十字花科蔬菜萝卜硫素合成代谢相关基因及外源调控

萝卜硫苷是十字花科蔬菜中一种重要的次级代谢产物,其水解产物萝卜硫素对人体有明显的抗氧化和防癌抗癌功效。在十字花科蔬菜中萝卜硫素的前体物质萝卜硫苷的合成阶段分为:氨基酸侧链的延长、核心结构的形成、侧链的次级修饰;萝卜硫苷经由黑芥子酶水解成萝卜硫素。该文综述了萝卜硫苷合成及调控相关基因(BCAT、MAM、CYP79/CYP83、AOP和MYB基因家族)的研究进展,及外源物质如:Na Cl、肥料(硫、氮、硒)、植物激素(茉莉酸甲酯、油菜素内酯、生长素)、氨基酸等对萝卜硫素合成代谢途径的影响,为萝卜硫素合成代谢途径从基因表达方面进行深入研究奠定理论基础。     

H1foo的分子结构特征及其功能

哺乳动物细胞内存在着多种亚型的连接组蛋白,其中H1foo是首先在小鼠中发现、在卵母细胞中特异表达的一种连接组蛋白.H1foo通过与染色质的结合,改变染色质的结构,进而参与卵母细胞的成熟、受精后对精子染色质的重构及在体细胞核移植中对体细胞核的重编程等.本文就H1foo的分子结构特征、表达特点及其在受精过程、体细胞核的重编程过程中的作用作一综述.     

H1foo的分子结构特征及其功能

哺乳动物细胞内存在着多种亚型的连接组蛋白,其中Hlfoo是首先在小鼠中发现、在卵母细胞中特异表达的一种连接组蛋白。H1foo通过与染色质的结合,改变染色质的结构,进而参与卵母细胞的成熟、受精后对精子染色质的重构及在体细胞核移植中对体细胞核的重编程等。本文就Hlfoo的分子结构特征、表达特点及其在受精过程、体细胞核的重编程过程中的作用作一综述。     

链霉菌看家基因引物的设计与验证

看家基因的扩增与测序是进行多基因系统进化分析首先需要解决的问题。针对链霉菌这一群高(G C)mol%革兰氏阳性细菌,选定4个看家基因:atpD、recA、rpoB和trpB,利用NCBI数据库中已有的2个链霉菌和3个分枝杆菌的全基因组序列,以及另两个链霉菌的recA基因序列,通过软件分析设计了各基因的扩增和测序引物,并优化了扩增反应条件。从所试验的55株链霉菌中,均特异地扩增出了上述4个基因的片段,并成功进行了序列测定,验证了所设计引物的实用性。所归纳的引物设计方法可用于高(G C)mol%革兰氏阳性细菌的其它看家基因,以促进多基因系统进化研究的开展。     

高半胱氨酸在平滑肌细胞中介导DNA甲基化及机制的研究

高同型半胱氨酸血症是引起动脉粥样硬化一个重要独立的危险因子,可以引起基因DNA甲基化表型改变和蛋白质表达失调,但是基因甲基化表型改变的特点和动脉粥样硬化是否有关及其机制,到目前为止还没有研究清楚.在平滑肌细胞培养的基础上研究高同型半胱氨酸血症对DNA甲基化的影响,高半胱氨酸诱导DNA甲基化表型改变的特征及潜在的机制.高半胱氨酸加入人脐静脉平滑肌培养24h后,高效液相检测SAM和SAH的浓度,实时RT-PCR和蛋白质印迹检测SAH水解酶mRNA和蛋白质表达.通过内源性DNA甲基转移酶活性变化、基因组DNA接受甲基的能力、甲基化限制性内切酶分析检测DNA甲基化水平的变化.结果显示,随着高半胱氨酸浓度的增加,SAH水平增加,SAM和SAM/SAH比率下降,SAH水解酶水平下降,但DNA甲基转移酶活性增加,用不同甲基化限制性内切酶分析发现C↓CGG序列更容易甲基化.由此可以推测,不同剂量的高半胱氨酸引起细胞损害效应的机制也不同,在低、中度高同型半胱氨酸血症,高半胱氨酸主要通过干扰高同型半胱氨酸的代谢途径影响基因表达表型修饰,在高度高同型半胱氨酸血症可能氧化应激、凋亡、炎症等发挥了更重要的作用.     

