野生仙人掌多糖对肺鳞癌细胞SK-MES-1 生长的抑制作用

目的:探讨仙人掌多糖对体外肺鳞癌细胞(SK-MES-1)生长抑制作用。方法:体外培养SK-MES-1细胞,四甲基偶氮唑盐(MTT)法观察野生仙人掌多糖对其生长的抑制,计算最低抑制浓度及抑制率;观察不同浓度多糖对细胞形态的影响;SDS-PAGE凝胶电泳简析不同组别蛋白质表达的差异。结果:野生仙人掌多糖24 h和48 h对肿瘤细胞的最低抑制浓度和抑制率分别为0.0625 mg/ml.34.06%和0.0625 mg/ml 35.37%;不同组间蛋白质表达有差异。结论:野生仙人掌多糖对SK-MES-1肺鳞癌细胞有抑制作用。     

口腔鳞癌E钙粘连素表达与颈淋巴结转移相关性的研究

探讨E钙粘连素的表达与口腔鳞癌淋巴结转移的相关性。采用蛋白杂交技术 ,对病理确诊的 68例口腔鳞癌标本进行肿瘤组织总蛋白提取 ,然后行蛋白质免疫印迹检测 (Westernblot)。 68例口腔癌中的E钙粘连素表达显示 ,3 6例淋巴结转移标本与 3 2例未发生淋巴结转移的标本相比 ,E钙粘连素的表达明显降低(P <0 .0 1 )。此结果提示口腔鳞癌淋巴结转移与E钙粘连素的丧失密切相关 ,E钙粘连素的表达可以作为极有价值的判定肿瘤转移发生可能性以及愈后的判断指标。     

人尿道(阴茎)鳞癌上皮细胞(HUS-98)cDNA文库的构建及鉴定

为了进一步分离人尿道(阴茎)鳞癌组织特异性表达基因和鳞癌特异性相关基因,采用SMART技术,构建了人尿道 (阴茎)鳞癌上皮细胞cDNA文库,从人尿道(阴茎)鳞癌上皮细胞中分离总RNA并纯化mRNA,利用经修饰的oligo(dT)引物 合成cDNA第一链,利用SMART核苷酸作为cDNA第一链在mRNA5′端延伸出去的模板,采用LD-PCR合成双链cDNA,双链 cDNA经酶切和过柱分级分离后,克隆入λTriplEx2载体后经体外包装而成cDNA文库。结果表明原始人尿道(阴茎)鳞癌上 皮cDNA文库获得1.57×107个重组子,重组率达到98%。文库扩增后,滴度达到4.0×109pfu/ml,插入cDNA平均长度为2.5kb。 构建的人尿道(阴茎)鳞癌上皮cDNA文库具有良好的质量,该cDNA文库为进一步筛选鳞癌抑癌基因及鳞癌特异性表达基因 奠定了基础。     

食管鳞癌Cyclin D1与细胞增殖关系的研究及意义

目的　探讨食管鳞癌细胞中细胞周期素D1(CyclinD1)表达与细胞增殖的关系及意义。方法　应用免疫组织化学和流式细胞术检测 48例食管鳞癌组织中CyclinD1蛋白表达及DNA倍体、S期细胞比值、G2 /M期细胞比值。结果　 48例食管鳞癌中CyclinD1阳性表达率为 45 8%(2 2 / 48) ;DNA异倍体检出率为 5 0 %(2 4/ 48) ,CyclinD1阳性表达的标本中DNA异倍体的检出率为 6 8 2 %(15 / 2 2 ) ,显著高于CyclinD1阴性表达的标本 (33 3%,9/ 2 7,P <0 0 5 )。CyclinD1表达阳性的肿瘤中细胞周期G2 /M期的比值也明显高于CyclinD1表达阴性的肿瘤 (分别为 5 98± 4 87和 4 12± 2 70 ,P<0 0 5 )。结论　从观察结果推测CyclinD1的表达可以加速肿瘤细胞增殖。分析食管鳞癌CyclinD1、DNA倍体及不同时相的细胞增殖有助于帮助分析和判断病人的预后。     

