共表达O型口蹄疫病毒P1-2A基因和猪白细胞介素18的重组鸡痘病毒的构建

目的:为获得能有效预防O型口蹄疫病毒的重组鸡痘病毒活载体疫苗奠定基础。方法：在O型口蹄疫病毒P1-2A基因上游引入Kozak序列,下游通过Linker与细胞因子IL-18联结,获得P1-2A基因与猪IL-18基因融合表达基因盒P1-2A-IL-18,将该表达基因盒克隆至鸡痘病毒中间转移载体pUTAL-3C中,构建重组鸡痘病毒转移载体质粒pUTAL-3C- P1-2A-IL-18。通过脂质体转染法,将pUTAL-3C- P1-2A-IL-18与鸡痘病毒282E4株共转染鸡胚成纤维细胞（CEF）,通过BrdU三次加压筛选,挑选出单克隆重组病毒株。结果：经RT-PCR和间接免疫荧光法鉴定,证明所筛选的1株重组鸡痘病毒在CEF中能正确表达P1-2A-IL-18基因盒。结论：成功获得了一株共表达O型口蹄疫病毒P1-2A基因和猪白细胞介素18基因的重组鸡痘毒疫苗候选株rFPV-3C-P1-2A-IL-18。     

金顶侧耳胞内多糖生物活性研究

对金顶侧耳Pleurotus citrinopileatus胞内多糖的热水浸提工艺进行研究,并研究了该多糖的抑菌活性以及对超氧阴离子自由基和亚硝基的清除作用。结果表明,金顶侧耳胞内多糖的最佳提取工艺为:提取温度60℃,液料比100:1,时间4h,此条件下多糖提取率可达17.65%。该多糖对埃希氏大肠杆菌和金黄色葡萄球菌均有抑制作用且对超氧阴离子自由基和亚硝基有较强的清除作用,说明该多糖具有明显的生物活性。     

2009 甲型流行性感冒病毒感染者常规免疫学检测的临床意义

本文旨在探讨2009 甲型流行性感冒( 流感) 病毒(H1N1) 感染者的常规免疫学指标与健康人的差异。 采用流式细胞术检测32 名甲型H1N1 感染者外周血不同T 细胞亚群, 同时进行血清特定蛋白检测及血细胞 计数。结果显示, 与健康者相比, 甲型H1N1 感染者外周血CD3⁺ 、CD3⁺ CD4⁺ 、CD3⁺ CD8⁺ T 细胞( cells/μl) 显著降低, 血清补体成分C3、C4( g/L) 及C反应蛋白均值( mg/L) 显著升高, 血小板、白细胞、淋巴细胞与嗜酸性细胞显著降低, 单核细胞显著升高。结果提示, 甲型H1N1 感染者的常规免疫学指标出现异常发展趋势。     

人工髋关节置换和内固定治疗复杂股骨转子间骨折的疗效及对预后的影响

目的:对比人工髋关节置换和内固定治疗复杂股骨转子间骨折的疗效及对预后的影响。方法:选择2008年1月~2012年5月我院骨科收治的复杂股骨转子间骨折患者85例,按知情同意原则分成人工髋关节置换组(A组,46例)及内固定组(B组,39例)2组,记录患者的一般临床资料及治疗情况,比较两组患者疗效指标及预后指标。结果:A组患者卧床时间低于B组患者,差别有统计学意义(P0.05);术后1、3、6个月的Harris评分情况A组均优于B组患者,差异有统计学意义(P0.05)。结论:人工髋关节置换治疗复杂股骨转子间骨折能有效缩短患者卧床时间,迅速恢复关节功能,远期疗效效果好。     

