苏云金芽孢杆菌的cry2A芽孢期启动子和分子伴侣ORF1-ORF2对Cry11Aa蛋白表达的影响

[目的]分析苏云金芽孢杆菌的cry2A型芽孢期启动子对晶体蛋白Cry11Aa的协调作用和分子伴侣ORF1-ORF2对Cry11Aa表达的促进功能.[方法]3个包括cry11Aa编码区的重组质粒pHcy1、pHcy2和pHcy4被构建并电激转化到苏云金芽孢杆菌晶体缺陷株4Q7中,其中pHcy1质粒携带cry11Aa基因自身启动子和分子伴侣p19基因,pHcy2携带cry2A型芽孢期启动子和分子伴侣orf1-orf2基因,pHcy4质粒在pHcy1的上游插入了cry2A型芽孢期启动子和分子伴侣orf1-orf2基因.SDS-PAGE分析了Cry11Aa蛋白在各重组苏云金菌株中的表达情况,并通过生物测定确定了其对蚊虫的生物活性.[结果]SDS-PAGE结果表明,Cry11Aa蛋白在4Q7(pHcy1)和4QT(pHcy4)均获得了表达,在4Q7(pHcy2)中未检测到Cry11Aa蛋白,推测晶体蛋白Cry11A不能利用cry2A型启动子进行表达调控;Cry11Aa蛋白在等体积4Q7(pHcy4)培养液中的表达量是4Q7(pHcy1)菌株的1.25倍,暗示着分子伴侣ORF1-ORF2在某种程度上能提高Cry11Aa的蛋白表达量.4Q7(pHcy1)和4Q7(pHcy4)形成的Cry11Aa蛋白晶体的形状和大小相似,两者对致倦库蚊的生物活性没有明显差异,LC50s分别为59.33 ng/mL和66.21 ng/mL,.[结论]推测晶体蛋白Cry11A能否成功表达与其使用启动子的类型和两者的协调配合有关.分子伴侣ORF1-ORF2虽然在某种程度上能提高Cry11Aa的蛋白表达量,但对提高Cry11Aa蛋白的杀蚊毒力没有显著性帮助.     

乙型脑炎病毒NS2A-C60A位点突变对其生物学特性影响研究*

目的:旨在探索Ⅰ型日本乙型脑炎病毒传代致弱后基因组突变NS2A-C60A对乙脑病毒生物学特性的影响。方法:首先通过对传代致弱及原始乙脑毒株基因组序列进行测序比对、结构预测分析并利用Western blotting(WB)确定了目标研究位点NS2A-C60A;然后使用反向遗传定点突变技术构建拯救了包含NS2A-C60A单点突变的病毒株;最后利用噬斑形态观察、生长曲线、双萤光素酶分析,WB以及炎性因子检测和动物实验研究了该单点突变对于乙脑病毒生物学特性的影响。结果:首次研究发现Ⅰ型乙脑病毒传代致弱会导致NS1'蛋白表达的显著下降以及可能的相关位点NS2A-C60A,并成功拯救获得了NS2A-C60A单点突变毒株rJEV-C60A,研究发现NS2A-C60A突变对乙脑病毒的生长特性及噬斑形成没有显著影响,但是能够显著降低乙脑病毒NS1'蛋白的表达,并且该位点突变能够轻微阻碍乙脑病毒对细胞炎性因子表达的抑制,动物实验结果显示NS2A-C60A点突变病毒与原毒株具有相似的神经毒力,说明该位点突变不是影响乙脑病毒毒力致弱的关键位点。结论:新发现的NS2A-C60A位点突变能够显著减少乙脑病毒NS1'蛋白的表达,但是对其增殖、诱导炎症及神经毒力等生物学特性没有显著影响。     

脑肿瘤时致癫痫病变的免疫组织化学和电镜观察的研究

11例肿瘤致癫痫病患者在脑皮质电图和深部电极描记监测致癫痫灶下,行肿瘤和致痫灶的切除。用免疫组织化学方法检测肿瘤和致痫灶内的细胞浆内胶质原纤维酸性蛋白、神经细丝、纤维联结蛋白和内皮细胞及电镜观察。发现致痫灶分别在肿瘤灶(5例)和肿瘤的周边区(6例)内,每一致痫灶内见残留神经元或变性的轴索由瘤性或增生的星形细胞的胶质原纤维或增生血管周细胞的胶原原纤维围绕或包绕;致痫灶内神经元固缩或空泡变性,线粒体肿胀、粗面内浆网扩张,轴索变性及髓鞘板层分离。结合上述所见,讨论了星形细胞在癫痫发作中的机理。     

大丽轮枝菌毒素的脂肪组分对棉花致萎活性研究

用脂肪酶(37℃,6小时)水解不同致病力类型的5个大丽轮枝菌(Verticillium dahliaeKleb.)毒素中的脂肪组分。试验结果表明经过水解后的5个菌株的毒素都不影响对棉花的致萎活性,说明毒素中的脂肪组分在对棉花的致萎作用中不占重要地位。     

