单克隆抗体亲和层析法纯化重组溶葡萄球菌酶

溶葡萄球菌酶能够特异性杀灭金黄色葡萄球菌且不易产生耐药性, 有望成为治疗葡萄球菌属细菌引发感染的特效药物。为获得高纯度的重组溶葡萄球菌酶以达到药用标准, 本研究构建了一种以重组溶葡萄球菌酶单克隆抗体为配体的亲和层析纯化方法。纯化后的重组溶葡萄球菌酶纯度大于95%, 得率大于90%, 即使重复使用30多次, 纯化效率不变。且经比色法鉴定纯化后的重组溶葡萄球菌酶仍具有良好的活性。该方法步骤简单, 纯化效果好, 为生产高纯度重组溶葡萄球菌酶奠定了基础。     

单克隆抗体在畜禽病毒性传染病研究中的应用

着重阐述了单克隆抗体在畜禽病毒性传染病研究中的应用现状,单克隆抗体在病毒抗原结构与抗原表位研究、以及在畜禽病毒性传染病诊断和抗病毒治疗方面的应用,对当前单克隆抗体研究所面临的一些问题和研究方向做了分析。     

β淀粉样肽单克隆抗体可变区基因的5′RACE扩增及序列分析

目的:克隆并分析抗β淀粉样肽单克隆抗体轻链与重链可变区基因。方法:从分泌抗β淀粉样肽单克隆抗体的杂交瘤细胞株A8中提取总RNA,根据恒定区序列设计基因特异性引物,通过5′RACE法扩增抗体的轻链和重链可变区基因,测定并分析可变区基因序列,并克隆入pMD18-T载体。结果:重链可变区基因序列全长450bp,编码150个氨基酸残基;轻链可变区基因序列全长429bp,编码143个氨基酸残基。在GeneBank中对氨基酸序列进行比对分析,二者均符合小鼠IgG可变区基因的特征。根据Kabat法则对A8抗体轻链和重链可变区氨基酸序列基因进行分析并确定了3个抗原互补决定区(CDR)、4个框架区(FR)和信号肽。结论:通过5′RACE法得到了抗β淀粉样肽单克隆抗体轻链与重链可变区基因,为进一步研究抗体三维结构,以及对该抗体进行人源化改造奠定了基础。     

高效离子交换色谱测定蛋白质的微不均一性生物经济

本文展示了使用生物兼容色谱系统和高分辨离子交换模式分离蛋白质变异体的例子,使用专门设计用于蛋白质分离的阴阳离子交换色谱柱来分离OVA．合成的BSA．酪蛋白的磷酸化蛋白变异体？核糖核酸酶A和单克隆抗体的脱氮基化变异体？以及单克隆抗体的C-末端赖氨酸．酸性和碱性变异体,与早期那些通过优化洗脱液和或分离程序的工作相比,从这些例子可以看到现在的分离状况有显著改进。     

用阳离子交换色谱测定蛋白质的脱酰胺基作用

重组蛋白质的一个最普通的结构修饰就是其结构中的天冬酰胺酸残基的脱酰胺基化。这种修饰常常发生在一系列的蛋白质药物中,如人生长激素、组织血浆酶原活化子、水酰素、单克隆抗体、酸性纤维原细胞生长因子和白细胞间介素等,这种脱酰胺基化作用的发生将会对治疗性蛋白质药物的活性或稳定性产生一定的影响。     

人体胸腺和周围淋巴器官内T细胞亚群和NK细胞分布的研究

本文用多种Ｔ细胞和ＮＫ细胞单抗和免疫组织化学的ＡＢＣ技术,在冰冻切片上对人扁桃体、淋巴结、牌和胸腺内Ｔ细胞亚群和ＮＫ细胞的分布进行了检测。结果显示,ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ４、ＣＤ３和ＡＩＧ３阳性细胞主要分布在扁桃体,淋巴结的副皮质区、脾的动脉周围淋巴鞘和胸腺,但各种抗体的反应强度不同。从各种Ｔ细胞工群的染色强度和形状看,胸腺髓质部的胸腺细胞相当于周围淋巴器官内的胸腺依赖区。胸腺内Ｔ细胞在分化过程中,质膜上的抗原也有相应变化。ＮＫ细胞主要分布在淋巴小结的生发中心,淋巴结和扁桃体的副皮质区,脾的红髓以及胸腺的筋质部。这些不同的分布,说明ＮＫ细胞不仅与淋巴小结的活动有关,可能还参与机体的免疫调节功能。     

抗T细胞单克隆抗体(211－1)清除骨髓中T细胞的实验研究

本文报告应用抗T淋巴细胞单克隆抗体(211—1)和幼兔补体,体外处理骨髓细胞对GM－cFuc生成率无不良影响,并能清除骨髓中98％以上的T细胞。淋巴细胞转化试验也证明,211—1单克隆抗体可以清除骨髓中T细胞。     

聚乙二醇修饰的单克隆抗体的某些理化性质

本文研究了用PEG修饰的McAb的某些理化性质。研究结果表明:修饰的McAb与天然的McAb相比有如下几点变化:1.随修饰度增高,分子量增大;2.随修饰度增高,PAGE与SDS-PAGE泳动速度减慢;3.修饰的McAb等电点发生酸移;4.等速电泳呈峰高降低与泳动速度稍快的变化;5.园二色性光谱无明显的构象变化。修饰的PcAb与酶,除修饰酶与天然酶的园二色性光谱有明显不同外,其它的变化与修饰的McAb相似。     

用流行性出血热单克隆抗体对我国不同地区出血热病毒株的抗原分析

从全国17个省市自治区收集了自病人及各种动物分离到的40株流行性出血热病毒(EHFV),用出血热病毒单克隆抗体(McAb)进行抗原分析,发现大多数省市分离的EHFV株能与MA25-1 McAb起反应,但湖北、湖南分离的EHFV不与之起反应,而该McAb对EHFVA9株抗原的滴度为1/2560。实验还发现,湖北省内长江以北地区分离的EHFV毒株Q25、J173。WP43和从江南地区分离的EHFV毒株A24和HA1018在抗原性上也有明显不同。     

非缺陷性网状内皮组织增生病毒的血清学区别

26株来自各种禽的网状内皮组织增生病毒(REV),用多克隆的抗REV鸡血清做交叉中和试验,用REV、T株,Coo1株所制备的单克隆抗体做免疫荧光试验,比较这些毒株之间的抗原关系,从交叉中和试验结果看,它们之间的抗原关系十分接近,可以认为同属于单一血清型;但也确实存在微小差异,因此又可以将它们分为三个血清亚型,这一结果巳被单克隆抗体检验所证实。