苯丙氨酸代谢途径关键酶:PAL、C4H、4CL研究新进展

主要阐述了苯丙氨酸代谢途径中三种关键酶:苯丙氨酸解氨酶(PAL)、肉桂酸4-羟基化酶(C4H)、4-香豆酸辅酶A连接酶(4CL)的研究进展,希望能为研究植物次生代谢途径的研究工作者提供一些帮助。     

参环毛蚓神经组织的NSE、NF200、ED1、GFAP和NO细胞化学特性

为研究环节动物的神经组织学特性,我们选择生活在我国的环节动物门典型代表参环毛蚓（Pheretima aspergillum)为研究对象,使用若干种兔抗鼠抗体,进行了免疫细胞化学与细胞化学染色,在光学显微镜下观察反应阳性细胞的形态与分布。研究发现,在参环毛蚓脑,咽下神经节,腹神经节所有神经细胞呈NSE阴性;在参环毛蚓脑,部分神经细胞呈NF200阳性,在咽下神经节,腹神经节未观察到NF200阳性神经细胞;在参环毛蚓脑观察到较多ED1阳性细胞;在参环毛蚓脑,咽下神经节,腹神经节均未观察到GFAP阳性细胞;在参环毛蚓脑未观察到NADPH－d阳性神经细胞,而在咽下神经节和腹神经节部分神经细胞及纤维NADPH－d阳性。结果表明,参环毛蚓神经细胞的神经细胞特异的烯醇化酶特性,神经微丝蛋白特性与呈型胶质细胞的GFAP特性不同于哺乳动物;其神经组织存在有数量较多的吞噬功能的类似于哺乳动物小胶质细胞的细胞; 参环毛蚓的脑不含有NO能神经细胞,而咽下神经节和腹神经节含有NO能神经细胞。     

十三种神经递质和神经肽在参环毛蚓神经系统的分布:免疫细胞化学研究

选择生活在我国的环节动物门典型代表参环毛蚓（Pheretima aspergillum)的研究对象,使用13种抗体,运用免疫细胞化学染色技术,在光学显微镜下观察神经递质和神经肽阳性细胞的形态与分布。研究发现在参环毛蚓脑,ACTH阳性神经细胞、AVP阳性神经细胞、calcitonin阳性神经细胞、CCK阳性神经细胞、glutamate阳性神经细胞和NPY阳性神经细胞染色浓重,分布密集,位于脑的后侧半,尤其特别的是在calcitonin阳性大神经细胞内含有粗大密集的分泌颗粒。β－EP阳性神经细胞染色较谈,OT阳性神经细胞染色也较深,但分布稀疏, calbindi-D、CGRP、GABA、SOM、VIP呈阴性反应;在咽下神经节与腹神经节,仅有少量AVP阳性神经细胞、glutamate阳性神经细胞和NPY阳性神经细胞散在分布;在肠神经系统,β－EP阳性神经细胞、CGRP阳性神经细胞、SOM阳性神经细胞、VIP阳性神经细胞染色较深,分布散在;另外,在肠上皮,CGRP阳性上皮细胞、calcitonin上皮细胞和VIP阳性上皮细胞呈强阳性反应,分布于阴性上皮细胞之间。表明表明参环毛蚓神经系统存在着在其它环节动物所观察到的神经递质和神经肽：ACTH、VIP、β-endorphin、CCK、NPY、CGRP,亦存在着文献从未报道过的神经递质和神经肽：calcitonin、AVP、OT、glutamate、SOM,其中calcitonin、CGRP、VIP双重分布于神经细胞和非神经组织的肠上皮细胞,本文首次提供了形态学的证据。     

纤维二糖抑制外切纤维素酶水解作用机理的分析

纤维二糖是纤维素分子的结构单元, 也是纤维素酶水解纤维素时的主要产物. 它能强烈抑制纤维素酶的水解作用, 但并不影响酶对纤维素的吸附. 红外、荧光、圆二色谱分析表明, 纤维二糖可结合在外切纤维素酶活性部位附近的色氨酸残基上形成“位阻效应”, 从而阻止纤维素分子链进入活性中心. 同时, 结合纤维二糖后, 外切纤维素酶分子构象发生了较大变化, 致使吸附纤维素后不能导致微纤维的分离, 为“无效吸附”.     

褐腐真菌纤维素降解初期产生羟基自由基的普遍性研究*

本文通过对11株褐腐菌的研究,发现其普遍具有产生HO的特性;而且于褐腐菌的胞外培养液中均得到了部分分离纯化的、非酶的III组分,III组分普遍具有还原Fe3+为Fe2+的能力。III组分对纤维素底物的作用实验表明,HO的氧化机制在褐腐菌对纤维素降解的初期普遍存在,HO氧化断裂纤维素链内或链间的氢键,继而断裂糖苷键,使纤维素暴露出更多的还原性和非还原性末端,为纤维素酶的进一步降解提供有利条件。     

低剂量α干扰素口含片的抗病毒实验研究

本实验是对低剂量α干扰素口含片抗病毒实验研究,通过对各组小鼠不同的给药时间及不同的感染时间,取鼠肺制成悬液接种鸡胚,35℃培养3天,取尿囊液作血滴定,以此来验证干扰素口含片是否抗病毒以及效果如何。     