抑制Dicer基因对shRNA功能发挥的影响

本文将Dicer基因的RNA酶Ⅲ结构域作为靶区,设计并构建了两个抗Dicer基因的小发夹样RNA(shRNA)表达载体,将其转染2215、结肠癌TC细胞和基因组中整合有绿色荧光蛋白基因(GFP)的HepG2 A9细胞,通过RT-PCR评价RNA干扰抑制Dicer基因表达的效率;当HepG2 A9细胞Dicer基因表达被上述RNA干扰抑制时,再转染抗GFP的shRNA表达载体,通过RT-PCR和荧光显微镜观察GFP表达水平.结果显示,在不同细胞系中,这两个抗Dicer基因shRNA表达载体,均能明显抑制Dicer基因的表达;当Dicer基因受抑时,后续转染抗GFP的shRNA表达载体不能有效抑制GFP的表达.结果表明,抗Dicer基因shRNA表达载体,能够明显抑制Dicer基因的表达;shRNA表达载体的功能发挥需要Dicer酶的直接参与.     

胆固醇酯转运蛋白基因多态性与冠心病关系的研究进展

胆固醇酯转运蛋白(CETP)是杀菌蛋白基因家族的重要成员,其主要功能是介导血浆中的胆固醇酯逆向从外周组织转运至肝脏中。目前,CETP基因被广泛认为是冠状动脉疾病(CHD)易感基因之一,CETP基因位点的遗传差异表明其与高密度脂蛋白浓度的变化有关,而高密度脂蛋白的浓度高低与冠心病的形成有很大的关系。因此,CETP的功能、遗传差异及与冠心病的关系是当前心血管疾病研究中的一个热点。本文较全面地阐述了CETP的生物学特性、功能以及CETP基因多态性与冠心病的关系。     

山羊β乳球蛋白基因的克隆及其在转基因小鼠乳汁中的高效表达 Goat β-lactoglobulin Gene Cloning and High Expression in the Mammary Gland of Transgenic Mice

通过长距离PCR从山羊基因组DNA分两段扩增山羊β乳球蛋白（β-lactoglobulin,BLG）基因,扩增出的两个片段分别克隆到T载体上,利用BLG基因序列自身存在的NarI单酶切位点进行拼接,获得了全长为7.2kb的山羊BLG基因克隆,并构建了它的真核表达载体,经酶切鉴定和序列分析证实了克隆的正确性。用线性化的BLG基因显微注射小鼠受精卵以建立转基因鼠,经PCR和Southern印迹分析证实获得了6只首建者（Founder）转基因小鼠（3♀,3♂）,在泌乳期采集两只F0代转基因雌鼠乳汁并用ELISA测定山羊β乳球蛋白的含量,其表达水平分别为23.49 mg/mL和2.19 mg/mL。 Abstract:To clone goat β-lactoglobulin (BLG) gene,two fragments were amplified from goat genomic DNA by LD-PCR method.The fragments were inserted in T-vectors before being spliced into the whole 7.2 kb BLG gene at a single restriction enzyme site of NarI.Consequently,the eukaryotic expression vector was constructed.All the clones were proved to be correct by restriction enzyme cutting and sequencing analysis.Six Founders (3♀,3♂) of goat BLG transgenic mice were obtained by microinjection and BLG genes integration were confirmed by both PCR and Southern blot analyses.The milk was collected from two lactating female transgenic mice and goat BLG protein contents were measured with ELISA.The results showed that goat BLG protein in milk of the two mice were 23.49 mg/mL and 2.19 mg/mL,respectively.     

转人血清白蛋白基因试管牛的研究

构建了含人血清蛋白（ｈＡＬＢ）的基因的ｃＤＮＡ全,序列,内含子１以及山羊酷蛋白基因启动子和５＇端上游调控序列在内的的乳腺载体ｐｃＤＮＡ３．１－ＧＡＬＢｍ,并通过显微将导入经过体外受精（ＩＶＦ）的奶牛受精卵中,体外培养到桑棋胚后期,取出少许细胞,应用巢式ＰＣＲ对其进行目的基因整合及性别的预鉴定,将１０枚整合胚移植于８头受体母牛,结果有３头妊娠,受孕率为３７．５％（３／８）,其中２头于妊娠中期流产,另     

一株耐高温SOD产生菌的筛选及酶学特性

超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase简称SOD)是生物体防御氧化损伤的金属酶。具有治疗炎症、抗辐射损伤、防癌、抗衰老等广泛药用前景。另外在植物抗逆和生物固氮等方面也有重要作用。自1969年McCord和Fridovich发现该酶以来,人们已从多种动植物和微生物中分离了此酶。SOD的基因工程也取得了令人瞩目的成就。相对而言,动植物Cu、Zn-SOD的研究较活跃,而微生物SOD,特别是Fe-SOD的研究较薄弱。本文报道耐高温SOD产生菌的筛选、鉴定结果,并对酶的稳定性和酶学特性作了研究。