全文获取类型
收费全文 | 4408篇 |
免费 | 301篇 |
国内免费 | 1733篇 |
出版年
2024年 | 11篇 |
2023年 | 88篇 |
2022年 | 76篇 |
2021年 | 103篇 |
2020年 | 101篇 |
2019年 | 115篇 |
2018年 | 82篇 |
2017年 | 94篇 |
2016年 | 123篇 |
2015年 | 114篇 |
2014年 | 247篇 |
2013年 | 194篇 |
2012年 | 254篇 |
2011年 | 280篇 |
2010年 | 282篇 |
2009年 | 298篇 |
2008年 | 482篇 |
2007年 | 286篇 |
2006年 | 266篇 |
2005年 | 327篇 |
2004年 | 288篇 |
2003年 | 254篇 |
2002年 | 268篇 |
2001年 | 220篇 |
2000年 | 192篇 |
1999年 | 179篇 |
1998年 | 141篇 |
1997年 | 176篇 |
1996年 | 114篇 |
1995年 | 92篇 |
1994年 | 102篇 |
1993年 | 92篇 |
1992年 | 93篇 |
1991年 | 91篇 |
1990年 | 93篇 |
1989年 | 73篇 |
1988年 | 51篇 |
1987年 | 15篇 |
1986年 | 15篇 |
1985年 | 38篇 |
1984年 | 9篇 |
1983年 | 6篇 |
1982年 | 3篇 |
1981年 | 7篇 |
1980年 | 2篇 |
1966年 | 1篇 |
1963年 | 2篇 |
1958年 | 1篇 |
1950年 | 1篇 |
排序方式: 共有6442条查询结果,搜索用时 31 毫秒
81.
α-1抗胰蛋白酶Z型突变体蛋白(α-1 antitrypsin Z-mutant protein, ATZ)是引发α-1抗胰蛋白酶缺陷症(α-1 antitrypsin deficiency, AATD)的主要原因,研究ATZ蛋白的泛素化修饰和降解对于治疗AATD具有重要意义。STUB1是一种重要的E3泛素连接酶,参与调节多种蛋白质的泛素化修饰。然而,STUB1是否参与ATZ的泛素化修饰尚未明确。本研究首先将ATZ和STUB1的编码基因克隆到pET28a质粒,构建了这2个蛋白的表达质粒。随后,将重组质粒转入大肠杆菌表达系统,在优化诱导条件实现了重组蛋白的异源表达。通过金属螯合亲和层析技术纯化得到目的蛋白,并通过蛋白质谱分析验证了其氨基酸序列的准确性。利用纯化的ATZ和STUB1重组蛋白,构建了一个体外泛素化修饰反应体系。实验结果显示,在ATP、E1泛素激活酶和E2泛素结合酶的协同作用下,STUB1成功催化了ATZ的泛素化修饰。本研究提供了一种体外获得Z型突变体ATZ纯化蛋白的方法,并确认了STUB1介导ATZ的泛素化修饰功能,推进了对α-1抗胰蛋白酶Z型突变体蛋白在细胞内降解过程的调控机制的理解。 相似文献
82.
N-氨甲酰基水解酶是一种非常具有工业应用价值的水解酶,可用于制备光学纯氨基酸。通过LA PCR从Sinorhizobium morelensS-5菌中克隆到1.3kb的DNA片段,测序表明该片段上含有一个完整的N-氨甲酰基水解酶的基因(hyuC)序列。将hyuC基因克隆到表达载体pET30a上,重组质粒pET30a-HyuC在大肠杆菌中获得了高水平表达。重组的N-氨甲酰基水解酶经过热处理和三步柱色谱分离而纯化。纯化倍数为16.1倍,收率21.2%。该酶为同源四聚体,亚基分子量是38kDa。最适温度是60℃,最适pH为7.0。该酶有较高的热稳定性和氧化稳定性。Fe2 和Ca2 对酶的活性有一定的促进作用,而金属螯合剂和巯基试剂对酶活无明显影响。 相似文献
83.
