过表达IDO骨髓间充质干细胞对腹腔异位移植心脏模型大鼠炎症反应、T细胞亚群和NF-κB/NLRP3通路的影响

摘要 目的：探讨过表达吲哚胺2,3-双加氧酶（IDO）骨髓间充质干细胞（BMSCs）对腹腔异位移植心脏模型大鼠炎症反应、T细胞亚群和核因子（NF）-κB/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3（NLRP3）通路的影响。方法：慢病毒载体及基因开启技术构建过表达IDO大鼠BMSCs,建立60只大鼠腹腔异位移植心脏模型,造模成功后,随机分为4组,每组各15只。空白组建模后未给予任何处理,吗替麦考组喂养吗替麦考40 mg/kg,空白-BMSCs组在腹腔异位移植心脏术后3 d,经尾静脉注射空白-BMSCs,IDO组在腹腔异位移植心脏术后3 d,经尾静脉注射过表达IDO-BMSCs（每只400 μL,10⁶个细胞）。检测并对比四组心功能、血清心肌酶、炎症因子、T细胞亚群、心脏病理变化以及NF-κB/NLRP3通路相关蛋白表达情况。结果：IDO组射血分数差值、环比收缩（FS）差值大于空白组、吗替麦考组、空白-BMSCs组（P＜0.05）,血清肌钙蛋白I（cTnI）、肌酸激酶同工酶（CK）-MB、白细胞介素（IL）-1α、IL-1β、IL-2、γ干扰素（IFN-γ）、IL-18水平以及脾脏组织CD40、CD86、CD80、MHC II、CD45RA、CD45RA+CD45RB,心脏组织NF-κB、NLRP3、半胱氨酸蛋白酶-1（Caspase）-1表达低于空白组、吗替麦考组、空白-BMSCs组（P＜0.05）,血清IL-10、TGFβ1、TGFβ3水平以及脾脏组织CD274、Treg表达高于空白组、吗替麦考组、空白-BMSCs组（P＜0.05）。HE染色结果显示IDO组炎症细胞浸润较空白组、吗替麦考组、空白-BMSCs组明显减少。结论：过表达IDO-BMSCs可减轻免疫和炎症反应,改善移植心脏功能,可能与其抑制NF-κB/NLRP3信号通路的激活有关。     

肝细胞癌组织miR-124-3p、miR-212-5p表达与PI3K/Akt信号通路和预后的关系研究

摘要 目的：探讨肝细胞癌组织中微小核糖核酸（miR）-124-3p、miR-212-5p表达与磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）信号通路和预后的关系。方法：选择2017年9月至2019年9月徐州医科大学附属医院肝胆外科收治的93例肝细胞癌患者,采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测肝细胞癌组织中miR-124-3p、miR-212-5p、PI3K 信使RNA（mRNA）、Akt mRNA的表达。Pearson相关性分析miR-124-3p、miR-212-5p表达与PI3K/Akt信号通路相关mRNA表达的相关性。绘制Kaplan-Meier生存曲线,Log-Rank检验不同miR-124-3p、miR-212-5p表达肝细胞癌患者3年总生存率（OS）的差异。结果：肝细胞癌组织中miR-124-3p表达低于癌旁组织（P＜0.05）,miR-212-5p、PI3K mRNA、Akt mRNA表达高于癌旁组织（P＜0.05）。肝细胞癌组织中miR-124-3p表达与PI3K mRNA、Akt mRNA表达呈负相关（P＜0.05）,miR-212-5p表达与PI3K mRNA、Akt mRNA表达呈正相关（P＜0.05）。Ⅱa期、低分化患者肝细胞癌组织中miR-124-3p表达低于Ⅰa-Ⅰb期、中高分化患者（P＜0.05）,miR-212-5p表达高于Ⅰa-Ⅰb期、中高分化患者（P＜0.05）。随访期间死亡37例, miR-124-3p低表达组3年OS为42.55%,低于miR-124-3p高表达组的78.26%（P＜0.05）,miR-212-5p高表达组3年OS为50.00%,低于miR-212-5p低表达组的71.11%（P＜0.05）。结论：肝细胞癌组织中miR-124-3p表达下调,miR-212-5p表达上调,且与肝细胞癌PI3K/Akt信号通路激活,PI3K mRNA和Akt mRNA高表达,低分化,CNLC分期Ⅱa期以及低OS有关。     

