吸附-交联法固定D-泛解酸内酯水解酶的研究

选择6种吸附树脂和离子交换树脂对D-泛解酸内酯水解酶进行固定化,筛选出了固定化效果较好的大孔弱碱性丙烯酸系阴离子交换树脂D-380为载体,用先吸附后交联的方法固定化。通过实验对固定化条件进行了优化,得出最佳的固定化条件为：加酶量6U／g树脂、吸附pH7．5、吸附时间4h、吸附温度30℃、交联剂戊二醛终浓度0．1％、交联时间2h。实验表明在此条件下制得的固定化酶有很好的稳定性：固定化酶在连续20次的底物水解反应后,剩余酶活达到71％。当温度达到80℃时游离酶几乎失去酶活,而固定化酶剩余酶活为60％以上。游离酶的pH稳定性范围为pH7～8,而固定化酶为pH6．5～8．5。     

里氏木霉306产t-PA固态发酵条件的研究

对基因工程菌株里氏木霉(Trichodermareesei)306生物合成组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)的固态发酵培养基成分和发酵条件进行了研究;分析了发酵过程中t-PA的生成、总糖的消耗和菌体生长的规律。在优化的固体发酵条件下,t-PA的最大酶活是924.63IU/g干重培养基,较初始条件下提高了5倍。通过浅盘进行了放大实验,最大酶活为983.64IU/g干重培养基,t-PA合成速率为:13.66IU/g干重培养基.h,较三角瓶固态发酵最高产酶提高了6.38%,产酶速率提高了24.07%。     

蚓激酶基因F238在大肠杆菌中的可溶性表达

应用PCR技术扩增获得蚓激酶成熟肽基因F238,并将其克隆至大肠杆菌质粒pET22b-TrxA中,构建双顺反子表达载体p17rx-F238.重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),1.0 mmol/LIPTG、30℃条件下诱导6 h,经SDS-PAGE证实蚓激酶成熟肽蛋白获得了高效表达,所表达的蛋白产物相对分子量与预期...     

原生质体激光诱变选育少根根霉脂肪酶高产菌株

对少根根霉BUCT-11原生质体制备、再生条件及激光诱变育种进行了研究.结果显示,少根根霉BUCT-11原生质体形成及再生最佳条件为:菌龄24 h,混合酶由27 mg/mL的蜗牛酶和53 mg/mL的纤维素酶组成,酶解时间1.5 h,酶解温度30 ℃,渗透压稳定剂为0.6 mol/L NH4Cl、0.02 mol/L ...     

表皮生长因子受体干扰序列与白细胞介素24融合蛋白的原核表达

目的：在大肠杆菌中表达表皮生长因子受体干扰序列（EGFRi）与白细胞介素24（IL-24）的融合蛋白。方法：人工合成肿瘤细胞表面受体特异性结合位点EGFRi核苷酸序列,应用重叠延伸PCR技术将其与IL-24基因连接,其间引入一段柔软短肽编码基因;将融合基因克隆入pET-22b原核表达载体,IPTG诱导融合蛋白在大肠杆菌BL21（DE3）中表达,对表达条件进行优化;用His·Bind纯化试剂盒对表达产物进行纯化,SDS-PAGE进行鉴定。结果：酶切和测序结果证实EGFRi-IL-24融合基因的原核表达载体构建正确;在IPTG浓度为0.8mol／L、28℃诱导10h的条件下,可溶性融合蛋白表达量最高;表达产物的相对分子质量与预期值一致,为22000;经纯化得到了均一的融合蛋白。结论：获得大肠杆菌表达的融合蛋白EGFRi-IL-2,可用于活性分析。     

低温和氧化应激产生活酵母细胞衍生物的研究

对低温和H2O2应激条件下产生活性酵母细胞衍生物（Live Yeast Cell Derivative,简称LYCD）进行了研究。结果表明：低温预处理能够增加细胞内谷胱甘肽（GSH）含量,提高超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）活性,降低MDA含量。低温预处理可以诱导对致死浓度H2O2的抗性。通过0—15℃低温和0．2mmol／L H2O2处理酵母细胞后,提取LYCD并添加到酵母细胞培养液中,发现细胞在致死浓度H2O2作用下的存活率明显提高,说明0—15℃低温和H2O2刺激酵母细胞形成的LYCD对细胞具有抗氧化作用。     

嗜酸乳杆菌LB10.16及枯草芽孢杆菌BS7.29安全性评价

目的：评价枯草芽孢杆菌BS7.29和嗜酸乳杆菌LB10.16的安全性,为其应用研究提供技术支持。方法：本文通过对小鼠灌服、急性攻毒、腹腔注射、小鼠最大耐受剂量、急性攻毒等试验方法进行枯草芽孢杆菌BS7.29和嗜酸乳杆菌LB10.16的安全性研究。结果：1×108cfu/kg.bw的LB10.16和5×108cfu/kg.bw的BS7.29能够明显提高肠道推动力,改善小鼠肠道蠕动性。结论：两个菌种急性攻毒试验结果表明属于无毒物质,安全性比较高。     

肺炎克雷伯氏菌荚膜多糖表达量评价指标的建立及发酵条件优化

建立了特异性强的肺炎克雷伯氏菌荚膜多糖全菌ELISA检测方法,检测结果与多糖表达量相关性好;以全菌ELISA值结合菌数为评价指标,对影响荚膜多糖表达的培养基组成及发酵条件进行了优化,优化后的摇瓶培养条件下发酵液活性和生物量分别比优化前提高72.7和33倍,并经7L罐放大实验,绘制发酵动力学曲线,为肺炎克雷伯氏菌荚膜多糖进一步开发打下基础。     

荔枝核化学成分的研究

利用硅胶柱色谱、聚酰胺柱色谱、制备薄层色谱等方法,从荔枝（Litchi chinensis Sonn．）核乙醇提取物中分离出9个化合物,根据理化性质和波谱分析鉴定了7个化合物,分别为胡萝卜苷（daucosterol,1）、原儿茶醛（protocatechuic aldehyde,2）、原儿茶酸（protoeatechuic acid,3）、表儿茶素（（-）-epicafichin,4）、procyanidin A2（5）、procyanidin A1（6）、芦丁（rulin,7）。化合物2,4-7为首次从荔枝核中分得,化合物2．4、5为首次从该属植物中分离得到。     

金属离子对枯草芽孢杆菌转酮酶缺失突变株合成D-核糖的影响

研究了金属离子Mn2 +、Fe2 +、Zn2 +对枯草芽孢杆菌 (Bacillussubtilis)转酮酶 (EC 2 .2 .1 .1 )缺失突变株FBL0 4 531D 核糖合成的影响。发现Mn2 +对该突变株合成D 核糖和形成芽孢具有非常显著的影响。