东北三省6株肾综合征出血热病毒生物学性状的研究

肾综合征出血热(hemorrhagic fever with renal syndrome,HFRS)是我国重点防治的急性传染病,对于流行于不同地区的汉坦病毒(hanatavirus)进行分离和系统地鉴定,可以为HFRS的防治提供科学依据,特别是对流行株血清型及基因型的确定,是研制疫苗和确定防治重点及对策的重要前提,也为研究我国汉坦病毒的遗传和进化特征奠定了基础。研究对6株流行于东北三省的汉坦病毒进行了全面鉴定,其中H8205、H8207株为人源性汉坦病毒,其余均为鼠源性汉坦病毒。研究表明,6株病毒具有病毒型别明确,抗原性较为广谱,免疫原性好,在Vero细胞上适应能力强及病毒滴度高,以及来源及传代历史清楚等特点,适合作为双价HFRS纯化灭活疫苗候选毒株,并且可建立起完善和合格的生产用毒种库,为我国生产以Vero细胞为基质的双价肾综合征出血热纯化灭活疫苗奠定了坚实的基础。     

改革植物生理实验课教学方式初探

实验教学是实施素质教育的途径之一。通过实验教学不仅可提高理论课教学效果 ,更重要的是还可培养学生的实际操作能力、观察能力、综合能力和创新能力 ,促进学生创造性思维的形成。然而 ,以往的植物生理实验课多采用单个小实验 (每次实验只测定一个生理指标 )的教学方式进行 ,学生多数都是按照实验流程机械操作 ,这种传统的实验教学方式不利于学生综合应用和创新能力的培养 ,因而不能适应新世纪人才培养的需要。为此 ,我们在黑龙江省新世纪高等教育教学改革工程项目立项研究中 ,对植物生理实验课教学方式进行了改革。1　内容的确定　　根据…     

转基因家蚕丝腺组织和转化家蚕培养细胞表达hIGF-I

为实现在家蚕培养细胞和家蚕丝腺组织中表达人胰岛素样生长因子（hIGF-I）基因,以家蚕丝胶基因启动子（Pser-1）驱动hIGF-I基因,构建了带有家蚕杆状病毒ie-1启动子（Pie-1）控制的neo基因表达盒的转基因载体pigA3GFP—hIGF-ie—neo．在可表达转座酶的辅助质粒存在下,分别转染BmN培养细胞,以700～800μg/mL的G418筛选,获得了稳定转化细胞系．Westernblotting分析可检测到hIGF-I的特异性条带,ELISA检测结果显示,hIGF-I在5-100个细胞中的表达水平约7800Pg．通过反向PCR分析表明,在转化细胞中外源DNA可通过随机整合或按照piggyBac特定的靶位点序列TTAA插入细胞基因组．转基因载体pigA3GFP-hIGF—ie-neo通过精子介导法导入蚕卵,利用neo,加基因的双重筛选,经过PCR和点杂交鉴定,获得了2头转基因家蚕．ELISA检测结果显示,在G1代hIGF-I在每克中部丝腺组织中的表达水平为2440Pg左右．     

miR-125b-5p对人血管瘤内皮细胞HemES增殖和凋亡的影响及其机制

目的: 研究miR-125b-5p 对人血管瘤内皮细胞HemECs增殖、凋亡的影响。方法: RT-qPCR检测人血管瘤内皮细胞HemECs及其旁系组织细胞中miR-125b-5p与MCL-1 mRNA的表达;选取HemECs细胞分为对照组、miR-NC组、miR-125b-5p mimic组、miR-125b-5p inhibitor组、pc-MCL-1组、miR-125b-5p+ pc-MCL-1组,每组设9复孔。将100 nmol · L^-1 的miR-NC、miR-125b-5p mimic、miR-125b-5p inhibitor 、pc-MCL-1质粒分别或联合转染进入HemECs细胞。MTT法检测HemECs细胞增殖;流式细胞术检测HemECs细胞凋亡; 双荧光素酶报告检测靶向关系;蛋白印迹法检测Ki67、PCNA、cleaved caspase-3、Bax、Bcl-2、p-p70s6k/ p70s6k、p-AKT/AKT、p-mTOR/ mTOR蛋白相对表达水平。结果: 通过比较miR-125b-5p在血管瘤组织和细胞中的表达水平,选择下调效果比较明显的HemECs细胞系进行后续实验。与对照组相比,miR-125b-5p mimic组HemECs细胞增殖及Ki67和PCNA表达明显减少(P＜0.01),细胞凋亡率及cleaved Caspase-3、Bax表达明显升高、Bcl-2表达明显降低(P＜0.01),p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR、p-p70S6K/p70S6K表达明显下调(P＜0.01);miR-125b-5p inhibitor组HemECs细胞增殖及Ki67和PCNA表达明显增加(P＜0.01),细胞凋亡率及cleaved Caspase-3、Bax表达明显降低、Bcl-2表达升高(P＜0.05,P＜ 0.01)。miR-125b-5p靶向下调MCL-1。与miR-125b-5p mimic组相比,miR-125b-5p+ pc-MCL-1组HemECs细胞增殖及Ki67和PCNA表达明显增加(P＜0.01),细胞凋亡率及cleaved Caspase-3、Bax表达明显降低、Bcl-2表达明显升高(P＜0.01), p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR、p-p70S6K/p70S6K表达明显上调(P＜0.01)。结论: miR-125b-5p抑制人血管瘤内皮细胞增殖、诱导细胞凋亡,其机制可能与靶向下调MCL-1表达,抑制AKT / mTOR通路激活等有关。