MACC1和C-Met在口腔白斑和口腔鳞状细胞癌中的表达及意义

目的:探讨分析MACC1和C-Met在正常口腔黏膜、口腔白斑及口腔鳞状细胞癌中的表达及其临床意义。方法:采用免疫组化SP法检测20例口腔黏膜、20例上皮异常增生白斑、50例口腔鳞癌组织中的MACC1、C-Met蛋白的表达情况,采用X2和spearman等级相关分析对结果进行判定。结果:MACC1、C-Met蛋白在异常增生型白斑和口腔鳞癌中的阳性表达率分别为50%、76%,35%、66%,均明显高于正常口腔黏膜(17.6%,5.0%),差异均有统计学意义(P0.05)。MACC1和C-Met蛋白表达与口腔鳞癌的分期、淋巴结转移及分化程度密切相关(P0.05)。Spearman等级相关分析显示口腔白斑及口腔鳞癌中MACC1和C-Met的表达呈现正相关(P0.05)。结论:MACC1和C-Met在上皮不典型增生性白斑和口腔鳞癌中高表达,二者在口腔黏膜白斑的癌变和口腔鳞癌的发生发展中可能起重要作用。     

DKK-1和MMP-14在口腔鳞癌中的表达及其意义

目的:研究DKK-1蛋白和MMP-14蛋白在口腔鳞状细胞癌组织中的表达和临床意义。方法:选择口腔鳞癌石蜡标本62例作为实验组,25例正常口腔黏膜组织作为对照组。应用免疫组织化学法检测其DKK-1和MMP-14蛋白的表达,并分析二者与口腔鳞癌患者临床病理特征之间的关系及二者表达的相关性。结果:实验组DKK-1的阳性表达率为40.32%,明显低于对照组中(68%),而MMP-14的阳性表达率(72.58%)明显高于对照组(24%)(P0.05)。DKK-1和MMP-14的表达水平与口腔鳞癌的分期、淋巴结转移及分化程度有显著相关(P0.05)。口腔鳞癌组织中DKK-1和MMP-14蛋白的表达呈显著负相关(r=-0.600,P0.05)。结论:口腔鳞状细胞癌组织中DKK-1的表达下调,MMP-14的表达上调,二者可能参与了OSCC的发生和发展过程,并有望用于口腔鳞状细胞癌的病情和预后评估。     

AEG-1和MMP-9在口腔鳞癌中的表达与临床意义

目的:研究星形细胞提升基因-1(AEG-1)与基质金属蛋白酶-9(MMP-9)在口腔鳞癌组织中的表达及其临床意义。方法:采用免疫组化的方法检测53例口腔鳞癌组织和30例正常口腔黏膜组织中AEG-1和MMP-9的蛋白表达,分析其与口腔鳞癌临床病理参数的关系及二者的相关性。结果:AEG-1和MMP-9在口腔鳞癌组织中表达阳性率分别为66.03%(35/53)、73.58%(39/53),在正常口腔黏膜组织中表达阳性率分别为13.33%(4/30)、16.67%(5/30)。AEG-1和MMP-9在口腔鳞癌组织中阳性表达率均高于正常口腔黏膜组织(P0.01)。高表达的AEG-1和MMP-9与口腔鳞癌的组织分化程度,淋巴结转移以及临床分期有密切相关性,但与患者的性别、年龄及吸烟史无相关性。口腔鳞癌组织中AEG-1与MMP-9的表达呈显著正相关(r=0.474,P0.01)。结论:AEG-1和MMP-9的高表达均与口腔鳞癌的发生、发展及转移有密切相关性,同时检测二者可能会对口腔鳞癌的早期诊断及预后判断具有一定的临床参考价值。     

喉鳞癌患者血清中内皮抑素水平对喉鳞癌诊断价值的研究

目的：探讨喉鳞癌患者血清中内皮抑素水平的变化,及其与肿瘤临床分期及预后的关系。方法：（1）对50例喉鳞癌患者、30例喉息肉患者和30例健康人用ELISA方法检测血清中内皮抑素水平;（2）对喉鳞癌组不同临床分期的血清中内皮抑素的水平进行比较。结果：（1）喉鳞癌组血清中内皮抑素水平（51．45&#177;19．83ng／mL）,显著高于喉息肉组（34．56&#177;12．4ng／mL）和正常对照组（33．12&#177;13．04ng／mL）,差别有统计学意义（P〈0．01）。喉息肉组与正常对照组之间差别无显著性（P〉0．05）。（2）Ⅱ期喉鳞癌患者血清内皮抑素的水平（66．22&#177;10．89ng／mL）高于Ⅰ、Ⅱ期患者内皮抑素水平（39．31&#177;14．42ng／mL,47．98&#177;22．01ng／mL）,差别有统计学意义（P〈0．01）,Ⅰ期与Ⅱ期之间内皮抑素水平差别无显著性（P〉0．05）。结论：内皮抑素含量水平可以作为喉鳞癌的诊断及顸后判断的重要指标之一。     

