人呼吸道合胞病毒感染性克隆构建及其验证

人呼吸道合胞病毒（Human respiratory syncytial virus, HRSV）是引起全球婴幼儿急性下呼吸道感染的重要病原体。本研究旨在建立HRSV原型株Long毒株的反向遗传操作系统。通过利用细菌人工染色体（Bacterial artificial chromosome,BAC）为载体骨架构建HRSV的Long毒株全长质粒（Long-BAC），以pcDNA3.1为载体构建分别表达HRSV N、P、M2-1和L蛋白（pcDNA3.1-N,pcDNA3.1-P,pcDNA3.1-M2-1和pcDNA3.1-L）的四个辅助质粒，将五个质粒共转染于表达T7 RNA聚合酶的BSR T7/9细胞系进行病毒拯救。采用间接免疫荧光（Immune fluorescence assay,IFA）和测序方法对拯救的病毒进行鉴定，并评价其在细胞和动物水平的生物学特征。本研究首次成功构建以BAC载体为骨架的HRSV原型株Long感染性克隆，拯救的病毒在不同代数测序结果显示无突变，能够稳定传代，病毒滴度为3×106 PFU/mL；与实验室保存野生型Long株（Long-WT）相比具有相似的细胞...     

小分子靶标的核糖开关生物传感器研究进展

小分子化合物种类繁多，在众多生化过程中发挥关键作用，具有重要的检测意义与价值,其快速灵敏可视化检测技术的开发是当前的研究热点。基于核糖开关的生物传感器因具有识别特性高、操作简便、成本低等优势，为小分子检测提供了一条新途径。对核糖开关的来源、构成、调控机制、体内外筛选，特别是对基于小分子靶标的核糖开关生物传感器分类进行了介绍，并从核糖开关的筛选、裁剪、理性设计、核糖开关无细胞传感器的应用等几个方向提出了展望，以期为小分子靶标的核糖开关生物传感器的发展和应用提供理论依据。     

2009-2019年中国大陆柯萨奇病毒A14型基因特征分析

柯萨奇病毒A14型属于肠道病毒A组，可引起手足口病和无菌性脑膜炎等疾病，但目前全球对CVA14的分子流行病学研究较少，尚无对CVA14基于全长VP1区进行明确分型的相关研究。因得到中国手足口病监测网络的技术支持，本研究获得2009-2019年在中国大陆分离到的15株CVA14，应用RT-PCR对其全长VP1区进行扩增、测序和分析，并与GenBank中下载的22条CVA14全长VP1序列共同构建系统发育树。结果显示，2009-2019年中国大陆分离的15株CVA14与原型株G-14的核苷酸与氨基酸相似性分别为81.8%～82.9%与95.6%～96.9%,15株CVA14之间的核苷酸与氨基酸相似性分别为91.7%～99.7%与98.3%～100%。中国大陆所有的22条CVA14序列之间的核苷酸与氨基酸相似性分别为91.7%～100.0%与98.3%～100.0%。中国大陆所有的CVA14与国外8条CVA14序列之间的核苷酸与氨基酸相似性分别为80.7%～86.0%与94.9%～97.9%。基于全长VP1系统发育树，全球CVA14可划分为A-G七个基因型，目前全球范围内流行的CVA14的基...     

金黄色葡萄球菌肠毒素A、B、C、D、E重组载体的构建及表达

金黄色葡萄球菌肠毒素（Staphylococcal enterotoxins，SEs）是一组结构毒力相似、血清型不同的可溶性小分子蛋白质，平均分子质量为26~30 kD，是引起细菌性食物中毒及肠胃炎的主要因素之一。为了制备金黄色葡萄球菌肠毒素的纯品，首先合成了SEA、SEB、SEC、SED和SEE的基因序列，然后构建了5种肠毒素的原核表达载体，分别转入BL21（DE3）细胞中进行诱导表达。通过SDS-PAGE和Western blot验证，5种肠毒素蛋白均被成功表达，并且在较低的诱导温度（16 ℃）获得一定量的可溶性蛋白。成功制备了5种金黄色葡萄球菌肠毒素的可溶性蛋白，为今后更好地解决因SEs引起的食品安全问题奠定了基础。     

贵州苗族新生儿HbF中G_λ/A_λ比值测定与~Aγ~T基因频率分析

用含Triton X-100的酸性尿素聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)法测定了贵州省108例苗族新生儿脐带血胎儿血红蛋白(HbF)中。~Gγ/~Aγ值。显示107例(占99.07％)新生儿的~Gγ值在55—78％之间,均值与标准差为70.42±3.45;高~Gγ值者1例(占0.925％);低~Gγ值者未发现。用Large-pore Vydac C4柱反相高效液相层析法对108例样本进行了~Aγ~T基因频率(f~4γ~T)分析,f~4γ~T为0.0648。     

人呼吸道合胞病毒F-Fc蛋白不同免疫方案对小鼠免疫效果的比较

人呼吸道合胞病毒（Human respiratory syncytial virus,hRSV）是全球婴幼儿和老年人严重呼吸道疾病的主要原因。hRSV感染主要局限于呼吸道，当鼻黏膜中特异性IgA抗体滴度较低时容易引起hRSV反复感染，理想的hRSV疫苗应诱导全身免疫应答，尤其是黏膜免疫。本研究应用CHO细胞表达融合蛋白F-Fc（含有hRSV F蛋白和人IgG1抗体的Fc片段），F-Fc蛋白结合CpG佐剂两次免疫小鼠，比较滴鼻免疫（Intranasal,in）和肌肉注射（Intramuscular,im）免疫安全性和有效性的差异。与佐剂对照组（CpG）相比，四种免疫方式（CpG+F-Fc/in+im,CpG+F-Fc/im+in,CpG+F-Fc/im+im和CpG+F-Fc/in+in）均能诱导高滴度中和抗体，高水平及Th1偏向的细胞免疫应答，减少肺脏病毒的滴度，但是两次滴鼻免疫组小鼠效果是最好的。同时，两次滴鼻免疫组小鼠诱导的IgA抗体最多，小鼠体重恢复速度最快，并且可以显著降低肺脏病理损伤。综上所述，在以上四种免疫方案中，两次滴鼻免疫诱导产生的免疫效果最优。     

长白山园池沼泽湿地碳源/汇沿湖岸至高地环境梯度变化

湖泊湿地具有长期储碳能力，对区域碳循环具有重大贡献，但有关湖泊湿地碳源汇对气候变化如何响应尚不清楚。为探究高海拔区湖岸湿地碳源/汇对气候变化的响应规律，利用静态箱-气相色谱法及相对生长方程法，研究长白山园池沿岸5种天然沼泽类型(芦苇沼泽、苔草沼泽、杜鹃沼泽、柴桦沼泽、落叶松沼泽)的土壤异养呼吸碳排放(CO₂和CH₄)、植被固碳及其相关环境因子(温度、水位等),依据生态系统净碳收支平衡，量化各沼泽类型的碳源/汇和全球增温潜势(GWP),分析其沿湖岸至高地水分环境梯度变化规律及形成机制。结果表明：处于湖岸至高地水分环境梯度下部生境的草类沼泽(芦苇沼泽和苔草沼泽)为弱源(-1.018和-0.090 t C·hm^-2·a^-1),中部生境的灌丛沼泽(杜鹃沼泽和柴桦沼泽)为强汇或弱汇(1.956和0.239 t C·hm^-2·a^-1),上部生境的森林沼泽(落叶松沼泽)为强源(-3.214 t C·hm^-2·a^-1),且其空间...