百日咳鲍特菌脂寡糖的制备及寡糖结合物在小鼠体内免疫原性研究

目的提取纯化百日咳鲍特菌(简称百日咳杆菌)脂寡糖(lipo-oligosaccharides,LOS),制备百日咳杆菌多糖蛋白结合物,并分析其理化性质及免疫原性。方法通过改良热酚水法提取百日咳杆菌的LOS,采用酶解法纯化LOS,通过1%冰醋酸水解获得寡糖(oligosaccharides,OS),产物经Tricine-SDS-PAGE及核磁共振氢谱(~1H NMR)鉴定。OS的羟基经1-氰基-4-二甲氨基吡啶四氟硼酸酯(1-cyano-4-dimethylamino pyridinium tetrafluoroborate,CDAP)活化后,与破伤风类毒素己二酸酰肼衍生物(TT_(AH))共价结合,制备多糖蛋白结合物,经Sephacryl S-300层析柱纯化后收集结合物原液,并对结合物的理化性质、抗原性进行分析,采用两种剂量(2.5μg/剂和5.0μg/剂)免疫BALB/c小鼠,分析其免疫原性。结果纯化后LOS纯度90%,核磁共振结果表明OS结构正确,功能基团得到保留。制备的结合物抗原性未发生改变,经3针免疫后,两种剂量下结合物均有剂次加强效应(P0.05),且两者差异无统计学意义(P0.05)。结论将百日咳杆菌OS与TT_(AH)结合是制备百日咳杆菌多糖蛋白结合疫苗的可行途径,并且结合物在小鼠体内具有良好的免疫应答。     

氢氧化铝结合的S和R型志贺氏Ⅰ型菌内毒素及其亚单位用于免疫接种制剂的新趋势

<正>引言 革兰氏阴性菌细胞壁成分中的内毒素具有多种生物活性,脂类A一般被认为是引起病理反应的成分。对高等生物来说,内毒素可能有致死性或致热原性,但对于人类,内毒素可通过提高非特异性抗感染免疫或激发抗体生成等作用而使其得益。 本文主要研究了用不同方法提取的S型及R型志贺氏I型菌的脂多糖和脂类A,其目的是对这些物质的体外抗原特性和体内保护效果等生物学活性     

用伤寒杆菌温敏突变株诱导小鼠免疫保护作用

<正>伤寒仍然是发展中国家的一个严重问题。在这些国家的供水和污水排放设施达到世界其它地区的水平之前,免疫仍是减少该病发病的最有效方法。时下可以使用的灭活全菌体疫苗仍很不理想,常伴有严重的副作用。在伤寒菌苗研究方面,目前正在致力研究的项目包括伤寒杆菌gal E和aro A减毒株,新的纯化荚膜多糖(Vi抗原)和外膜蛋白的方法。     

志贺氏I型痢疾杆菌O-特异性多糖与破伤风类毒素结合疫苗的制备及其在小鼠体内的免疫原性

从志贺氏I型痢疾杆菌LPS中分离纯化出O SP半抗原 ,以ADH为连接剂将其与TT结合形成O SP TT结合疫苗 ,并用此结合疫苗免疫NIH小鼠 ,结果显示单独使用O SP免疫后 ,小鼠血清中没有抗LPS抗体产生 ,而用O SP TT免疫后小鼠血清中产生了抗LPSIgG和IgM抗体 ,且IgG抗体水平高于IgM抗体 ;O SP TT免疫组第二次和第三次免疫后IgG抗体水平均有显著的升高 (P <0 0 1) ,但第二次和第三次免疫后血清IgM抗体虽有升高 ,但与前一次免疫相比均无显著差异 (P >0 0 5 ) ,表明O SP TT结合疫苗具有加强免疫应答效应。补体介导的体外杀菌活性试验结果证明 ,O SP TT免疫血清在 1∶16 0倍稀释后仍对志贺氏I型痢疾杆菌具有特异性杀菌活性。     

甲型副伤寒菌O-特异性多糖与破伤风类毒素结合菌苗的制备及其在小鼠体内的免疫原性

以脱毒后去除类脂A的甲型副伤寒杆菌高分子量O SP1和低分子量O SP2 为特异性抗原 ,以破伤风类毒素 (TT)为蛋白质载体 ,用己二酸二肼 (ADH)作为连接剂制备的两种结合物及其多糖免疫NIH小鼠 ,结果显示单独注射O SP1或O SP2 免疫小鼠后 ,均不能刺激小鼠产生抗 LPS抗体 ;而用O SP1 TT和O SP2 TT结合物免疫后 ,小鼠血清中均产生了特异性抗 LPSIgG和IgM抗体 ,且O SP1 TT免疫组血清中IgG抗体水平明显高于O SP2 TT免疫组 ,两组结合物免疫血清中抗体类型以IgG为主。O SP1 TT结合物免疫组第二次免疫和第三次免疫后IgG抗体水平均较前一次有显著升高 (p<0 0 1)说明 ,O SP1 TT结合物具有加强应答效果。补体介导的体外杀菌试验证明 ,O SP1 TT与O SP2 TT结合物免疫血清具有特异性杀菌活性。     

志贺氏菌的毒力遗传学

<正> 志贺氏菌感染的致病作用 60年代的研究提示,痢疾杆菌致病过程中的一个基本步骤是感染结肠上皮细胞,目前对志贺氏菌属的研究就是基于这些观察之上。当进肠腔的志贺氏菌侵袭肠粘膜后,在细胞内生长的细菌引起溃疡、炎症,并出现临床腹泻症状。丧失了侵犯粘膜能力的突变株不能引起疾病。     

