一株地衣芽孢杆菌碱性蛋白酶的研究Ⅰ.

从皖北盐碱地土术中分离到011菌株,对其进行了菌种鉴定以及胞外碱性蛋白酶的初步研究。结果表明：011菌株符合地衣芽孢杆菌种的特征,但该菌芽孢端生、孢囊膨大、中度耐盐、高度耐碱,可在NaCl浓度为13％和pH11的培养基中生长,这些特征又不同于该种几个模式株,因而将011菌株鉴定为地衣芽孢杆菌的一个亚种,命名为地衣芽孢杆菌砀山亚种（Bacillus licheniformis subsp.dangshanensis）。该菌在发酵培养基中能产生较高产量的胞外碱性蛋白酶（725u/mL）。酶的最适作用条件：60℃、pH9.0,该酶在pH6.0-11范围内稳定。     

白蜡虫碱性磷酸酶功能基团的研究

白蜡ricerus pela雌成虫经匀浆,正丁醇抽提,硫酸铵分段盐析,SephadexG-150凝胶过滤等步骤,得到比活力为136.65U/mg蛋白酶制品,用苯甲基磺酰氟、N-溴代琥珀酰亚胺、三硝基苯磺酸、二巯基苏糖醇、对氯汞苯甲酸、琥珀酸酐、溴乙酸、碘乙酸等化学修饰剂在一定条件下选择修饰白蜡虫碱性磷酸酶的几种氨基酸残基,并测定酶活力变化。结果表明：苯甲基磺酰氟、N-溴代琥珀酰亚胺、三硝基苯磺酸、琥珀酸酐、二巯基苏糖醇的修饰能显著抑制酶的活力,活力的降低与修饰剂的浓度有关,氯汞苯甲酸、溴乙酸、碘乙酸的修饰对酶的抑制作用影响较小。初步认为：丝氨酸、赖氨酸和色氨酸残基是白蜡虫碱性磷酸酶的必需功能基团,部分二硫键也是酶的催化功能所必需的。     

泡囊丛枝（VA）菌根对玉米际磷酸酶活性的影响

以玉米为材料,利用三室隔网培养方法,研究了缺P土壤上施用植酸和卵磷脂时接种几种菌根真菌（Glomus mosseae,Glmous versiformea,Gigaspora margarita)对根际土壤酸性磷酸酶和碱性磷酸酶活性的影响,玉米生长70d后,收获测定距根表不同距离土壤中的磷酸酶活性,结果表明,接种菌根真菌增加了根际土壤酸性和碱性磷酸酶活性,Gigaspora margarita菌根菌的作用大于其它2个菌极菌,不同P源对磷酸酶活性有明显影响。     

抗性突变株筛选法选育碱性脂肪酶高产菌

以扩展青霉（Penicillum expansum)P1336为出发菌株,研究研究琥珀酸和制霉菌素对菌株生长的影响。经过多代诱,获得一突变株W－2580,其中酶水平比出发株P1336菌株提高34．7％,该菌菌丝体表角固醇下降了12．2％。     

Bacillus licheniformis6816碱性蛋白酶基因在E.coli中的克隆和表达

用PCR方法从地衣芽孢杆菌6816中扩增了碱性蛋白酶基因（apr),扩增的1.14kb的DNA片段插入到大肠杆菌载体pET-20b中,构建成重组分泌型表达载体pAPR1。pAPR1中碱性蛋白酶基因在大肠杆菌宿主JM109（DE3）中得到表达,SDS-PAGE分析显示融合表达产物的分子量为30kD,同核酸序列测定所推导的值相符,表达产物占细胞总蛋白的7.5%,重组菌的酶活比出发菌株提高了3.3倍,研究发现,重组的碱性蛋白酶在进入大肠杆菌周质空间时存在前肽自动脱落的现象。     

人的类胚胎干细胞中碱性磷酸酶的检测方法和条件

检测人的类胚胎干细胞 (em bryonic stem cells,ES细胞 )中的碱性磷酸酶活性 ,以判别 ES细胞是否处于未分化状态 ,为分离和培养出高度未分化人的类胚胎干细胞 ,建立人类 ES细胞系 ,从而建立体外研究细胞分化和发育调控机制的模型提供方便。本文对检测 ES细胞中碱性磷酸酶活性的钙钴法和α-奈基磷酸技术方法和条件进行了探讨。结果显示 :检测 ES细胞中的碱性磷酸酶用α-奈基磷酸法较钙钴法为好 ,操作更简单 ,不会出现假阳性。分离和培养出高度未分化人的类胚胎干细胞(embryonic stem cells,ES细胞 ) ,建立人类 ES细胞系 ,再定向诱导其…     

抑制蛋白磷酸酶对嗜铬细胞瘤细胞一氧化氮合酶活性的影响

蛋白磷酸酶降低参与阿尔茨海默病（AD）神经元退化,本旨在探讨一氧化氮（NO）在tau蛋白过度磷酸化引起AD脑神经元退化中的可能作用。采用β-还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸-黄递酶（β-NADPH-d)组织化学技术研究不同剂量蛋白磷酸酶抑制剂岗田酸（OA）对嗜铬细胞瘤细胞株（PC12）一氧化氮合成酶（NOS）活性的影响。结果显示1nmol/LOA与PC12共培养48小时,NOS活性轻度增强;当增加OA浓度至10nmol/L时,培养24和48小时均可见NOS活性明显增强,结果表明根据1nmol/LOA抑制蛋白磷酸酶（PP）-2A,而10nmol/LOA除完全抑制PP-2A外,还部分抑制PP-1,提示PP-2A和PP-1的抑制均可增强NOS活性使NO产生增加,关于蛋白磷酸酶活性降低和NO产生增多与AD的关系和作用有待继续研究。