褪黑素UPLC-MS/MS检测方法优化及其对干旱和盐胁迫下葡萄幼苗褪黑素含量的分析

褪黑素是一种吲哚类激素,对植物的生理活动和抗逆性起到显著的调节作用。该研究建立了褪黑素超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)检测方法,并分别对干旱胁迫和盐胁迫条件下‘赤霞珠’葡萄幼苗根系和叶片中褪黑素含量的变化进行分析,以探讨葡萄中褪黑素的生理功能及其响应逆境胁迫的调控机制。结果显示:(1)褪黑素UPLC-MS/MS检测方法的优化条件为:采用超声波破碎法提取葡萄组织中的褪黑素;色谱条件为:色谱柱为Agilent Eclipse XDB-C18(1.8μm,3.0×50mm),流动相A为0.1%(v/v)的甲酸水溶液,流动相B为纯甲醇,梯度洗脱,柱温42℃,进样量1μL,流速0.2mL/min;质谱条件为:电喷雾正离子模式(ESI+)电离,多反应监测模式(MRM)检测,检测离子对为m/z 233→174。该方法测量结果的相对标准偏差(RSD)低于7%,最低检测限(LOD)和最低定量限(LOQ)分别为0.04ng/mL和0.12ng/mL。(2)干旱胁迫和盐胁迫下葡萄幼苗根系和叶片中褪黑素含量较对照组均显著增加,且胁迫程度越强增幅越大;用120mmol/L的NaCl溶液处理幼苗以后,幼苗根系和叶片中褪黑素含量分别达到627.25和3 220.42pg/g,大约都是相应对照组幼苗根系和叶片中褪黑素含量的7倍;10%PEG6000处理植株后其根系和叶片中褪黑素含量也远远高于对照组。研究表明,超高效液相色谱串联质谱法可作为一种准确、高效、简便易操作且具有较高的灵敏度和精确度的植物内源褪黑素含量检测方法;葡萄中褪黑素的合成是其对逆境胁迫的一种应激响应,暗示着褪黑素在缓解逆境胁迫方面具有重要作用。     

黑暗条件下褪黑素对栀子叶片类黄酮含量及相关基因表达水平的影响

以栀子叶片为材料,通过转录组测序与液相色谱技术来研究黑暗条件下褪黑素对栀子叶片类黄酮含量及相关基因表达水平的影响,结果显示褪黑素不仅延缓了栀子叶片的黄化,而且主要通过抑制类黄酮等生物合成途径上的相关基因表达,进而减少类黄酮积累来延缓叶片黄化,这对黑暗胁迫下延缓栀子叶片的黄化提供实际指导,也为利用褪黑素对叶片黄化的控制与延缓提供了借鉴与参考。     

外源褪黑素对苏打盐碱胁迫大豆幼苗的缓解效应

褪黑素是缓解逆境胁迫对大豆损伤的有效途径之一。研究苏打盐碱胁迫下喷施褪黑素对大豆幼苗生长的调控效应，为大豆幼苗缓解苏打盐碱胁迫提供理论基础和技术支撑。以合农71为试验材料，采用砂培试验方法，设置常规+喷施清水处理(CK)、常规+喷施褪黑素处理(CKM)、苏打盐碱胁迫+喷施清水处理(S)、苏打盐碱胁迫+喷施褪黑素处理(SM)4个处理，研究大豆苗期不同生理指标对苏打盐碱胁迫的响应。结果表明，与常规处理(CK和CKM)相比，苏打盐碱胁迫下(S和SM)大豆幼苗生长均受到抑制；与S处理相比，SM处理大豆叶片PSII反应初始荧光(F₀)与最大荧光产量(F_m)显著增加，非光化学淬灭系数(NPQ)升高，作物光合机构过剩光能的耗散增强，PSII反应中心光保护能力提升，净光合速率(P_n)显著增加，叶片抗氧化酶活性(SOD、POD、APX)和清除ROS能力显著增强，根系和茎秆可溶性糖和可溶性蛋白含量显著增加，叶片和根系中MDA产生速率显著下降，根系干物质积累量、总表面积、总体积和根平均直径显著增加，维持了叶片细胞内激素水平，叶片IAA、CTK...     

