谷氨酸棒杆菌H+-ATPase基因失活提高谷氨酸产生量

为了证实在谷氨酸棒杆菌中,利用H⁺-ATPase基因失活构建高产谷氨酸基因工程菌的应用可行性,通过重组PCR技术部分缺失H⁺-ATPaseγ亚基基因序列,采用插入失活方法构建H⁺-ATPase失活的谷氨酸棒杆菌。考察了其谷氨酸产生能力及对生长速率的影响。实验结果表明,H⁺-ATPase失活的谷氨酸棒杆菌在含有100g/L的葡萄糖培养基中摇瓶发酵,其谷氨酸最大累积量为51.6g/L, 比野生菌株提高了42.9%。生长速率研究结果表明,H⁺-ATPase失活的谷氨酸棒杆菌生长速率略低于野生谷氨酸棒杆菌。证实了H⁺-ATPase基因失活对提高谷氨酸产量的作用,为利用H⁺-ATPase基因构建高产谷氨酸基因工程菌株提供了科学依据。     

不同巢材鸟巢中优势菌群的分离鉴定

从鸟类苔藓和草叶巢材中分离出6株优势细菌和8株放线菌,采用传统表观型特征观察和16SrRNA基因序列分析法对其进行菌种鉴定。结果表明：草叶巢材中的优势细菌分别为霍氏肠杆菌（Enterobacter hormaechei）、麝香石竹假单胞菌（Pseudomonas caryophyUi）和丁香假单胞菌（Pseudomonas syringae）;苔藓巢材中的优势细菌分别为苏云金芽胞杆菌（Bacillus thuringiensis）、阴沟肠杆菌（Enterobacter cloacae）和马氏棒杆菌（Corynebacteriu matruchotii）;从2种巢材中分离出的8株放线菌均为链霉菌属（Streptomyces）,其中4株分另q为金色链霉菌（Streptomyces aureus）、红色淡紫灰链霉菌（Streptomyces rubrolavendulae）、胶样链霉菌（Streptomyces gelaticus）和灰色链霉菌（Streptomyces griseus）,另外4株链霉菌有待于进一步鉴定。     

真实问题导向下生物技术专业创新应用型人才培养模式改革与实践

以辽宁大学为例，研究分析了目前该校生物技术专业人才培养中存在的真实问题，结合我国经济结构战略性调整要求和生物技术产业对人才的需求，坚持问题导向，通过优化课程与课堂建设、建立多层次科研训练平台、深化产教融合和校企合作、组建“双师型”教学队伍等方式，对生物技术专业创新应用型人才培养模式进行改革与实践。通过跟踪调查结果，验证了创新应用型人才培养模式的效果，具有重要的指导和借鉴意义。     

淫羊藿提取物对酵母朊病毒［PSI+］治愈的影响

研究6种菊科中药对酵母朊病毒[PSI^＋]治愈效果。通过在培养基内加入适量浓度中药成分的方式,利用表型检测方法在细胞水平上检测中药对酵母朊病毒的治愈。淫羊藿醇提物对朊病毒[PSI^＋]最佳治愈浓度为0．0975g/mL,治愈率可达到3％,而水提物没有治愈作用。淫羊藿醇提物对酵母朊病毒有一定的治愈作用。     

人工巢箱条件下两种山雀鸟类的同域共存机制

种间竞争会导致鸟类对自身的生存策略进行多方面调整,将多种因素结合起来分析不同鸟类的同域共存机制具有十分重要的意义.2009-2011年的3-7月,在辽宁省东部山区以悬挂人工巢箱的方法招引杂色山雀(Parus varius)和大山雀(Parus major),通过比较这两种鸟类在繁殖时间、繁殖参数和巢址选择上的差异,分析其繁殖期的栖息地选择及繁殖对策,探讨这两种鸟类同域共存的机制.结果表明,生态位的部分分离是大山雀和杂色山雀能够长期共存的基础.两者都是在繁殖期到来立即开始繁殖,均出现两次繁殖高峰,采用消减窝卵数的对策来适应环境质量的下降.对繁殖参数的分析表明,两种鸟类的繁殖对策都为k-选择,但大山雀略偏向r端,大山雀倾向高窝卵数、低繁殖成功率的繁殖策略;杂色山雀倾向低窝卵数、高繁殖成功率的繁殖策略.两种鸟类都选择在林龄较长的森林中筑巢,但是大山雀较注重巢址的安全性能,巢距地面较高,周围乔木密集;杂色山雀较为注重植被类型的选择,巢址多选择在植被多样、灌木生长茂盛的针阔混交林中,推测可能与杂色山雀的食物构成有关.     

