体外重构STUB1介导α-1抗胰蛋白酶突变体Z蛋白泛素化修饰反应体系 |
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引用本文: | 凌雪,代艳,叶晓,张肖雅,林佳雨,饶朗,田朝光.体外重构STUB1介导α-1抗胰蛋白酶突变体Z蛋白泛素化修饰反应体系[J].生物工程学报,2024,40(2):517-528. |
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作者姓名: | 凌雪 代艳 叶晓 张肖雅 林佳雨 饶朗 田朝光 |
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作者单位: | 中国科学技术大学生命科学与医学部, 安徽 合肥 230026;中国科学院天津工业生物技术研究所 国家合成生物技术创新中心 低碳合成工程生物学重点实验室, 天津 300308;中国科学院天津工业生物技术研究所 国家合成生物技术创新中心 低碳合成工程生物学重点实验室, 天津 300308;天津科技大学生物工程学院, 天津 300457 |
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基金项目: | 天津市合成生物技术创新能力提升行动(TSBICIP-CXRC-048) |
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摘 要: | α-1抗胰蛋白酶Z型突变体蛋白(α-1 antitrypsin Z-mutant protein, ATZ)是引发α-1抗胰蛋白酶缺陷症(α-1 antitrypsin deficiency, AATD)的主要原因,研究ATZ蛋白的泛素化修饰和降解对于治疗AATD具有重要意义。STUB1是一种重要的E3泛素连接酶,参与调节多种蛋白质的泛素化修饰。然而,STUB1是否参与ATZ的泛素化修饰尚未明确。本研究首先将ATZ和STUB1的编码基因克隆到pET28a质粒,构建了这2个蛋白的表达质粒。随后,将重组质粒转入大肠杆菌表达系统,在优化诱导条件实现了重组蛋白的异源表达。通过金属螯合亲和层析技术纯化得到目的蛋白,并通过蛋白质谱分析验证了其氨基酸序列的准确性。利用纯化的ATZ和STUB1重组蛋白,构建了一个体外泛素化修饰反应体系。实验结果显示,在ATP、E1泛素激活酶和E2泛素结合酶的协同作用下,STUB1成功催化了ATZ的泛素化修饰。本研究提供了一种体外获得Z型突变体ATZ纯化蛋白的方法,并确认了STUB1介导ATZ的泛素化修饰功能,推进了对α-1抗胰蛋白酶Z型突变体蛋白在细胞内降解过程的调控机制的理解。
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关 键 词: | α-1抗胰蛋白酶 泛素化 E3泛素连接酶 蛋白纯化 蛋白酶体 |
收稿时间: | 2023/7/21 0:00:00 |
修稿时间: | 2023/10/7 0:00:00 |
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