of virus nucleocapsids were visualized under electron microscope consistently corresponding to the milk-colored viral band. The viral envelope was all lost after purification. The nucleocapsid was bacilliform averaging 80±13nm×380±24nm in size. The negatively stained PcNOBV nucleocapsids revealed 13-16 conspicuous stripes located periodically perpendicular to the longitudinal axis of the nucleocapsids. Six to seven capsomers of 9 nm in diameter were visualized on each side of the stripe.