δ-睡眠肽与GFP融合蛋白的表达和纯化

构建δ-睡眠肽(DSIP)蛋白与GFP的融合基因表达载体,高效表达和纯化GFP-DSIP融合蛋白。通过SOE-PCR拼接DSIP全长编码基因,并使得DSIP上游具有肠激酶识别位点,经双酶切定向克隆至表达载体pET-28a,构建重组载体pET-28a-DSIP,通过PCR扩增GFP全长编码基因,经双酶切定向克隆至pET-28a-DSIP,构建原核重组表达载体pET-28a-GFP-DSIP,通过双酶切和测序鉴定后,导入E.coli BL21宿主菌中,IPTG诱导表达融合蛋白,采用镍亲和层析和分子筛凝胶层析获得高纯度蛋白,SDS-PAGE分析鉴定。经测序鉴定成功构建了原核重组表达载体pET-28a-GFP-DSIP,在IPTG诱导下获得可溶性的绿色荧光蛋白与睡眠肽的融合蛋白,经Ni-NTA亲和层析纯化成功获得高纯度的融合蛋白。成功构建了DSIP与GFP融合基因的重组表达载体,确定了GFP-DSIP融合蛋白诱导表达的最佳条件,获得了较高纯度的融合蛋白,为进一步研究DSIP蛋白的生物学功能奠定了基础。     

杂色山雀亲代喂食与子代乞食间的行为

在育雏期,晚成鸟的子代一般都是由双亲共同来抚育,子代为了更好地存活,会用自己的方式竞争获得更多的食物和更好的生存空间,同时亲代也会根据子代的乞食信号来分配食物。2011年3～7月采用针孔摄像技术录制了杂色山雀(Parus varius)育雏期巢内亲代与子代间的行为,统计了亲鸟站位、雏鸟站位、雏鸟乞食强度及亲鸟的喂食情况等数据。分析结果表明:(1)雌雄亲鸟在巢中的站位各有特点,雄鸟在整个育雏期都喜欢站在距离巢口较近的位置;雌鸟站位不太固定,前期离巢口相对较远,中期和后期离巢口相对较近;(2)雏鸟离亲鸟越近,乞食强度越大,获得食物的机会就越多;离亲鸟越远的雏鸟越不爱乞食,所以站位对雏鸟的食物获得影响最大;(3)雌鸟承担主要的育雏任务,喂食频率远大于雄鸟;(4)育雏期的不同阶段雏鸟乞食强度、亲鸟喂食频率变化很大:中期雏鸟乞食强度最大,亲鸟喂食频率最高,后期雏鸟乞食强度最弱;(5)整个育雏期雌性亲本没有表现出明显的偏爱行为,但雄性亲本在中、后期更偏爱体型大的雏鸟。可见杂色山雀子代的行为和体型大小影响着亲代的食物分配,亲代也会根据雏鸟日龄调整站位和喂食行为。     

强化生物信息学实践教学的探索与成果

生物信息学是一门数学、统计、计算机与生物医学交叉结合的新兴学科。文章依据对生物技术和生物科学专业本科生开展新模式下的《生物信息学》教学实践,对教学模式进行全面深入改革与创新,实现理论教学、实践教学和网络教学的完美融合,创建了新世纪科学性教学体系,全面提高教学质量和水平,培养综合型人才。     

大气臭氧浓度升高对银杏叶片活性氧代谢及相关基因表达的影响

采用开顶式气室熏蒸法,设置自然条件下臭氧(O₃)浓度(对照,约40 nmol·mol^-1)、80、160及200 nmol·mol^-14个臭氧浓度,观测了不同浓度臭氧条件下银杏叶片可见伤害、活性氧生成量、抗氧化酶活性及相关基因表达变化情况,分析大气臭氧浓度升高对植物活性氧代谢的影响.结果表明: 160和200 nmol·mol^-1 O₃熏蒸明显伤害银杏叶片,80 nmol·mol^-1与对照无差异,无可见伤害.O₃处理20 d后,160和200 nmol·mol^-1条件下银杏叶片的超氧自由基(O₂^-·)产生速率显著高于80 nmol·mol^-1和对照,而80 nmol·mol^-1与对照无差异;O₃处理40 d后,160和200 nmol·mol^-1熏蒸下叶片过氧化氢(H₂O₂)含量显著高于80 nmol·mol^-1和对照,而过氧化氢酶(CAT)活性显著高于80 nmol·mol^-1和对照,各臭氧处理抗坏血酸过氧化物酶(APX)活性均低于对照.熏蒸40 d后,CAT、APX基因的转录表达持续加强;防御素(GbD)的表达强度则随着臭氧浓度的增加及熏蒸时间的延长而呈显著加强.高浓度臭氧胁迫可使银杏叶片活性氧生成量增加、抗氧化酶活性下降、相关基因表达水平上调,有明显可见叶片伤害.     

初探Ste-20激酶在调控孢子丝菌双相生长过程中的作用

目的初步研究Ste-20激酶在调控孢子丝菌双相转换过程中的作用。方法采用RNA干扰技术构建Ste-20基因沉默株,通过不同温度下的培养,观察、分析Ste-20基因干扰后对孢子丝菌在双相转换过程的影响,进一步分析Ste-20激酶在孢子丝菌中调控双相转换过程中的作用。结果 Ste-20干扰后,与标准株相比干扰菌株生长速度明显下降,往酵母相转变时细胞壁变得不完整,形态也发生变化。结论 Ste-20激酶在调控孢子丝菌双相生长过程中起一定的作用。