OSBPL3在代谢相关脂肪性肝病中的作用及机制研究

摘要 目的：探究氧化固醇结合蛋白类似物3（Oxysterol Binding Protein-like 3,OSBPL3）在代谢相关脂肪性肝病中的作用及可能机制。方法：建立肝脏特异性沉默OSBPL3小鼠模型和空载体对照组,分别予以普食和高脂喂养12周。分为正常对照组、OSBPL3沉默组、肥胖对照组、肥胖OSBPL3沉默组。观察小鼠一般情况,Real-time PCR检测脂质合成基因及脂质分解基因mRNA水平,western blot检测Akt/mTOR通路关键蛋白的表达。人HepG2细胞株给予不同浓度油酸（oleic acid,OA）处理,观察油红O染色的变化,western blot检测OSBPL3表达水平。结果：正常对照组与OSBPL3沉默组小鼠各项指标相比无统计学差异（P＞0.05）;与对照组相比,肥胖对照组及肥胖OSBPL3沉默组体质量、内脏脂肪及内脏脂肪指数较高（P＜0.05）;与肥胖对照组相比,肥胖OSBPL3沉默组体质量、内脏脂肪及内脏脂肪指数较低（P＜0.05）。与对照组相比,肥胖对照组及肥胖OSBPL3沉默组总胆固醇(Total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglycerides,TG)、高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein cholesterol,HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein cholesterol,LDL-C)较高（P＜0.05）;与肥胖对照组相比,肥胖OSBPL3沉默组TC、TG、LDL-C及HDL-C较低（P＜0.05）。与正常对照组与OSBPL3沉默组小鼠SREBP-1C、FAS及PPARα表达水平相比无统计学差异（P＞0.05）;与对照组相比,肥胖对照组及肥胖OSBPL3沉默组SREBP-1C、FAS较高,PPARα表达水平较低（P＜0.05）;与肥胖对照组相比,肥胖OSBPL3沉默组SREBP-1C、FAS表达水平较低,PPARα表达水平较高（P＜0.05）。与对照组相比,肥胖对照组Akt及mTOR磷酸化表达水平较高（P＜0.05）;与肥胖对照组相比,肥胖OSBPL3沉默组Akt及mTOR磷酸化表达水平较低（P＜0.05）。随着OA作用浓度的升高,油红O染色逐渐加深。与0 μmol/L油酸相比,油酸以剂量依赖性方式增加HepG2细胞OSBPL3 mRNA水平（P<0.05）。结论：OSBPL3能够调控脂质代谢的表达,可能通过调控Akt/mTOR信号通路发挥生物学功能,有望为研究NAFLD疾病发生发展及治疗提供参考依据。     