人颈椎间盘髓核细胞的体外培养和鉴定

目的:建立人颈椎间盘髓核细胞体外培养体系,并对其细胞表型进行鉴定。方法:采用酶消化法分离人颈椎间盘髓核细胞,进行单层培养,倒置相差显微镜观察细胞生长和形态,流式细胞仪测定细胞周期和凋亡率,并行甲苯胺蓝、Ⅱ型胶原及CK8免疫组化染色对其细胞表型进行鉴定。结果:原代髓核细胞凋亡率6.1±1.4%,S期细胞比例7.3±0.5%。贴壁后形态为多角形或短楔形,传代后生长加速。细胞呈甲苯胺蓝异染性;Ⅱ型胶原免疫组化染色阳性;只有少量椭圆形大细胞CK8免疫组化染色阳性。结论:成功建立人颈椎间盘髓核细胞体外培养模型,并证实成年后髓核内仍有少量细胞保持脊索细胞表型。     

卡尼鄂拉蜂锌转运蛋白-7相似蛋白（ZnT-7-like）的基因克隆、 抗体制备及差异表达

【目的】本研究旨在克隆卡尼鄂拉蜂Apis mellifera carnica锌转运蛋白 7相似蛋白（zinc transporter 7-like, ZnT-7-like）基因, 制备ZnT-7-like多克隆抗体, 了解该基因在卡尼鄂拉蜂王浆腺中不同时期的差异表达情况。【方法】运用RT PCR法从卡尼鄂拉蜂王浆腺总RNA中扩增ZnT-7-like基因, 进行生物信息学分析, 为避开跨膜结构的干扰, 选择克隆其部分序列（273 bp）作为多肽免疫序列。将其亚克隆入原核表达载体pGEX-4T-1, 转入大肠杆菌Escherichia coli BL21 （DE3）中诱导表达获得融合蛋白, 然后将融合蛋白纯化后免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体, 分别用间接ELISA和Western blot检测抗体的效价和特异性, 最后采用实时荧光定量RT-PCR以及Western blot技术检测该基因在不同日龄成虫王浆腺中的相对表达量。【结果】克隆得到卡尼鄂拉蜂ZnT-7-like基因, 大小为1 065 bp。SDS-PAGE电泳结果显示融合蛋白成功表达; 制备的多克隆抗体效价高达1∶64 000, 且具有很高的特异性。ZnT-7-like在卡尼鄂拉蜂5个日龄成虫中的转录情况存在较大差异, 表现为3日龄成虫中的表达量极显著高于其他日龄（P<0.01）, 12日龄表达量最低, 其他日龄间表达量两两差异显著(P<0.05)或极显著（P<0.01）; ZnT-7-like蛋白表达与转录水平基本一致。【结论】成功克隆了卡尼鄂拉蜂ZnT-7-like基因, 制备了兔抗蜂ZnT-7-like多克隆抗体, 并在转录和翻译两个水平上测定了ZnT-7-like在卡尼鄂拉蜂王浆腺中不同时期的相对表达量。这些结果为深入研究卡尼鄂拉蜂ZnT-7-like基因的功能奠定了基础。     

猪脑心肌炎病毒非结构蛋白3AB的原核表达及其单克隆抗体的研制

摘要　目的　利用原核表达系统表达猪脑心肌炎病毒 (EMCV) 非结构蛋白3AB,并通过杂交瘤细胞技术制备其单克隆抗体,为相关研究工作奠定基础。方法　利用大肠杆菌系统表达具有良好抗原性的重组3AB蛋白,经包涵体纯化后免疫BALB/ c 小鼠, 取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合, 间接ELISA筛选阳性的杂交瘤细胞, 并结合免疫荧光(IFA)和Weatern Blot对抗体的特异性进行鉴定。 结果　经间接ELISA 筛选阳性的杂交瘤细胞, 获得1株能稳定分泌抗3AB蛋白抗体的杂交瘤细胞株,将其命名为2D12,其亚类测定为IgG1 /κ。Western Blot和间接免疫荧光试验证明该单抗能特异性识别3AB蛋白。结论　成功获得了针对EMCV-3AB 的特异性单抗,为进一步研究猪脑心肌炎病毒非结构蛋白3AB的结构与功能及临床诊断试剂的研发奠定必要的物质基础。     

