灵芝转化苦参水提物的3个新生成分体外抗乙型肝炎病毒作用

先在基础培养基中添加苦参水煎汁,然后培养灵芝,得到灵芝培养液,再按乙醇氯仿-5%碳酸氢钠溶液-氯仿的顺序提取培养液中的有机酸成分,用制备高效液相色谱分离,得到6个新组分,用这些组分分别作用于转染了乙型肝炎病毒DNA的2.2.15细胞,用固相放射免疫法测定细胞培养上清液中的乙肝病毒表面抗原(HBsAg)和e抗原(HBeAg)的含量,用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定细胞的存活率。结果表明,其中的3个组分对2.2.15细胞分泌HBsAg和HBeAg有抑制作用,提示可能具有抗乙肝病毒的作用。     

灵芝多糖抗肿瘤作用的初步探讨

目的 :初步探讨灵芝多糖对小鼠肿瘤的抑制作用。方法 :观察灵芝多糖对 S180 、U14腹水型荷瘤小鼠生存期的影响 ,了解灵芝多糖对 S180 、U14、H2 2 肿瘤细胞有无直接杀伤作用 ,以寻找治疗肿瘤的新方法。结果 :灵芝多糖能够显著延长荷瘤小鼠的生存期 (P<0 .0 5) ,治疗组小鼠的生存期比对照组小鼠的生存期明显延长 ,但是灵芝多糖对肿瘤细胞无直接杀伤作用 (P<0 .0 5)。结论 :灵芝多糖抗肿瘤作用是通过机体的免疫系统介导的。     

低能离子注入诱变选育漆酶高产菌株

利用低能N+束注入技术对漆酶产牛菌灵芝菌(Ganoderma lucidum)U60菌丝体进行辐照诱变.通过研究15 keV能量下不同注入剂量与灵芝菌存活率及突变率的生物学效应关系,确定了在2.6×1015-3.9×1015ions/cm2注入剂茸范围内可获得高比例正突变株.选择3.12×1015ions/cm2的注入剂量参数后,经多轮注入诱变,获得了遗传性稳定的漆酶高产突变株UIM-281;发酵产酶实验表明,UIM-281的产漆酶活力峰值分别是出发菌株U60的1.7倍及2.28倍,且产酶发酵周期相对缩短24 h,是工业发酵中更加经济高效的灵芝漆酶发酵菌株.     

灵芝免疫调节蛋白(Lz-8)在毕赤酵母中的表达及其免疫活性鉴定

真菌免疫调节蛋白家族(Fungi immunoregulatory proteins,FIPs)各成员所具有的免疫调节和抗肿瘤活性已被广泛研究。本研究利用毕赤酵母表达系统对其成员Lz-8进行了重组表达。以毕赤酵母突变株GS115为表达宿主细胞,PCR和DNA测序结果均显示Lz-8的cDNA已被成功地整合入酵母基因组。聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、激光解析飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)和免疫学实验均被用于重组表达蛋白的检测。实验结果表明Lz-8在毕赤酵母表达系统中得到成功表达,在SDS-PAGE中可观察到分子量为14000D的单一条带,MALDI-TOF-MS的实验结果显示rLz-8的分子量为12722D。在相关的免疫学实验中,rLz-8可引起绵羊血红细胞凝集,但对人血4种血型的红细胞并没有凝集作用,rlz-8还可诱导巨噬细胞吞噬作用,均与其他报道中的实验结果吻合。以上结果表明,本实验已成功地利用毕赤酵母表达系统对Lz-8进行重组表达。     

药用昆虫蜣螂对灵芝发酵和抗小鼠肝癌活性的影响

采用液体深层发酵方式,研究了药用昆虫蜣螂对灵芝细胞生长、关键活性产物发酵动力学和抗小鼠肝癌活性的影响。结果表明,药用昆虫蜣螂在各添加浓度下对灵芝的细胞生长均无显著促进作用;但在添加量为5g/L时,对灵芝多糖和灵芝三萜的发酵动力学有显著影响(P<0.05),在发酵第7天时,灵芝总多糖和总三萜的产量分别达到2.81g/L和539.0mg/L(对照组分别为2.25g/L和428.2mg/L)。小鼠体内抗肝癌结果表明,灵芝对照发酵物的抑癌率为41.61%,灵芝-蜣螂配合物的抑癌率为42.24%;而补加蜣螂发酵后的灵芝加蜣发酵物的抑癌率高达57.21%,与灵芝对照发酵物的抑癌率相比,提高了37.49%。研究表明,采用昆虫蜣螂补料-分批发酵后,灵芝发酵物抗小鼠肝癌的活性得到显著增强。     

