人胰岛素样生长因子Ⅱ在甲醇营养型酵母P.pastoris中的表达、分泌和性质研究

为获得ＩＧＦ－Ⅱ的高效表达,构建了其多拷贝、分泌型表达载体：含有５个串联的ＩＧＦ－Ⅱ表达单元;由受甲醇诱导的醇氧化酶启动子控制表达;利用啤酒酵母α因子的前导肽引导分泌．线形化表达载体转化Ｐ．ｐａｓｔｏｒｉｓ蛋白酶缺陷型菌株后,筛选到有ＩＧＦ－Ⅱ表达和分泌的阳性转化子;进一步优化表达、培养条件后,ＩＧＦ－Ⅱ在高密度发酵上清中的产量可达６０ ｍ ｇ／Ｌ．对Ｐ．ｐａｓｔｏｒｉｓ产生的ｒｈＩＧＦ－Ⅱ的性质分析表明,其具有正确的分子量,Ｎ 端和较好的生物活性．     

人胰岛素在甲醇酵母Pichia pastoris中的分泌表达

将猪胰岛素前体基因和在其５’端引入９个氨基酸的间隔肽序列的ＰＩＰ基因插入到Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ的分泌表达质粒ｐＰＩＣ９中,得到分泌表达质粒ｐｐＩＣ９／ＰＩＰ和ｐＰＣ９／ｓｐ－ＰＩＰ７并用以转化ｐａｓｔｏｒｉｓ ＧＳ１１５。用点杂交筛选,获得高拷贝转化Ｐ３９（－ｓｐ）和Ｓ５１（＋ｓｐ）。     

利用PCR方法鉴定甲醇酵母转化子的表型

本文以含外源基因的甲醇酵母表达载体ｐＰＩＣ９／Ｅ２Ｆ－１－ＤＢ质粒ＤＮＡ电转化甲醇酵母ＧＳ１１５,小规模抽提所得转化子的总ＤＮＡ,并以其为模板,以乙醇氧化酶（ＡＯＸ１）５’端序列和３’端的ＴＴ序列为引物,进行ＰＣＲ反应。ＰＣＲ产物走０．８％Ａｇａｒｏｓｅ电泳,通过对ＰＣＲ产物的电泳带型分析,鉴定出甲醇酵母转化子的表型,即Ｍｕｔ＾＋或Ｍｕｔ＾ｓ。这一鉴定结果为转化子的诱导表达产物的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ图     

甲醇对蚕豆气孔开启的影响

在一定的深度范围内,甲醇能促进蚕豆气孔的开启,最适浓度为１．５％,与６－苄基腺嘌呤（６－ＢＡ）有协同增效作用,对脱落酸（ＡＢＡ）有拮抗作用。     

毕赤氏酵母工程菌高密度发酵表达恶性疟原虫融合抗原的研究

疟疾目前仍是危害人类健康的主要传染病,现全球每年新增疟疾病例3～5亿人,其中约300万人死于该病.特别是病原虫抗药性的产生和扩散已给疟疾防治工作带来极大困难,因此研制新的预防措施已成为当务之急.研制有效的疟疾疫苗被认为是人类控制乃至消灭疟疾的重要途径,已越来越受到重视,并已构建和鉴定多个疫苗候选抗原[1,2].本研究进行高密度优化表达的融合抗原就是一个疫苗候选抗原.     

超临界甲醇酯交换法制备生物柴油研究进展

超临界甲醇法制备生物柴油是动、植物油脂与超临界甲醇发生酯交换反应生成脂肪酸甲酯的工艺。与传统的酸、碱催化法以及酶催化法等技术相比,超临界酯交换反应具有不需要催化剂、反应速度快、产物分离简单等突出特点。缺点在于反应温度和压力条件不够温和,对设备要求较高,操作费用可观。如何从系统工程的角度发挥其优点、克服缺点,则是未来该项技术能否实现工业化应用的关键。回顾了该技术的研究进展,重点对过程的影响因素进行了分析讨论。     

割一年休一年割草制度下羊草群落植物多样性动态变化

利用1982—2002年样方观测资料,对典型草原区羊草草原群落割一年休一年刈割处理过程中的植物多样性变化规律及引起这些变化的主要植物种群进行了研究。结果表明:建群种羊草的个体数量先下降然后略有上升,但总体呈下降趋势;偶见种和伴生种增加,但组成有所不同。就群落多样性而言,多样性指数和均匀性指数均呈现一个明显高峰值的单峰曲线,物种分布的均匀度是影响多样性指数变化的主要因子。群落主要植物种群密度、生物量与多样性指数存在显著的相关关系,这与它们在群落中的作用有关。     

丝氨酸生产菌的筛选及静息细胞培养系统中L-丝氨酸的合成

从广西隆安县沼气池里的残渣中筛选到一株能以甲醇为唯一碳源生长的MB200菌株。根据常规形态特征、生理生化性状及16S rDNA基因序列分析将其鉴定为甲基杆菌属(M ethylobacteriumsp.)。其最佳生长条件为:温度32℃、pH值8.0、甲醇体积分数1.25%。建立了MB200生成L-丝氨酸的静息细胞培养系统。确定静息细胞培养的条件为:甘氨酸质量浓度为10 g.L-1,甲醇50 g.L-1,菌体质量浓度为30 g.L-1,pH8.9,于摇床250 r.m in-1,32℃静息培养48 h,L-丝氨酸产量为7.2 g.L-1。     

紫花曼陀罗悬浮培养细胞转化对羟基苯甲醛生产天麻素

利用紫花曼陀罗细胞悬浮培养转化外源对羟基苯甲醛合成天麻素,并应用多种色谱技术进行分离纯化,根据转化产物的理化性质和光谱数据分析鉴定结构。实验表明,紫花曼陀罗细胞成功将对羟基苯甲醛转化为天麻素(Ⅱ),同时也得到了由对羟基苯甲醛生成天麻素的转化中间体对羟基苯甲醇(Ⅰ)。在培养基中添加0.1mg/L的水杨酸能显著提高细胞对外源对羟基苯甲醛的糖基化率,而保持气升式发酵罐(25-L)罐内压力为低压(0.001MPa)也能提高细胞对外源对羟基苯甲醛的糖基化率。实验证明,紫花曼陀罗细胞悬浮培养能有效转化对羟基苯甲醛合成天麻素。     

Two New Bis—labdanic Diterpenoids from Alpinia calcarata

Two novel bis—labdanic diterpenoids named calcaratarin G and calcaratarin H were isolated from the rhizomes of Alpinia calcarata Rosc．Their structures were elucidated to be a pair of stereoiso-mers on the basis of the spectral evidence．The 2D NMR techniques including’H-1H COSY,HMQC,HMBC,NOESY and HRFABMS were extensively applied to establish the structures．