HF-LPME-UHPLC-MS同时分析金银花中三种黄酮成分的含量

本文建立了金银花中芦丁、金丝桃苷和槲皮素的HF-LPME-UHPLC-MS检测方法.应用中空纤维液相微萃取技术作为前处理方法:聚丙烯中空纤维为支架,乙酸乙酯为有机溶剂,pH 3.0的KH2PO4溶液为给出相,pH 8.5的NaHCO3溶液为接收相,搅拌速度为1000 rpm,萃取时间为50 min.用UHPLC-MS作为检测手段,检测结果为:芦丁、金丝桃苷和槲皮素的线性范围分别为0.0227～1.195、0.0141 ～ 1.32、0.00832～1.649 μg/mL,平均回收率为别为95.34％、95.17％、99.83％,富集倍数为别为38、42、83,检测限分别为0.029、0.017、0.006μg/L.方法学验证结果表明该法灵敏、准确、提高了检测限和富集倍数,可用于检测金银花中的黄酮物质.     

芦丁与人血清白蛋白相互作用的紫外可见光谱特性研究

本文通过测定芦丁与HSA相互作用前后的紫外可见吸收光谱、圆二色性及人血清白蛋白(HSA)的荧光特性,研究了芦丁与HSA结合作用。结果表明,芦丁在紫外区有三个特征的吸收峰(264.0、285.5及354.5nm)、在330～300 nm及300～230 nm处显示圆二色性,HSA引起芦丁紫外可见吸收光谱波峰红移;芦丁与HSA相互作用后,不引起HSA二级结构的改变,但对其三级结构有影响,同时对HSA荧光激发及发生光谱最大峰位及幅度有影响。     

酶法合成槲皮素3-O-糖苷酰基化衍生物的研究进展

槲皮素3-O-糖苷是一类重要的槲皮素糖苷类化合物,具有抗氧化、抗炎、抗癌和抗病毒等多种药理活性,其代表性化合物芦丁和曲克芦丁已被开发成临床用药。由此可见,槲皮素3-O-糖苷已经成为创新药物的重要来源之一。然而,较低的生物利用度限制了槲皮素3-O-糖苷在食品、制药等行业中更广泛地应用。为提高这些化合物的生物利用度,选择性酰基化修饰是有效的途径之一,而生物酶法则是获得槲皮素3-O-糖苷酯类衍生物的重要方法。文中介绍了酰基化槲皮素3-O-糖苷的酶促合成方法,重点综述了4种能执行体外酶促酰化的工具酶(酰基转移酶、脂肪酶、蛋白酶、酯酶)和全细胞生物催化剂在槲皮素3-O-糖苷酯的酶促合成中的研究进展,详细阐述了酰基化修饰对槲皮素3-O-糖苷生物活性的影响。此外,还针对槲皮素3-O-糖苷酯的高效合成方法和修饰位点多样化进行了讨论,以期为槲皮素3-O-糖苷类药物的结构修饰、开发提供新思路。     

芦丁通过激活NRF2/HO-1通路抑制Ang II诱导的血管平滑肌细胞表型转化和炎症反应

摘要 目的：探讨芦丁（Rutin）对血管紧张素II（Angiotensin II，Ang II）诱导的小鼠主动脉血管平滑肌细胞表型转化和炎症反应的影响及机制。方法：采用Ang II处理小鼠主动脉平滑肌细胞构建表型转化和炎症反应模型。将对数生长期的小鼠主动脉血管平滑肌细胞分为以下4组：正常对照组（Control组），Rutin组（100 μM），Ang II组（1μM），Rutin+ Ang II组（100 μM，1 μM）。采用细胞增殖实验（Cell Counting Kit-8，CCK8）检测芦丁对小鼠主动脉平滑肌细胞活力的影响，采用蛋白免疫印迹实验检测α平滑肌肌动蛋白（α-Smooth muscle actin，α-SMA）、平滑肌蛋白22α（Smooth muscle protein 22-alpha，SM22α）、骨桥蛋白（Osteopontin，OPN）、基质金属蛋白酶2（Matrix metalloproteinase 2，MMP2）、基质金属蛋白酶9（Matrix metalloproteinase 9，MMP9）、白细胞介素6（Interleukin 6，IL6）、肿瘤坏死因子-α（Tumor necrosis factor-alpha，TNF-α）、核因子E2相关因子2（nuclear factor erythroid 2-related factor 2，Nrf2）、血红素氧合酶-1（Heme oxygenase-1，HO-1）、核因子活化B细胞κ轻链增强子（nuclear factor kappa-light-chain-enhancer of activated B cells，NF-κB）的蛋白表达和磷酸化水平，采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（Enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）检测细胞上清中TNF-α和IL6细胞因子水平，采用荧光显微镜和流式细胞术检测小鼠主动脉血管平滑肌细胞活性氧水平。结果：与对照组相比，Ang II组收缩型标志物α-SMA和SM22α表达水平降低、合成型标志物OPN表达水平升高，炎症相关因子MMP2、MMP9、IL6和TNF-α表达水平升高，NRF2和HO-1表达水平降低，NRF2及NF-κB的磷酸化增加。此外，相较于Ang II组，Rutin+ Ang II组收缩型标志物α-SMA和SM22α表达水平升高、合成型标志物OPN表达水平降低，炎症相关因子MMP2、MMP9、IL6和TNF-α表达水平降低，NRF2和HO-1表达水平升高，NRF2及NF-κB的磷酸化水平降低。结论：芦丁可以抑制Ang II诱导的小鼠主动脉血管平滑肌细胞表型转化和炎症反应，可能与其激活NRF2/HO-1通路和抑制活性氧的产生有关。     

槐米芦丁提取技术研究

芦丁作为槐米中黄酮类活性成分的主要代表近年来已得到了人们的高度重视,在简述芦丁的来源、用途、性质的基础上,重点对从槐米原料中提取纯化芦丁的不同方法与技术进行了述评,提出了芦丁提取应注意的问题,为工业化生产和实验室提取芦丁提供了科学的思路.     