药用昆虫蜣螂对灵芝多糖生物合成的影响

采用液体深层发酵方式,研究了几种药用昆虫对灵芝多糖生物合成的影响。结果表明,药用昆虫蜣螂在添加量为5g/L时能显著促进灵芝胞内多糖(IPS)和胞外多糖(EPS)的形成(P<0.05)。胞内多糖和胞外多糖的产量分别由对照的(1.93±0.09)g/L和(520.3±20.2)mg/L提高到(2.41±0.12)g/L和(608.9±20.2)mg/L。灵芝胞内多糖和胞外多糖在DEAE纤维素柱上都可分离得到5种主要组分,其中IPS-1和EPS-1分别为2类多糖的主要组分。进一步用凝胶柱分离显示,IPS-1由3个单个的组分组成,EPS-1由2个单个的组分组成。添加蜣螂发酵后,灵芝胞内多糖和胞外多糖中没有出现新的组分,且各组分的相对含量也没有显著变化(P>0.05),提示添加蜣螂发酵后,灵芝胞内多糖和胞外多糖主要组分的合成途径并未改变。     

黑灵芝提取物清除DPPH自由基的作用

以黑灵芝为研究对象,采用不同方法提取黑灵芝中的有效成分,以BHT和抗坏血酸为对照品,采用DPPH.法研究各种提取物对自由基的清除作用。结果表明:微波萃取法是最适合提取黑灵芝中有效成分的现代方法,不仅产率高,而且速度快,节能;不同溶剂提取物对DPPH自由基清除率强弱依次为95%乙醇>丙酮>水>氯仿,提取物用量与清除能力成量效关系;黑灵芝的丙酮提取物浓度达到1 mg/mL时已超过10 mg/mL BHT的抗氧化效果,相当于0.5 mg/mL浓度抗坏血酸的抗氧化效果。     

超高压对灵芝生长及其漆酶合成的影响

研究了超高压处理对灵芝生长及其漆酶合成的影响,试验结果表明:灵芝致死率随处理压力的增大而增加,在150MPa下处理30min获得了一株生物量和漆酶产量都大幅增加的菌株G1502,其最大生物量及酶活分别比出发菌株提高了19.34%和282.67%,发酵时间也缩短了1d。     

中药非药用部位栽培灵芝的活性成分及药效变化

【目的】以丹参(Salvia miltiorrhiza Bge.)、菊花(Chrysanthemum morifolium Ramat.)、桔梗(Ptatycodongrandiflorum A.DC.)3种中药材的非药用部位作为灵芝袋料栽培的原料,研究灵芝子实体活性成分及药效变化。【方法】试验比较测定了非药用部位配方组与常规组(常规组作为实验对照组,配方由玉米芯、棉籽壳等常规基质组成)的灵芝农艺性状,子实体多糖和三萜含量,并对各组灵芝进行了小鼠急性毒性试验及药效试验。【结果】结果表明,非药用部位栽培灵芝生物转化率接近或者高于常规组,生长周期有所延长;活性成分上,除了丹参组(SM.G)的三萜含量有所降低外,其余各组的活性成分较常规配方组(OF.G)均有提高,菊花组(CM.G)灵芝的多糖和三萜含量最高,分别为2.47%和0.79%。最大耐受量试验表明,非药用部位栽培的灵芝子实体的小鼠最大耐受量均为100 g/kg。溶血素试验和促睡眠试验中菊花组效果优于常规组灵芝;抗疲劳上,只有常规组灵芝表现出一定的抗疲劳功效,而非药用部位栽培的灵芝没有该药效。【结论】中药材非药用部位栽培灵芝是可行的,且子实体活性成分含量和部分药效发生了改变。     

灵芝多糖对单核巨噬白血病细胞株的体外作用

目的:研究灵芝多糖对单核巨噬白血病细胞THP-1和RAW264.7的肿瘤生物学活性的影响。方法:用1、50和100μg/ml的灵芝多糖和脂多糖(LPS)刺激THP-1和RAW264.7细胞,CCK-8法测定巨噬细胞的增殖活力、流式细胞仪检测细胞的凋亡活性、Q-PCR检测细胞因子TNF-α、IL-1、IL-6和IL-12基因、相关凋亡信号通路基因TRADD、TNFSF10、TNFRSR10b、NFκBI、Caspase10和Caspase 3基因的mRNA表达水平。结果:灵芝多糖可以呈反浓度依赖性地刺激两种细胞的增殖,在50和100μg/ml浓度下可引起细胞凋亡,凋亡信号基因TNFRSR10b和NFκBI的mRNA水平在24h升高了53%和48%;在1~100μg/ml浓度下可上调细胞因子TNF-α、IL-1、IL-6和IL-12细胞因子mRNA的表达水平。结论:灵芝多糖对白血病细胞株具有双重作用,在低浓度下促进细胞增殖,而在高剂量时诱导细胞凋亡,均可上调免疫相关细胞因子的表达。