利用PCR技术从北京黑白花奶牛(Bostaurus)的基因组DNA中克隆了SRY(Sex-determiningregionontheYchromosome)基因编码区全长序列。序列分析表明牛SRY基因的HMG区(Highmobilitygroup)呈现高度的保守性,与人、小鼠、猪等的相似性达到70%。将SRY基因与pET-28a( )载体相连,构建表达载体pET-28a/SRY;把该表达载体转入大肠杆菌BL21(DE3),以IPTG诱导30℃诱导4h,SRY蛋白可高效表达,表达产物占总蛋白量的26%。对表达产物进行了Western-blotting检测,并采用亲和层析技术获得了高纯度的牛SRY蛋白。通过PCR技术分别获得牛、人、鼠的苗勒氏管抑制物(MullerianInhibitingsubstances,MIS)启动子,凝胶阻滞试验证明,牛SRY蛋白可与人及牛的MIS启动子结合,但与鼠的Mis启动子不发生相互作用。 相似文献
84.
在生物新课标上对于选修1的专题2“微生物的培养与应用”中的课题1“微生物的实验室培养”有下列要求:具体内容标准为“进行微生物的分离和培养”,活动建议是“用大肠杆菌为材料进行平面培养,分离菌落”。为此笔者在教学中给学生提供了实验条件,并指导10个班的学生设计并进行了实验,取得了 相似文献
85.
"光合色素的提取与分离"的实验教学 总被引:1,自引:1,他引:0
1 教学目标(略) 2 重点和难点 1)教学重点:①叶绿体中色素的种类和各种色素的颜色。②学会用纸层析法将色素进行分离。解决方法:通过实验,验证叶绿体中色素的种类和各种色素的颜色。通过学生间的观察、讨论,明确了各种色素在滤纸条上扩散速度以及产生这种现象的 相似文献
86.
棉花是一种重要的经济作物,其生产和产量要受到干旱、低温和高盐等环境胁迫的影响,因此提高棉花对这些胁迫的抗性非常重要.脱水应答元件(DRE-dehydrationresponsiveelement)结合蛋白(DBP)在调节植物对环境胁迫的抗性中起到非常重要的作用.而且过量表达DBP类基因的转基因植株能够很好抵抗这些环境胁迫,所以研究棉花中此类DRE元件结合蛋白对棉花生产有非常重要的意义.在以前的工作中,从棉花中分离一个DBP基因,命名为GhDBP1并在转录水平上分析它在棉花植株中的表达特征.在研究中,报道了GhDBP1的原核表达、纯化和它的DNA结合特性.GhDBP1基因的编码区用PCR技术扩增出来插入到原核表达载体pET28a中,并转化到大肠杆菌菌株BL21(DE3)中.经过IPTG诱导,GhDBP1融合蛋白在BL21(DE3)菌株中成功进行表达.利用Ni-NTA亲和层析技术得到了纯化的融合蛋白.在非同位素的凝胶滞留实验中,纯化的GhDBP1融合蛋白能够结合到含有DRE元件的DNA片段上.另外,用SWISS-MODEL软件对GhDBP1蛋白的DNA结合区的三维结构进行了计算机模拟.模拟的结果显示,GhDBP1蛋白的DNA结合区的主链结构和折叠模式与已知的拟南芥GCC盒结合蛋白AtERF1的DNA结合区结构很相似.这些结果显示了GhDBP1是一个脱水应答元件(DRE)结合的转录因子,并可能运用与AtERF1的DNA结合区相似的结构和它的目标序列脱水应答元件(DRE)相结合. 相似文献
87.
88.
89.
90.
采用4℃反复浸提、离心、硫酸铵沉淀、DEAE—Sepharose Fast Flow离子交换柱层析,从紫球藻(Porphyridium cruentum Naegeli)冻干粉中分离纯化藻红蛋白,分离纯度达到4.85,总收率51.9%;经羟基磷灰石柱层析纯化,藻红蛋白纯度达到5.10,总收率34.0%,聚丙烯酰胺凝胶电泳显示1条带。所分离纯化的藻红蛋白含有3个亚基(α、β、γ),在可见光区545nm和560nm处有2个吸收峰,在498nm处有1个吸收肩峰。实验结果说明所分离纯化的藻红蛋白纯度符合要求。 相似文献