曲可芦丁联合胞磷胆碱对脑梗死患者认知功能的改善作用及机制

为了探讨曲克芦丁联合胞磷胆碱对脑梗死的治疗效果及机制,本研究将100例急性脑梗死患者分为对照组和观察组(n=50),对照组患者采用常规治疗,观察组在对照组治疗基础上加用曲克芦丁和胞磷胆碱。采用简易精神状态检查表(MMSE)对脑梗死患者的认知功能进行评价。将60只SD大鼠随机分为3组(n=20):假手术组、模型组和曲克芦丁+胞磷胆碱组。通过Morris水迷宫实验评价大鼠的认知功能。TTC染色评价大鼠脑梗死体积。Nissl染色评价大鼠海马区的组织形态。TUNEL染色评价大鼠海马细胞凋亡。Western blotting检查海马组织中TGF-β2、VEGF-A和CD34的蛋白表达。研究显示,治疗后观察组的MMSE总评分显著高于对照组(p0.05)。与模型组比较,曲克芦丁+胞磷胆碱组大鼠的逃避潜伏期显著降低,而穿越平台次数显著升高(p0.05)。与模型组相比,曲克芦丁+胞磷胆碱组大鼠的梗塞体积明显减少(p0.05)。与模型组相比,曲克芦丁+胞磷胆碱组的海马CA1区细胞凋亡率显著降低(p0.05)。与模型组相比,曲克芦丁+胞磷胆碱组的TGF-β2、VEGF-A和CD34的表达水平显著上调(p0.05)。本研究表明,曲克芦丁联合胞磷胆碱可有效改善脑梗死患者和动物模型的认知功能。2种药物组合的脑保护作用可能与减弱脑组织损伤、抑制神经元凋亡、促进血管生成有关。     

蕨菜黄酮分离鉴定

采用75%的乙醇提取经乙醚脱脂的蕨菜粉末,提取液回收乙醇后以石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇依次萃取粗分段,硅胶柱层析、乙酸乙酯-甲醇系统对乙酸乙酯部位梯度洗脱,对其乙酸乙酯洗脱部分反复凝胶柱层析获得2个黄酮单体,分别鉴定为紫云英苷(1)、芦丁(2),其中化合物1为首次从蕨菜中分离得到。     

离子液体优化高速逆流色谱法分离槐花中的黄酮类化合物

应用高速逆流色谱法首次从槐花中一步分离出2种黄酮类化合物,并利用离子液体提高分离效果。以正己烷-乙酸乙酯-乙醇-水-冰醋酸(1∶1∶1∶1∶0.05,v/v)为两相溶剂体系,从50 mg槐花粗提物中一步分离得到芦丁18.2 mg,槲皮素9.6 mg,其纯度均在97%以上。加入离子液体1-丁基-3-甲基咪唑六氟化硼酸([BMIM][PF6]),使出峰时间由原来的85 min提前到55 min,分离度由0.9提高到1.8,达到完全分离,分离效果得到明显提高,为离子液体在高速逆流色谱中的进一步应用提供依据。     

黑曲霉As3.4309发酵转化芦丁的研究

目的:利用黑曲霉As3.4309发酵产酶,对芦丁的二元糖苷链进行水解,以得到苷元槲皮素.方法:研究黑曲霉As3.4309的最佳产酶条件,对芦丁进行生物转化;用凝胶层析进行转化产物的分离纯化,核磁共振法鉴定其结构.结果:黑曲霉As3.4309发酵转化芦丁的最佳条件:pH为7.0,碳源为3%稻草粉、2%麸皮,氮源为0.5%硫酸铵、0.5%蛋白胨,KH2PO4 3.0mg/mL,MsSO4·7H2O 0.5mg/mL,FeSO4·7H2O 7.5mgL,MnSO4·H2O 2.5mg/L、ZnSO4 2.0mg/L、CoCl2 3.0mg/L,温度30℃,转速180r/min,接种量10%.主要转化产物经过鉴定为槲皮素.结论:该方法简单方便,有效地实现了芦丁的转化,转化产物槲皮素的转化率达到54.36%.     

乙醇浸提法提取大枣芦丁及其抗氧化性的研究

以大枣为原料,采用乙醇浸提法提取芦丁,以芦丁得率为评价指标,通过正交试验优化影响大枣芦丁得率的若干因素:液料比、乙醇浓度、浸提时间、浸提温度,确定其最佳工艺条件为液料比20∶1(mL∶g)、乙醇浓度60%、浸提时间3.0 h、浸提温度70℃,此条件下大枣芦丁得率为2.16%;大枣芦丁粗提物中芦丁含量为8.57%。对芦丁进行体外抗氧化能力测定结果表明,大枣芦丁具有一定的清除DPPH自由基的能力,5μg/mL的大枣芦丁对DPPH自由基的清除率可达到58.80%,25μg/mL的芦丁对OH自由基的清除率达49.80%,本研究对芦丁资源的进一步开发利用提供参考。