高致病性2型猪链球菌IV型样分泌系统virB1-89K基因的敲除及其对毒力的影响

摘要:【目的】构建高致病性2 型猪链球菌IV 型样分泌系统virB1-89K基因的敲除株和互补株,研究virB1-89K基因缺失对细菌毒力的影响。【方法】通过同源重组技术敲除virB1-89K基因,多重PCR筛选敲除株并测序鉴定。再将virB1-89K基因克隆到穿梭质粒pSET1后转入virB1-89K敲除株中,构建互补株。比较野生株05 ZYH33、突变株△virB1-89K和互补株CvirB1-89K三者基本生物学特性的差异,小鼠实验分析virB1-89K基因敲除后对细菌毒力的影响。【结果】成功构建突变株△virB1-89K和互补株CvirB1-89K,在基本生物学性状无明显改变的情况下,敲除株的毒性降低到野生株的30%,互补株可恢复其毒性。【结论】virB1-89K基因作为2型猪链球菌高致病性菌株05 ZYH33的IV样分泌 系统的重要组分,与其高致病性密切相关。     

铜绿假单胞菌噬菌体PaP4的分离与鉴定

[目的]鉴定一株新分离的铜绿假单胞菌噬菌体PaP4的生物学特性.[方法]双层琼脂培养法制备PaP4的单个噬斑,观察噬斑特点;用聚乙二醇8000浓缩PaP4颗粒后,再用氯化铯密度梯度离心纯化;用透射电子显微镜观察磷钨酸负染色的PaP4颗粒;提取PaP4基因组核酸,通过限制性内切酶图谱分析其核酸类型;按照感染复数(MOI)分别为0.000 1、0.001、0.01、0.1、1和10加入噬菌体纯培养液和宿主菌,充分裂解细菌后,测定噬菌体滴度;以MOI=10的比例加入噬菌体及宿主菌,进行一步生长实验,绘制一步生长曲线.[结果]PaP4的噬斑直径约3 mm-5 mm,圆形透明边缘清晰;PaP4噬菌体呈多面体立体对称的头部,直径约50 nm,有一个约30 nm的短尾;限制性酶切实验表明PaP4基因组为双链DNA;当MOI为0.001时PaP4感染其宿主菌产生的子代噬菌体滴度最高;用一步生长曲线描绘了其生长特性.[结论]PaP4属dsDNA短尾科裂解性噬菌体;最佳感染复数是0.001;由一步生长曲线得出感染宿主菌的潜伏期是25 min,裂解期是20 min,平均裂解量是150.     

Vibrant技术在磁共振双侧乳腺动态增强检查中的应用及优势

目的：探讨Vibrant 软件技术在磁共振双侧乳腺动态增强检查中的应用及优势。方法：回顾性分析我院经手术或穿刺病理证 实的乳腺疾病患者70 例,均为女性,按照Vibrant 动态增强检查扫描的时间不同,分为A、B 两组,每组35 例。两组病例均采用 1.5T MR 机行动态增强检查。A 组病例行Vibrant 动态增强的扫描时间为9 分24 秒,B组病例行Vibrant 动态增强的扫描时间为 7 分42 秒。结果：A 组病例动态增强MRI 诊断的敏感性为94.74%,特异性为85%,准确性为89.74%;B 组病例动态增强MRI诊 断的敏感性为91.3%,特异性为89.47%,准确性为90.48%。两组病例动态增强MRI对病灶诊断的敏感性、特异性和准确性无显著 性差异（P>0.05）。结论：Vibrant乳腺动态增强扫描技术在乳腺疾病的诊断中具有较高的诊断敏感性、特异性和准确性。Vibrant技 术在缩短增强扫描时间的情况下不降低其诊断效能。     