褪黑素对模拟干旱胁迫下北美红栎幼树幼树光合性能及抗氧化酶系统的影响

为研究干旱胁迫下施加褪黑素对北美红栎幼树光合性能和抗氧化酶系统的影响,以当年生北美红栎幼树实生苗为试验材料,利用不同浓度的聚乙二醇(PEG-6000)溶液模拟干旱,研究干旱胁迫对北美红栎幼树光合性能及抗氧化酶活性的影响。结果表明:在PEG模拟的干旱胁迫下,北美红栎幼树的光合作用受到抑制并破坏了体内的氧化还原平衡,抗氧化物酶活性提高。在干旱胁迫开始前喷施100μM的褪黑素能够提高北美红栎幼树清除活性氧的能力,维持干旱胁迫条件下较高的净光合速率并能有效地缓解由于干旱胁迫对植物造成的损伤。试验结果为实践中栽培管理北美红栎幼树提供了参考。     

马齿苋中褪黑素的含量测定及其对小鼠睡眠的影响

目的：建立对马齿苋药材中褪黑素的高效液相色谱检测方法并研究其对小鼠睡眠的影响。方法：以乙醇为溶剂采用超声波法提取褪黑素,利用固相萃取小柱对褪黑素进行富集,安捷伦高效液相色谱仪对褪黑素进行分析检测。将小鼠分为空白、地西泮（1 mg/kg）、褪黑素提取物组（0.5 mg/kg以褪黑素计）,小鼠灌胃给药30 min后,腹腔注射戊巴比妥钠,记录各组小鼠睡眠潜伏期和睡眠时长。结果：褪黑素质量浓度范围在100 ~2 000 ng/mL范围内与峰面积的线性关系良好（R2=0.999 9）,线性回归方程为Y=0.080 5X+0.083 6,平均加样回收率为101.40%,RSD为1.18%。测得马齿苋中褪黑素含量为686.17 ng/g。地西泮组以及褪黑素提取物组小鼠的睡眠潜伏期显著缩短,睡眠时间显著增加。结论：该方法方便快捷,分离效果好,可用于马齿苋中褪黑素含量的测定;马齿苋中所提取的褪黑素可缩减小鼠睡眠潜伏期,提升睡眠时间,具有镇静催眠作用。     

补肾填精法对脑卒中失眠症模型大鼠血清褪黑素含量表达的影响

目的:探讨补肾填精法对脑卒中失眠症模型大鼠血清褪黑素(Melatonin,MT)含量表达的影响。方法:24只建模成功的脑卒中失眠症大鼠随机平分为3组-模型组、低剂量组、高剂量组。于造模第7 d起,三组分别给予生理盐水及补肾填精汤(低剂量组最终含生药浓度低剂量为0.7 g/mL、中剂量为1.4 g/mL)以1 mL/(100 g·d)灌胃,连续14 d,记录血清MT表达变化情况。结果:三组治疗第1 d、第7 d与第14 d的逃避潜伏期在组内与组间对比差异无统计学意义(P>0.05)。低剂量组、高剂量组治疗第7 d与第14 d的进入中央区次数多于模型组(P<0.05),也多于治疗第1 d(P<0.05),高剂量组也多于低剂量组(P<0.05)。低剂量组、高剂量组治疗第14 d的血清MT含量、去甲肾上腺素转运蛋白与褪黑素受体蛋白相对表达水平高于模型组(P<0.05),高剂量组高于低剂量组(P<0.05)。结论:补肾填精法在脑卒中失眠症模型大鼠中的应用能促进血清MT的释放,提高去甲肾上腺素转运蛋白与褪黑素受体蛋白的表达,从而促进缓解失眠症状。     

