EB病毒潜伏膜蛋白1通过Survivin介导细胞增殖和抑制细胞凋亡

利用间接免疫荧光、基因转染、抗体剔除 (Ab knock out)、细胞平板集落形成、流式细胞术以及半胱氨酸天冬酰胺酶 (caspase3)活性检测等方法 ,从survivin核移位、Rb磷酸化、细胞周期演进、细胞克隆形成和细胞凋亡等方面 ,探讨EB病毒潜伏膜蛋白 1(LMP1)调控细胞增殖和细胞凋亡双重效应的分子机制 .结果发现 ,LMP1表达介导survivin核移位 ,促进细胞Rb磷酸化增加 ,S期细胞数显著增加 ;LMP1通过survivin促进细胞克隆形成 .用Ab knock out阻断survivin核移位和survivin反义核酸抑制survivin表达时 ,Rb磷酸化水平降低 ,S期细胞减少 ,抑制LMP1介导的细胞增殖 ,活化细胞caspase 3,诱导细胞凋亡 .结果提示 ,EB病毒LMP1通过survivin促进细胞增殖和抑制细胞凋亡     

GCG干预LMP1激活的NF-κB信号转导通路中的靶分子

为阐明在鼻咽癌 (nasopharyngealcarcinoma,NPC)细胞中茶多酚干预EB病毒潜伏膜蛋白 1(latentmembraneprotein 1,LMP1)激活的NF κB信号转导通路中的靶分子 ,采用EBV阴性及阳性的鼻咽癌细胞系CNE1和CNE1 LMP1细胞 ,利用噻唑蓝 (MTT)法 ,观察表没食子儿茶素没食子酸酯 (EGCG)对CNE1和CNE1 LMP1细胞生存率的影响 .采用瞬间转染及报道基因法观察EGCG对NF κB活性的作用 .利用间接免疫荧光法 ,观察EGCG对NF κB (p6 5 )核移位的影响 ,再分别提取CNE1和CNE1 LMP1的胞浆及胞核蛋白 ,通过蛋白质印迹分析EGCG抑制NF κB (p6 5 )的核移位后胞浆及胞核蛋白中NF κB (p6 5 )的变化 .采用蛋白质印迹分析EGCG对IκBα的磷酸化水平的影响 .采用瞬间转染及报道基因法观察EGCG对EGFR启动子活性的影响 ,并用蛋白质印迹分析EGCG对EGFR自身磷酸化的作用 .结果表明EGCG对鼻咽癌细胞的抑制作用有剂量依赖性 ,并可抑制NF κB的活性 .EGCG能抑制NF κB (p6 5 )的核移位 ,并抑制IκBα的磷酸化 .EGCG对NF κB信号通路下游的靶基因EGFR的启动子活性及自身磷酸化都有抑制作用 .由上述结果可以推断 ,EGCG对信号转导通路上的NF κB、NF κB (p6 5 )、IκBα、EGFR多个靶点分子具有干预作用 .LMP1是EB病毒编码的蛋白质 ,因此 ,EGCG抑制     

EB病毒感染人胎鼻咽上皮细胞逃避老化期过程中抑制p16INK4a表达

细胞周期调控紊乱是细胞永生化进程中一个重要的分子事件,本文利用Western blotting和S-P法分别检测p16~(INK4a)、p53、p21~(WAF1/CIP1)和E2F1的蛋白表达,试图从细胞周期调控的角度,探讨EB病毒诱导人胎鼻咽上皮细胞逃避老化期的分子机制。结果表明,EB病毒通过抑制p16~(INK4a)表达而阻断p16~(INK4a)/Rb途径,上调转录因子E2F1,而对p53、p21~(WAF1/CIP1)表达无明显的影响。结果初步揭示,EB病毒介导的p16~(INK4a)/Rb/E2F1细胞周期调控紊乱参与了人胎鼻咽上皮细胞逃避老化期过程,为进一步探讨鼻咽癌发病机制提供了科学依据。     

Op18/stathmin信号调控的研究进展

Op18／stathmin是一种小分子磷蛋白,通过整合体内外不同信号影响微管动力学变化,从而影响细胞周期,与细胞生长、增殖、分化等密切相关;对肿瘤细胞恶性表型的维持、转移与侵犯等也都至关重要．是一个有望在肿瘤治疗上取得突破的．非常重要的潜在靶标．     