宫颈癌组织miR-200b-5p、miR-424-5p表达与临床病理特征、PI3K/AKT/mTOR信号通路和预后的关系研究

摘要 目的：探讨宫颈癌组织微小核糖核酸（miRNA）-200b-5p、miR-424-5p表达与临床病理特征、磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（PI3K/AKT/mTOR）信号通路和预后的关系。方法：选取2016年7月～2019年6月西安市中心医院收治的123例宫颈癌患者,采用定量聚合酶链式反应（qPCR）检测癌组织与癌旁组织中miR-200b-5p、miR-424-5p、PI3K信使RNA（mRNA）、AKT mRNA、mTOR mRNA表达。分析miR-200b-5p、miR-424-5p表达与PI3K mRNA、AKT mRNA、mTOR mRNA表达的相关性及与临床病理特征的关系。采用K-M法绘制不同miR-200b-5p、miR-424-5p表达宫颈癌患者生存曲线。结果：与癌旁组织比较,宫颈癌组织中miR-200b-5p、miR-424-5p表达降低,PI3K mRNA、AKT mRNA、mTOR mRNA表达升高（P＜0.05）。Pearson相关性分析显示,宫颈癌组织中miR-200b-5p、miR-424-5p表达与PI3K mRNA、AKT mRNA、mTOR mRNA表达均呈负相关,PI3K mRNA、AKT mRNA、mTOR mRNA表达呈两两相关（P＜0.05）。miR-200b-5p、miR-424-5p表达与宫颈癌分化程度、国际妇产科联盟（FIGO）分期和淋巴结转移有关（P＜0.05）。随访3年,123例宫颈癌患者累积生存率为62.60%（77/123）。K-M生存曲线分析显示,miR-200b-5p、miR-424-5p高表达组累积生存率分别高于miR-200b-5p、miR-424-5p低表达组（P＜0.05）。结论：宫颈癌组织中miR-200b-5p、miR-424-5p低表达,与分化程度、FIGO分期、淋巴结转移、PI3K/AKT/mTOR信号通路和预后有关。     

靶向Bcl-2克服非小细胞肺癌EGFR-TKIs获得性耐药

摘要 目的：探讨靶向抗凋亡蛋白Bcl-2克服非小细胞肺癌EGFR-TKIs耐药的作用及重定位Bcl-2靶向抑制剂用于克服耐药的可行性。方法：通过药物浓度梯度递增法构建非小细胞肺癌多代EGFR-TKIs耐药株,根据亲本细胞和多代EGFR-TKIs耐药的非小细胞肺癌细胞的RNA-seq数据筛选出潜在耐药相关基因Bcl-2,通过Western blot 检测其在耐药细胞中的蛋白水平。为了探讨Bcl-2诱导耐药的作用,采用siRNA干扰和使用Bcl-2的抑制剂ABT199抑制Bcl-2,通过CCK8法、IncuCyte实时监测和Western blot等方法检测其对亲本和耐药细胞的细胞活力、药物敏感性、增殖和凋亡的影响。随后使用奥希替尼分别处理亲本及耐药细胞,通过Western Blot检测NRF2受到药物作用后及在耐药细胞中的蛋白水平,并以临床公共数据库分析辅助验证。使用siRNA干扰或NRF2抑制剂ML385敲低或抑制NRF2功能,借助Western Blot和CCK8法检测其对Bcl-2表达水平及对EGFR-TKI敏感性的影响;通过加入NRF2的激动剂Ki696探究其对Bcl-2的诱导作用、对EGFR-TKI敏感性的影响及取消靶向Bcl-2逆转耐药的作用。结果：Bcl-2在EGFR-TKIs耐药细胞中上调;敲低或抑制Bcl-2后,可选择性抑制耐药细胞的生长和活力,并诱导凋亡,且能逆转包括第三代药物奥希替尼在内的多代EGFR-TKIs耐药;EGFR-TKI可在敏感细胞中诱导NRF2的上调,且耐药细胞中上调的Bcl-2受NRF2调控。结论：EGFR-TKIs耐药细胞通过上调抗凋亡分子Bcl-2获得耐药,该分子的上调受NRF2的调控,靶向Bcl-2则可以逆转耐药。     