酮古龙酸菌细胞色素c的表达、成熟及活性分析

目的:从酮古龙酸菌Y25中扩增细胞色素c基因,在大肠杆菌中表达、成熟并进行生物活性分析。方法:从酮古龙酸菌Y25基因组中PCR扩增细胞色素c基因,构建pET22b表达载体;从大肠杆菌BL21(DE3)中扩增细胞色素c成熟基因簇ccmABCDEFGH,连接到带有山梨糖脱氢酶组成型启动子的pBBR1MCS2-P200载体中;将构建的2个质粒共转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达后进行血红素染色检测;通过氧化还原光谱法对Ni柱亲和纯化的重组蛋白进行活性分析。结果:扩增得到1404 bp的细胞色素c基因及6481 bp的ccmABCDEFGH基因簇;重组菌株经IPTG诱导表达后行SDS-PAGE分析,可见相对分子质量为50×103的表达条带;血红素染色显示重组蛋白结合有血红素;经氧化还原光谱扫描,显示亲和层析纯化得到的目的蛋白有细胞色素c特征吸收峰。结论:从酮古龙酸菌Y25中扩增得到了细胞色素c基因,在大肠杆菌中进行了表达和成熟,表达蛋白具有细胞色素c生物活性。     

碱度胁迫对尼罗罗非鱼鳃离子细胞形态以及鳃、肾和肠中HCO3-转运因子的影响

采用扫描电镜观察了不同碱度(0、2、4 g/L Na HCO_3)胁迫对尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)鳃离子细胞形态变化的影响,并采用免疫组化技术观察了鳃、肾、肠中4个HCO_3~-转运因子碳酸酐酶(CAⅡ、CAⅣ)、碳酸氢钠协同转运载体(SLC4A4)、Cl~-/HCO_3~-离子交换体(SLC26A6)的阳性反应变化。扫描电镜结果表明,鳃离子细胞分布在鳃小片基部。根据其表面开孔形状和尺寸,可分为Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型和Ⅳ型4种亚型,各亚型离子细胞的开孔尺寸随碱度胁迫强度增高呈正比增大,Ⅲ型离子细胞开孔尺寸变化最明显(P0.01);离子细胞总数目也随碱度升高而增加,Ⅲ型离子细胞数目上升最为显著(P0.01)。免疫组化结果表明,在淡水、碱水组中,CAⅡ、CAⅣ、SLC4A4、SLC26A6在鳃小片基部和肾中均有阳性反应,且随着碱度升高,阳性反应增强,但在肠道中未观察到阳性反应。本研究结果初步表明,尼罗罗非鱼可通过鳃离子细胞形态和数量调节适应碱度变化,鳃和肾为主要应答调节器官。     

高频度微卫星不稳定性大肠癌“修饰型”微卫星变化与MLH1及KRAS基因突变密切相关

本研究通过方法学的改良和观察方式的创新试图阐明这种现象的原因。微卫星非传统的检测方法仅能实现微卫星定性检测,我所在的研究组开发了自动片段分析双荧光标识技术,提高了微卫星检测的感度和重复性。并实现了微卫星片段变化长度的定量。小于6碱基的微卫星变化被定义为修饰型微卫星不稳定,大于8碱基的变化被定义为跳跃型微卫星不稳定．它们的电泳谱截然不同。前者表现为在非肿瘤来源微卫星位点基础上的增加或减少,后者表现为距离非肿瘤微卫星片段远隔部位的新波形的出现。通过研究我们发现,在DNA错配修复缺陷细胞系及基因敲除大鼠自发肿瘤样本,仅有修饰型微卫星不稳定性检出;在人类DNA错配修复缺陷细胞系连续80次传代也没有检出跳跃型变化。跳跃型变化不能通过简单重复序列不稳定基础上的增加或减少的累加而获得。在76例散发大肠癌,我们检测了微卫星不稳定性,KRAS基因突变,并对高频度微卫星不稳定性病例的两个主要DNA错配修复基因MSH2和MLH1进行了全长测序。我们发现,在大肠癌,按频度的传统分类与按波形变化的分类有高度的一致性,高频度微卫星不稳定性病例均检测到跳跃型表现,低频度微卫星不稳定性都表现为修饰型变化。在12例高频度微卫星不稳定病例,有三例检出了跳跃型和修饰型同时存在微卫星不稳定的特殊表型,这3例均检出KRAS的突变,更有趣的是该3例病例也同时检出了DNA错配修复基因MLH1的变异。而在其他9例高频度微卫星不稳定病例,KRAS突变及MLH1、MSH2突变未检出。通过对突变谱的分析我们还发现,修饰型微卫星不稳定与KRAS基因12号密码子的转换型突变高度相关,而微卫星稳定的病例检出的KRAS基因12号密码子突变多为颠换型突变。修饰型微卫星不稳定表型检出的高频度转换?     