大肠杆菌O157∶H7感染流行概况

大肠杆菌O157∶H7是肠出血性大肠杆菌的主要病原血清型,可引起腹泻、出血性肠炎,极易继发溶血性尿毒综合症和血栓性血小板减少性紫癜两种严重的并发症,死亡率高。1982年被发现以来,大肠杆菌O157∶H7已在世界多个国家引起过爆发流行,呈现了流行的世界性,中国也于上世纪90年代末在局部地区出现了爆发,死亡率极高,引起了相关部门的高度重视。本综述试图通过对大肠杆菌O157∶H7在世界范围流行状况的描述,提高公众对该病的认识,为相关疫苗的研发提供流行病学资料。     

液相色谱-ELISA测定结合疫苗中游离蛋白含量可行性的初步探讨

用适宜分离范围的色谱柱,预先确定细菌多糖蛋白结合疫苗载体蛋白的洗脱峰出峰时间;然后将细菌多糖-蛋白结合疫苗用相同条件进行分离,分部收集各洗脱峰并直接包被酶标板,与适宜浓度的载体蛋白特异抗体反应后,加入酶标二抗测定各洗脱峰样品中载体蛋白的吸光值;把载体蛋白出峰后的吸光值总和计为游离载体蛋白质吸光值;以游离载体蛋白吸光值占所有洗脱峰吸光值的比例计算游离载体蛋白含量。以伤寒Vi结合疫苗(载体蛋白rEPA)和甲型副伤寒结合疫苗(载体蛋白为TT)作为实验材料探讨方法的可行性。结果说明,该方法具有较好的特异性和敏感度。     

福氏2a痢疾杆菌O—特异性多糖与破伤风类毒素结合疫苗的制备及其免疫学特性

通过己二酸二肼（ADH）将福氏2a痢疾杆菌脂多糖（LPS）经酸水解脱毒纯化后得到的O－SP和破伤风类毒素（TT）蛋白共价结合,制备了福氏2a痢疾杆菌结合物。以2.5μg多糖或含2.5μg多糖的结合物经皮下注射免疫NIH品系雌性小鼠,同时以25μg多糖或含25μg多糖的结合物经耳缘静脉注射家兔。用ELISA方法分别检测小鼠和家兔血清中抗脂多糖抗体水平及抗TT水平,并用豚鼠血清补体介导进行了体外杀菌实验。结果显示：用本实验方法提取的多糖,合成的多糖衍生物,多糖－蛋白结合物都具有福氏2a痢疾杆菌O－抗原特异性,其化学组成及结构特异性和国外文献报道基本一致。单独用多糖免疫小鼠和家兔未能诱导LPS抗体,而结合物免疫小鼠和家兔的血清诱导出了较高的抗LPS IgG抗体及抗TT抗体,并有较强的体外杀菌活性。产生的抗体存在着免疫记忆性,可以产生再次免疫应答加强反应。     

2～59岁健康人群接种ACYW135群脑膜炎球菌多糖疫苗的免疫原性观察

目的评价ACYW135群脑膜炎球菌多糖疫苗在2～59岁健康人群中的免疫原性。方法 2～59岁健康人群接种者随机抽样(n=60),接种一剂四价脑膜炎球菌多糖疫苗。采集接种前和接种后1个月血清,采用体外杀菌试验(Serum bactericidal assay,SBA)检测血清中抗A、C、Y、W135群脑膜炎球菌的血清杀菌滴度。结果免疫前、后血清抗A群脑膜炎球菌的血清杀菌滴度GMTs(95%CI)分别为1241(736,2091)和7559(5520,10351)(P<0.05);抗C群脑膜炎球菌的血清杀菌滴度GMTs(95%CI)分别为4(9,21)和4787(2947,7775)(P<0.05);抗W135群脑膜炎球菌的血清杀菌滴度GMTs(95%CI)分别为16(9,28)和368(162,883)(P<0.05);抗Y群脑膜炎球菌的血清杀菌滴度GMTs(95%CI)分别为120(58,246)和1373(687,2745)(P<0.05)。免疫前和免疫后血清抗A群脑膜炎球菌的杀菌滴度≥128的比例分别为87(77.4,95.1)%和100(83.2,100)%;抗C群脑膜炎球菌的比例分别为17(8.3,28.5)%和97(88.5,99.6)%;抗W135群脑膜炎球菌的比例分别为13(5.9,24.6)%和68(55.0,79.7)%;抗Y群脑膜炎球菌的比例分别为57(43.2,69.4)%和85(73.4,92.9)%。免疫后较免疫前抗A群、C群、W135群和Y群脑膜炎球菌杀菌抗体滴度≥4倍升高的比例分别为50(27.2,72.8)%、97(88.5,99.6)%、62(43.2,73.9)%和55(41.6,67.9)%。结论虽然免疫前人群由于地方和国家免疫计划的实施已具有较高水平的抗A群脑膜炎球菌的血清杀菌滴度,但接种ACYW135群脑膜炎球菌多糖疫苗后可以使其保护水平进一步提高,并使人群对C群、W135群和Y群脑膜炎球菌的低水平杀菌抗体滴度均显著升高达到保护水平,证明ACYW135群脑膜炎球菌多糖疫苗在2～59岁健康人群中具有比较好的免疫原性。