普洱茶茶褐素对代谢综合征大鼠TGF-β/Smads通路、氧化应激反应及肝组织能量代谢变化的影响

摘要 目的：探讨普洱茶茶褐素对代谢综合征大鼠TGF-β/Smads通路、氧化应激反应及肝组织能量代谢变化的影响。方法：60只SPF级SD大鼠,随机分为模型组、对照组、普洱茶茶褐素高、中、低剂量,模型组、高、中、低剂量组大鼠给予高糖、高脂、高盐进行代谢综合征造模,对照组大鼠给予普通饲料喂养,造模同时,普洱茶茶褐素低剂量组给予0.281 g/kg?bw普洱茶茶褐素,中剂量组给予0.562 g/kg?bw,高剂量组给予1.124 g/kg?bw,对照组每日灌胃给予等量的蒸馏水。对比普洱茶茶褐素对大鼠的体重、生化指标的影响,对比5组大鼠心脏组织的TNF-β1蛋白水平、氧化应激反应指标、肝组织能量代谢指标。结果：与对照相比,低、中、高剂量组、模型组的收缩压、体重、低密度脂蛋白、总胆固醇、甘油三酯、空腹血糖、空腹胰岛素、胰岛素抵抗指数、TNF-β1、Smads、髓过氧化物酶、丙二醛明显较高,与低剂量组相比,中、高剂量组、模型组明显较高,与中剂量组相比,高剂量组、模型组明显较高,与高剂量组相比,模型组较高。与对照组相比,低、中、高剂量组、模型组的高密度脂蛋白、谷胱甘肽过氧化物酶、总抗氧化能力、超氧化物酶、ATP、ADP、AMP明显较低,与低剂量组相比,中、高剂量组、模型组较低;与低剂量组相比,高剂量组、模型组较低;与高剂量相比,模型组较低,P<0.05。结论：普洱茶茶褐素可通过代谢综合征大鼠TGF-β/Smads通路,改善氧化应激反应及肝组织能量代谢。     

慢性牙周炎患者血清CGRP、PGE2、CCL20与牙周临床指标和Th17/Treg失衡的相关性分析

摘要 目的：探究慢性牙周炎患者血清降钙素基因相关肽（CGRP）、前列腺素E₂（PGE₂）、CC趋化因子配体20（CCL20）与牙周临床指标和辅助性T淋巴细胞17/调节性T淋巴细胞（Th17/Treg）失衡的相关性。方法：选取2020年5月-2022年5月海南省妇女儿童医学中心收治的91例慢性牙周炎患者,根据其严重程度分为轻度组（39例）、中度组（36例）、重度组（16例）,比较三组血清CGRP、PGE₂、CCL20、牙周临床指标[出血指数（BI）、探诊深度（PD）、附着丧失（AL）、菌斑指数（PLI）]、外周血Th17细胞比例、Treg细胞比例、Th17/Treg比值,采用Pearson相关分析血清CGRP、PGE₂、CCL20与牙周临床指标和Th17/Treg失衡的相关性。结果：与轻度组比较,中度组、重度组血清CGRP、Treg细胞比例显著降低（P＜0.05）,血清PGE₂、CCL20、BI、PD、PLI、AL、Th17细胞比例、Th17/Treg比值显著增高（P＜0.05）;与中度组比较,重度组血清CGRP、Treg细胞比例显著降低（P＜0.05）,血清PGE₂、CCL20、BI、PD、PLI、AL、Th17细胞比例、Th17/Treg比值显著增高（P＜0.05）。相关性结果提示,血清PGE₂、CCL20水平与BI、PD、PLI、AL、Th17细胞比例、Th17/Treg比值呈正相关（P＜0.05）,与Treg细胞比例呈负相关（P＜0.05）;血清CGRP水平与BI、PD、PLI、AL、Th17细胞比例、Th17/Treg比值呈负相关（P＜0.05）,与Treg细胞比例呈正相关（P＜0.05）。结论：慢性牙周炎患者血清CGRP、PGE₂、CCL20水平与疾病严重程度、牙周临床指标及Th17/Treg失衡显著相关,血清CGRP、PGE₂、CCL20可能通过影响Th17/Treg平衡参与慢性牙周炎的发生和发展。     