Eps15同源结构域包含蛋白2通过调控Cyclin D1-CDK4-pRb信号轴影响食管鳞癌细胞的增殖

微丝结合蛋白是微丝细胞骨架的重要组成成分,它们通过促进微丝的聚合和解聚来影响微丝的动力学。大量研究已经表明,微丝和微丝结合蛋白参与细胞癌变的所有阶段。我们通过对食管癌蛋白质组数据挖掘结果显示,微丝结合蛋白Eps15同源结构域包含蛋白2(EHD2)在食管癌组织中低表达,且EHD2低表达的食管癌患者预后不良。以往的研究已经证明,EHD2参与调控糖代谢、自噬和肿瘤迁移。然而,EHD2在食管癌进展中的作用和机制仍不清楚。本研究旨在探究EHD2在食管鳞癌细胞中的影响及其作用机制。免疫荧光和细胞组分分离结果显示,EHD2 不仅定位于细胞膜和细胞质,还存在于细胞核中。使用克隆形成实验、EdU细胞增殖实验和细胞流式术检测EHD2对食管鳞癌细胞增殖能力的影响。结果显示,过表达EHD2 和EHD2-3×NLS(核定位信号)抑制食管鳞癌细胞增殖和细胞周期G₁/S转换;同时,双荧光素报告基因结果显示,过表达EHD2 和EHD2-3×NLS抑制Wnt 信号通路活性。而siRNA敲降则获得相反的结果。免疫共沉淀和Duolink-PLA实验证明,EHD2与Wnt信号通路关键分子β-连环蛋白(β-catenin)和T细胞因子3(T-cell factor 3,TCF3)相互作用。蛋白质印迹和荧光定量PCR结果证实,过表达EHD2 和EHD2-3×NLS抑制TCF3下游与增殖和细胞周期相关的靶基因的转录,以及细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、细胞周期蛋白激酶4(CDK4)和pRb的蛋白质表达。以上结果表明,核EHD2与β-catenin和TCF3 复合体相互作用,通过Cyclin D1-CDK4-pRb信号轴来调控食管鳞癌细胞的增殖和细胞周期进程。     

TOFA对人食管鳞癌Eca109和KYSE-450细胞生长的影响*

目的: 探讨5-十四烷氧基-2-呋喃酸(TOFA)对人食管鳞癌(ESCC)细胞Eca109和KYSE-450细胞增殖、周期和凋亡的影响。方法: 将Eca-109细胞和KYSE-450细胞分为对照组(DMSO)和实验组(TOFA),细胞(4×10³ cells/100 μl)接种于96孔板中,每个浓度设置5个复孔,培养24 h后,给予DMSO(对照)和不同浓度(1、3、5、10 μg/ml)TOFA处理,继续培养24、48和72 h;MTT检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期和凋亡,Western blot检测p21、Cleaved caspase-3表达水平及p-AKT、p-mTOR、p-4EBP1修饰水平,专用试剂盒检测细胞内游离脂肪酸。结果: 与DMSO组比较,TOFA以浓度和时间依赖性方式抑制Eca109和KYSE-450细胞增殖(P均<0.05),处理48 h的IC₅₀分别为4.65和3.93 μg / ml;实验组细胞G2 / M 期细胞百分比增加,细胞凋亡率增高,p21、Cleaved caspase-3蛋白表达水平上调(P均<0.05),p-AKT、p-mTOR、p-4EBP1修饰水平下调(P均<0.05)。结论: TOFA抑制人食管鳞癌细胞增殖、阻滞细胞周期并促进细胞凋亡,其机制可能与其抑制AKT/mTOR/4EBP1信号通路有关。