EB病毒LMP1及其CTAR1、CTAR2导入人HNE2鼻咽癌细胞的研究

用电穿孔转染法,建立稳定表达野生型LMP1及其不同突变体的鼻咽癌细胞系,并以这些细胞系为材料,用MTT法检测增殖期活细胞,观察LMP1及其不同的结构域对鼻咽癌细胞生长的影响。结果得到了LMP1及其三种突变体、空白载体表达的鼻咽癌细胞系;HNE2－LMP1（野生型）、HNE2－LMP1△185-351(CTAR1缺失型）、HNE2－LMP1（1－231）（CTAR2缺失型）、HNE2－LMP1（1－185）（羧基端胸浆区缺失型）、HNE2－pSG5(空载体型）。进一步证实HNE2－LMP1、HNE2－LMP1（1－231）、HNE2－LMP1△185－351平均吸光度（A）比值高于对照组HNE2－pSG5及HNE2（P＜0.01）。这提示：EB病毒LMP1及其LMP1（1－231）和LMP1△185－351在体外明显促进HNE2细胞增殖。结果表明EB病毒LMP1可能在鼻咽癌中发挥着重要的作用。     

EB病毒介导人鼻咽上皮细胞永生化早期阶段的生物学观察

EB病毒转化人鼻咽上皮细胞,建立体外多阶段细胞模型有利于从细胞和分子水平对肿瘤发病机制作深入研究.我们利用与鼻咽癌密切相关的EB病毒和TPA的协同作用,观察原代人胚鼻咽上皮细胞逃避老化期后其生物学特性的变化.结果表明,EB病毒感染的人胚鼻咽上皮细胞在原代培养后期老化相关半乳糖苷酶(SA-β-Gal)表达降低,形态学上发生改变,出现转化灶样集落,群体倍增时间降低,体外培养寿命延长,表明EB病毒促使部分原代人胚鼻咽上皮细胞逃避老化期、进入永生化早期阶段.这些研究资料为进一步阐明上皮细胞永生化分子机制及建立人鼻咽上皮细胞永生化模型提供实验依据.关键词EB病毒人鼻咽上皮细胞老化期永生化     

鼻咽癌恶性转化基因Tx中3.0kb片段序列分析

从中国人鼻咽癌细胞株 CNE2中克隆分离出的恶性转化基因 Tx,其基因长度为 1 6kb.在对其中 2 .8kb片段测序的基础上 ,对其中 Xho /Eco R 长度约 3.0 kb的片段 ( Tx3.0 )进一步进行了测序 ,并利用生物信息学技术分析认为 ,Tx3.0与人类免疫球蛋白 kappa( Igκ)轻链基因高度同源 ,并直接映射于 J区 .Tx3.0中除有编码免疫球蛋白 kappa链的 J2、J3、J4及 J5基因片段外 ,在各个片段间不仅有 TATA box、CAAT box和 Poly A等经典的调控序列 ,还有 NF- IL6的反应元件、某些转录因子的识别序列、以及核基质结合序列等 .据此以及 2 .8kb序列的分析结果 ,对 Tx3.0下游 1 .0 kb片段序列进行了预测 .对 Tx3.0基因片段的研究为进一步研究 Tx基因在鼻咽癌发病中的作用 ,提供了重要信息 .     

细胞周期蛋白（cyclin）D在鼻咽癌中的表达及功能初？…

探讨了细胞周期蛋白（ｃｙｃｌｉｎ）Ｄ在ＥＢ病毒（Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒｒ ｖｉｒｕｓ）潜伏膜蛋白１（ｌａｔｅｎｔ ｍｅｍｂｒａｎｅ ｐｒｏｔｅｉｎ,ＬＭＰ１）阳性和阴性表达的鼻咽癌细胞５系中的表达特征,利用流式细胞仪同时从ＤＮＡ及蛋白质水平初步分析了ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１在鼻咽癌细胞系中的功能。Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹的结果发现ｃｙｃｌｉｎｈ Ｄ１在ＣＮＥ－ＬＭＰ１中过表达,在ＨＮＥ１中表达较弱;Ｃｙｃｌｉ     

利用基因组相减杂交法从鼻咽癌中分离部分缺失的新序列

利用基因组相减杂交法从鼻咽癌中分离部分缺失的新序列曹亚ＧｌｅｎｎＨｅｇａｍｙｅｒ,ＬｅｏＭ．Ｌｅｅ,ＮａｎｃｙＨ．Ｃｏｌｂｕｒｎ,ＹＩＳｕｎ湖南医科大学肿瘤研究所,长沙４１００７８;（ＣｅｌｌＢｉｏｌｏｇｙＳｅｃｔｉｏｎ,ＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＶｉ...     

Tx基因与Igk基因的同源性研究及其在不同细胞株的表达

本文对以前报道的Ｔｘ基因２．８ｋｂ片段的核苷酸序列与人免疫球蛋白ｋａｐｐａ链Ｃ区基因的核苷酸序列及其编码产物的氨基酸序列进行了同源性比较。结果表明,Ｔｘ基因与ｋａｐｐａ链Ｃ区基因的同源性高达９９．５％以上,编码区的同源性高达１００％。从而提示Ｔｘ基因与ｋａｐｐａ链Ｃ区基因可能是同一种基因。限制性内切酶图谱及Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交分析,也进一步支持这一观点。本文还报道了ｋａｐｐａ链Ｃ区基因在不同细