血清ApoB/ApoA1比值、TG/HDL-C比值、LDH及ALP水平与冠心病患者冠状动脉病变严重程度的关系及其预测价值分析

摘要 目的：探讨血清载脂蛋白B（ApoB）/载脂蛋白A1（ApoA1）比值、三酰甘油（TG）/高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）比值、乳酸脱氢酶（LDH）及碱性磷酸酶（ALP）水平与冠心病（CHD）患者冠状动脉病变严重程度的关系及其预测价值。方法：选取2019年1月-2021年12月因胸痛来我院检查并收治的185例患者,根据检查结果是否为CHD分为CHD组（120例）和对照组（65例）,根据Gensini评分将CHD组分为轻度狭窄亚组36例、中度狭窄亚组55例、重度狭窄亚组29例。入院后检测血清ApoB/ApoA1比值、TG/HDL-C比值、LDH及ALP水平。采用Spearman相关系数分析CHD患者血清ApoB/ApoA1比值、TG/HDL-C比值、LDH、ALP水平与Gensini评分的相关性,采用多因素Logistic回归分析CHD的影响因素;受试者工作特征（ROC）曲线分析血清ApoB/ApoA1比值、TG/HDL-C比值、LDH及ALP水平对CHD的预测价值。结果：与对照组比较,CHD组吸烟、饮酒、高血压、糖尿病比例和血清总胆固醇（TC）、TG、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、ApoB、ApoB/ApoA1比值、TG/HDL-C比值、LDH、ALP水平升高,HDL-C、ApoA1水平降低（P＜0.05）。轻度、中度、重度狭窄亚组血清ApoB/ApoA1比值、TG/HDL-C比值、LDH及ALP水平依次升高（P＜0.05）。CHD患者血清ApoB/ApoA1比值、TG/HDL-C比值、LDH、ALP水平与Gensini评分呈正相关（P均＜0.001）。多因素Logistic回归分析显示,高血压、血清ApoB/ApoA1比值、TG/HDL-C比值、LDH、ALP水平升高为CHD的独立危险因素（P＜0.05）。ROC曲线分析显示,血清ApoB/ApoA1比值、TG/HDL-C比值、LDH及ALP水平联合预测CHD的曲线下面积大于单独预测（P＜0.05）。结论：血清ApoB/ApoA1比值、TG/HDL-C比值、LDH、ALP水平与CHD患者冠状动脉病变严重程度有关,且联合预测CHD的价值较高。     

盐酸艾司洛尔联合右美托咪定对肺癌患者应激反应和Th1/Th2型细胞因子的影响

摘要 目的：探讨盐酸艾司洛尔联合右美托咪定对肺癌患者应激反应和辅助性T细胞1（Th1）/Th2型细胞因子的影响。方法：选取武汉科技大学附属天佑医院2020年6月~2022年3月期间收治的肺癌根治术患者112例。按照随机数字表法将患者分为对照组（n=56,常规麻醉联合盐酸右美托咪定注射液）和研究组（n=56,对照组基础上联合盐酸艾司洛尔注射液）。对比两组苏醒质量、肺功能指标、应激反应指标、Th1/Th2型细胞因子和术后肺部并发症发生率变化情况。结果：研究组的呼吸恢复时间、定向力恢复时间、拔管时间短于对照组（P<0.05）。研究组术后肺部并发症发生率低于对照组（P<0.05）。研究组术毕动态肺顺应性（Cdyn）高于对照组,平台压（Pplat）、气道峰压（Ppeak）低于对照组（P<0.05）。研究组术毕皮质醇（Cor）、去甲肾上腺素（NE）及肾上腺素（E）低于对照组（P<0.05）。研究组术毕肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-2（IL-2）低于对照组（P<0.05）,研究组术毕白细胞介素-10（IL-10）、转化生长因子-β1（TGF-β1）高于对照组（P<0.05）。结论：盐酸艾司洛尔联合右美托咪定用于肺癌根治术中,具有较好的麻醉效果,可有效减轻术中应激反应,调节免疫功能并保护肺功能,还可降低术后肺部并发症发生率。     

微生物分子生态技术:16S rRNA/DNA方法

综述了以 1 6SrRNA/DNA为基础的分子生物学技术在环境微生物种群分析中的应用 ,目的是使相关的科研人员能够对 1 6SrRNA/DNA技术有一个比较完整的了解 ,并可以开展初步的实验工作。主要内容包括 :DNA指纹技术、 1 6SrDNA文库的建立、DNA测序及微生物分类鉴定 (即系统发育树分析 )、基因探针设计和测试、荧光原位杂交和核酸印迹杂交等。