鼻内镜下腺样体切除术联合鼓膜置管术对分泌性中耳炎患儿血清炎症因子和T细胞亚群的影响

摘要 目的：探讨鼻内镜下腺样体切除术联合鼓膜置管术对分泌性中耳炎（SOM）患儿血清炎症因子和T细胞亚群的影响。方法：选取2016年8月~2018年12月期间我院收治的SOM患儿113例，上述患儿根据随机数字表法分为对照组（n=56）和研究组（n=57），对照组患儿予以鼓膜置管术治疗，研究组则在对照组的基础上联合鼻内镜下腺样体切除术治疗，比较两组患儿疗效、血清炎症因子、T细胞亚群、中耳积液时间、语频区气导平均听阀及并发症。结果：研究组术后3个月的临床总有效率为94.74%（54/57），高于对照组的75.00%（42/56）（P<0.05）。两组术后3个月血清白介素-2（IL-2）、白介素-6（IL-6）及肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平均下降，且研究组低于对照组（P<0.05）。两组术后3个月CD8⁺下降，且研究组低于对照组（P<0.05）；CD4⁺、CD4⁺/ CD8⁺升高，且研究组高于对照组（P<0.05）。研究组中耳积液时间短于对照组，语频区气导平均听阀高于对照组（P<0.05）。两组术后并发症发生率比较无差异（P>0.05）。结论：鼻内镜下腺样体切除术联合鼓膜置管术治疗SOM患儿，疗效显著，可有效改善血清炎症因子、T细胞亚群、中耳积液时间及语频区气导平均听阀，且安全性较好，临床应用价值较高。     

同步辐射X-ray光源在生物学研究中的应用与进展

20世纪七十年代以来,同步辐射装置经历了三个迅速发展阶段,现在,第四代X-ray自由电子激光线站已经建成。同步辐射光源已经成为生命科学、医学、化学、物理学、材料科学等学科领域最先进的实验设施,具有广泛而重要的应用前景。本文概述了同步辐射X-ray光源的特性,介绍了同步辐射X-ray光源在生物学研究中新的应用和进展。     

全胃切除术后四种消化道重建方式的对照研究

目的:全胃切除术后常常会发生明显的营养不良、各种术后不良症状以及生活质量的下降.本研究通过对比全胃切除术后四种消化道重建方式,探讨全胃切除术后理想的消化道重建术式.方法:选取自2007年11月至2011年3月间我院行全胃切除术治疗胃癌患者196例,分为A组(行功能性空肠间置代胃术)、B组(P型空肠间置代胃术)、C组(P型Roux-en-Y空肠代胃术)、D组(改良Longmire法空肠代胃术)4种消化道重建术.比较4组患者手术时间、出血量、住院时间和死亡率以及术后1年生活质量、营养状况和术后并发症情况.结果:4组患者在平均手术时间、出血量、住院时间和死亡率方面无明显差异(P＞0.05).A组患者倾倒综合征、反流性食管炎、Roux-en-Y滞留综合征发生率分别为2.1％(1/48)、4.2％(2/48)和2.1％(1/48),均显著低于其他3组(均P＜0.05).术后1年生活质量(Visick分级指数)的比较,A组明显优于其他3组(均P＜0.05).术后1年营养预后指数(PNI)分别为55.40± 3.6,52.30± 2.8,41.5±4.3和40.7±5.5,A组和B组明显高于C组和D组(P＜0.05),A组和B组组间数据差异无统计学意义(P＞0.05),C组和D组组间数据差异无统计学意义(P＞0.05).结论:全胃切除术术后消化道重建应保持空肠的连续性并保持摄入食物通过十二指肠.功能性空肠间置代胃术安全可靠,对于减少全胃切除术后并发症的发生率,提高生活质量和营养状况有着重要的意义.