植物褪黑素生物合成研究进展

褪黑素是生物进化过程中一种保守的小分子物质,在动物体内主要参与昼夜节律调节。国内外学者致力于植物褪黑素的合成途径、生理功能及作用机制研究,发现其参与了植物生长发育(根系发育、果实发育)及细胞氧化还原平衡的调节等。在植物褪黑素合成途径研究方面,已发现褪黑素存在于多种植物中并克隆出其合成相关基因。在不同植物中,褪黑素合成相关蛋白的亚细胞定位存在较大差异,合成部位也因植物种类不同存在差异。本文综述了植物褪黑素的合成途径、亚细胞定位合成调控的研究现状,重点论述了亚细胞定位、酶动力学对合成上游的调控,并对其研究前景进行了展望。     

褪黑素对脂多糖诱导血管内皮细胞损伤的保护机制研究

目的：研究褪黑素（melatonin,MLT）对人脐静脉内皮细胞（HUVECs）损伤的保护作用及其机制探讨。方法：不同浓度的褪黑素作用于体外培养的内皮细胞脂质过氧化损伤模型,实验分为5组,即正常对照组（Ctrl）,脂多糖（LPS）氧化损伤组：在培养基中加入2mmol／L的LPS诱导损伤4h;LPS加MLT低剂量（200t~mol／L）组、中剂量（400ixmol／L）组、高剂量（600txmol／L）gai。采用MTT法观察MET对HUVECs活性的影响;用双波长荧光分光光度法测定HUVECs细胞内游离钙离子浓度;检测各组内皮细胞匀浆中丙二醛（MDA）含量及超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH·Px）活性;用ELISA法测定培养的细胞上清液中白细胞介素6（IL．6）表达的变化;并测定细胞凋亡率。结果：①LPS作用后血管内皮细胞损伤明显,细胞增殖减少,细胞培养上清液和细胞匀浆中MDA含量、细胞内钙离子浓度和IL．6均升高,SOD、GSH-Px活性下降,凋亡率可达38．9±1．1％,均与正常对照组有统计学差异（P〈0．01）;②加入MET可明显减轻LPS对抗氧化酶SOD、GSH—Px的影响,同时MDA含量、细胞内钙离子浓度和几一6均明显下降,并显著减少凋亡细胞数量,各指标差异有统计学意义（P〈0．01）。结论：褪黑素可保护和修复LPS引起的血管内皮细胞损伤,其作用途径可能与保护细胞的线粒体,提高了该细胞的抗氧化酶活性,降低细胞内钙离子浓度作用有关。     

褪黑素对人体睡眠和血压的影响

昼夜节律遵循体内的生物钟规律,调节着机体多种功能和代谢过程,如血压、睡眠周期和体温等,睡眠周期表现出明显的昼夜节律,血压的变化也遵循24小时昼夜模式.研究表明,昼夜节律异常是睡眠障碍和心血管疾病的危险诱因之一.昼夜节律的起搏点受褪黑素的调节,而褪黑素的合成和分泌也具有昼夜节律性.内源性褪黑素可以通过多种方式增强人类节律系统的功能,外源性褪黑素作为一种时相药,可以对人体昼夜节律紊乱产生调节作用.越来越多的研究发现,褪黑素与睡眠和血压的变化有紧密的联系,深入研究褪黑素在其中的作用有利于阐明该类疾病的发生机制.本文旨在就褪黑素对人体睡眠和血压的影响作一综述.     

褪黑素参与植物抗逆功能研究进展

褪黑素(N-乙酰基-5-甲氧基色胺)是一种生命必需的小分子吲哚胺类物质, 广泛存在于动植物体内, 对动植物的生长发育起至关重要的作用。随着植物褪黑素研究的逐渐深入, 褪黑素在植物体内的合成途径及作用也更加明确。研究表明, 褪黑素在提高植物抵抗非生物和生物胁迫能力等方面具有调控作用。该文对近年来有关植物褪黑素参与非生物和生物胁迫的研究进展进行总结, 旨在为阐明褪黑素影响植物抵御逆境胁迫的调控机理提供参考。