甘草黄酮体抗促癌,抗致突和抗氧化作用的研究

G9315是从胀果甘草[Glycyrrhizae inflata Bat(Ⅲ))中提取的含有6个黄酮体的复合物。2mg剂量明显抑制二甲基苯蒽(DMBA)合并巴豆油诱发的小鼠皮肤乳头瘤的生成,抑瘤作用主要在促癌阶段。1mg剂量显著抑制巴豆油诱发的小鼠耳部水肿。小鼠口服G_(9315)(0.5g/kg/d×7)明显对抗环磷酰胺诱发的骨髓微核细胞增加。20—40μg/ml显著抑制TPA促进的~(32)pi参入HeLa细胞的磷脂部分。20μg/ml显著抑制巴豆油诱发的Wistar大鼠中性粒细胞(PMN)和Balb/c新生小鼠皮肤表皮细胞的化学发光以及肝线粒体的脂质过氧化。G(9315)(10—20μg/ml)有效对抗CCl_4诱发的小鼠肝微粒体脂质过氧化。     

反义RNA抑制人黑色素瘤细胞表面粘附分子CD44的表达及抑瘤效应

将细胞表面粘附分子ＣＤ４４Ｓ的ｃＤＮＡ反向插入到真核细胞表达载体ｐＭＡＭｎｅｏ－ＣＡＴ和ＭＭＴＶ－ＬＴＲ启动子下游,构成ＣＤ４４Ｓ的反义ＲＮＡ载体．将其用电击法导入ＣＤ４４＋的人黑色素瘤细胞系ＨＭＭ２３９,转录出的反义ＲＮＡ能不同程度地抑制ＨＭＭ２３９表面ＣＤ４４的表达．ＣＤ４４的表达被抑制后,瘤细胞与透明质酸的结合力下降,细胞的体外生长速率不受影响．将其接种裸鼠皮下,发现其致瘤性明显降低     

三例氨基糖甙类抗生素致聋患者的线粒体DNA测序分析

应用PCR扩增产物直接对3名氨基糖甙类抗生素致聋患者的线粒体DNA进行序 列分析, 结果表明,他们的线粒体DNA均存在第1555位核苷酸A-G的突变。因此认为该突 变是人体对氨基糖甙类抗生素致聋遗传易感性的分子基础,与氨基糖甙类抗生素共同作用造成耳聋。 Abstract:The mitochondria DNAs(mtDNAs)of three patients with AAID were analysed using the method of direct sequencing of their PCR products.The results showed that all their mtDNAs had an A-G mutation at nucleotides 1555.It is considered that this mutation is the molecular basis causing human susceptibility to Aminoglycoside Antibiotics toxicity which in cooperation with Aminoglycoside Antibiotics results in deafness.     

磁珠分选HepG2细胞系中CD44~+及其生物学特性

背景:肝癌肿瘤干细胞被认为肝癌增值、侵袭、浸润的关键细胞。目的:研究人肝癌Hep G2细胞系CD44+细胞的分化、增值及小鼠模型致瘤性等生物学特性。方法:磁珠分选Hep G2细胞系中的CD44+和CD44-细胞亚群;微球形成实验检测两亚群细胞的干细胞特性及增殖能力;移植种瘤实验检测两亚群细胞致瘤性和恶性程度的差异。结果及结论:微球形成实验表明CD44+细胞具有干细胞特性;移植瘤致瘤性实验表明CD44+的致瘤率高,恶性程度高。提示HEPG2细胞系中存在具有增殖、多向分化与体内致瘤能力的CD44+细胞,CD44+细胞是符合肿瘤干细胞定义的细胞亚群。     

模拟酸雨致酸土壤对莴苣某些生理性状的影响（简报）

模拟酸雨淋洗致使土壤的pH值明显降低时,莴苣叶片皱缩,生长不正常,但叶绿素含量略有增加。莴苣叶片硝酸还原酶活性随土壤酸度增加而几乎呈直线下降,根系活力则在土壤pH降到5.0以下时,才出现突跃性的降低。     

幼虫期食物量对致倦库蚊实验种群动态的影响

在室温26±1℃和相对湿度80%的条件下,以食物充足和食物缺少两种处理饲养致倦库蚊Culex quinquefasciatus Say幼虫.实验表明,幼虫期食物量不仅对幼虫有影响,而且对成蚊期一系列种群参数均有明显影响.净增殖率R₀、内禀增长能力r_m和有限速率γ降低,种群增长受抑制不仅是由于幼虫期食物量减少使幼虫发育速率减慢、存活率下降所致,且与成蚊的年龄特征存活率及年龄特征产雌率有关.各年龄组雌蚊所产的卵的孵出率随年龄的增长而下降,故以卵孵出数计算产雌率m_x所得的种群参数值较为客观,而以卵孵出率与年龄关系的回归方程校正以卵数计算的m.,同样达到上述目的.本文还提供广州致倦库蚊实验种群生命表特征的资料.