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研究在重组毕赤酵母(GS115,Mut+)表达猪圆环病毒Cap蛋白的发酵过程中,甲醇毒害作用以及溶氧波动影响目的蛋白的正常表达。基于对甲醇和山梨醇代谢途径的分析,将C源流加的手动调节与反馈控制相结合,提出了1种新型的甲醇/山梨醇共混诱导策略,能够将溶氧稳定地控制于某一设定值,同时避免甲醇毒害作用。使用该策略将溶氧控制于20%的批次,C源(甲醇和山梨醇)添加过少,导致Cap蛋白表达量较低(54 mg/L);而将溶氧控制于10%的批次,C源流加速率适宜,Cap蛋白表达量达到198 mg/L,表达水平明显高于采用传统甲醇诱导策略(0 mg/L)和DO-stat诱导策略的批次(121 mg/L)。 相似文献
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多形汉逊酵母外源基因表达系统 总被引:7,自引:2,他引:5
多形汉逊酵母是一种有很大潜力的外源基因表达系统,已在科研和工业化生产上广泛应用。用它生产来源于真核生物的外源基因有许多优点,如重组菌减数分裂稳定、能进行正确的翻译后加工和修饰、表达量高等。许多有商业价值的蛋白质在这一系统中得到成功表达,有的已投入市场。本文综述多形汉逊酵母宿主菌的生物学特性、基因工程操作技术、发酵及外源基因表达等方面的特点和最新进展。 相似文献
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二十二碳六烯酸甲酯标准样品的研制 总被引:1,自引:0,他引:1
本制备采用以深海鱼油为基础原料,在碱性条件下皂化水解为游离脂肪酸,经尿素-甲醇包合分离后,以硫酸-甲醇甲酯化,再经硝酸银-硅胶柱层析分离,从而得到高纯度的二十二碳六烯酸甲酯标准物质,并经定值测试,确认该标准物质的含量≥98%以上。 相似文献
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为获得IGF-Ⅱ的高效表达,构建了其多拷贝、分泌型表达载体:含有5个串联的IGF-Ⅱ表达单元;由受甲醇诱导的醇氧化酶启动子控制表达;利用啤酒酵母α因子的前导肽引导分泌.线形化表达载体转化P.pastoris蛋白酶缺陷型菌株后,筛选到有IGF-Ⅱ表达和分泌的阳性转化子;进一步优化表达、培养条件后,IGF-Ⅱ在高密度发酵上清中的产量可达60 m g/L.对P.pastoris产生的rhIGF-Ⅱ的性质分析表明,其具有正确的分子量,N 端和较好的生物活性. 相似文献
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人胰岛素在甲醇酵母Pichia pastoris中的分泌表达 总被引:16,自引:0,他引:16
将猪胰岛素前体基因和在其5’端引入9个氨基酸的间隔肽序列的PIP基因插入到Pichia pastoris的分泌表达质粒pPIC9中,得到分泌表达质粒ppIC9/PIP和pPC9/sp-PIP7并用以转化pastoris GS115。用点杂交筛选,获得高拷贝转化P39(-sp)和S51(+sp)。 相似文献