酵母蛋白质YJL084c的磷酸化分析

PCL6、PCL7(PAP1)和PHO80为酵母蛋白激酶PHO85的细胞周期蛋白因子 ,同属于PHO80亚类 ,它们在蛋白质序列上有较高的同源性 ,彼此在功能上有一定程度的重叠。YLR190w为先前鉴定的PCL7 PHO85的一个底物 ,根据BLAST比较 ,YJL0 84c与YJLR190w在一段区域内有一定的同源性 ,并且根据已公布公共数据库 ,YJL0 84c是PCL6的一个结合蛋白。利用双杂交系统分析了YJL0 84c与这三个细胞周期蛋白因子之间的相互作用 ,表明PCL7也可以结合YJL0 84c。利用免疫共沉淀证实它们在体内的相互作用 ;通过体外GST沉降分析 ,验证它们的体外相互作用。YJL0 84c的体外翻译产物可以被PCL7 PHO85复合物磷酸化 ,进一步分别表达纯化YJL0 84c的氨基末端、中间和羧端三部分的GST融合蛋白片段 ,PCL7 PHO85复合物可以磷酸化其中间部分 ,而对N末端和C末端则未表现出磷酸化。以该中间片段蛋白质为底物 ,进一步研究高低磷条件对其磷酸化的影响。PCL7 PHO85对YJL0 84c的磷酸化受到无机磷条件的明显影响 :高磷条件下 ,磷酸化程度高 ;而低磷条件下磷酸化程度低。有意思的是 ,PCL6 PHO85免疫沉淀复合物也表现出同样的磷酸激酶特征。于是分析PHO81与这三个细胞周期因子之间相互作用。此外 ,还构建了Yjl0 84c的缺失株 ,分析了缺失的可能影响。     

酵母PAP1与PHO85激酶复合物对YLR190w的磷酸化

酵母基因Pho85编码一个依赖于细胞周期蛋白 (cyclin)的蛋白激酶 (CDK) ,参与多种调控途径。PHO85功能的多效性归于其相关的细胞周期因子 ,现已经鉴定了 10个与PHO85相关的细胞周期因子 (PCL)。为了筛选PAP1 PHO85激酶复合物的特异底物 ,以PAP1为靶分子 ,利用酵母双杂交 (two hybrid)系统从酵母cDNA文库中克隆到一个与PAP1相互作用的蛋白质因子的基因 ,Ylr190w。Ylr190w编码 491个氨基酸的多肽链。体外翻译的YLR190w与纯化的融合蛋白GST PAP1可以被谷胱甘肽亲和柱共同吸附 ,这表明PAP1与YLR190w在体外也可以结合。用免疫沉淀获得的PAP1 PHO85复合物可以磷酸化在大肠杆菌中表达GST YLR190w ;并受到无机磷浓度影响 :高磷条件时磷酸化程度高 ,低磷条件时磷酸化程度低。它能与酵母细胞内YAF9结合 ,YAF9是人具有转录调控活性蛋白质因子AF9的酵母同源物。YLR190w与YAF9的相互作用受到磷条件影响 ,突变YLR190w蛋白S/TP位点的S和T后 ,它们的相互作用明显减弱 ,且不再受到磷条件影响     

广西部分地区稻田皮炎的调查研究

广西各地稻田皮为存在已久。１９８４－１９９０年，经调查及实验研究，证实流行于上林、横县、宁明、龙州、天等、田阳、都安等县的稻田皮炎，其病原为包氏毛毕吸虫尾蚴，本虫的自然终宿主为家鸭，中间宿主是椭圆卜螺和小土蜗。皮炎的发生常与养鸭习惯、季节性、稻田种类及施肥等因素有关。每年的４－９月份为广西稻田皮炎发病季节，其中４－５月份为广西稻皮炎发病季节，其中４－５月份为发病高峰。