重组BPI-(23)-Fcγ1融合蛋白在CHO细胞中的表达

杀菌 通透性增加蛋白 (Ｂａｃｔｅｒｉｃｉｄａｌ ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙ ｉｎｃｒｅａｓｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎ ,ＢＰＩ)是人和许多哺乳类动物白细胞中存在的一种碱性蛋白 ,它能与革兰氏阴性菌脂多糖 (ＬＰＳ)结合 ,具有中和内毒素和杀灭细菌作用[1 ] 。人ＢＰＩ基因位于第 2 0号染色体上 ,完整蛋白由 45 6个氨基酸组成 ,其活性部位主要在蛋白氨基端约 2 0 0个氨基酸 (ＢＰＩ2 3) [2 ,3 ] 。实验室研究和临床试验表明重组ＢＰＩ(ｒＢＰＩ)及其衍生物在革兰氏阴性菌感染的治疗方面有良好的发展前景[4] 。目前ＢＰＩ在应用上存在的主要问…     

杀菌通透性增加蛋白基因的克隆及在CHO细胞中的表达

从一名健康中国人外周血白细胞中克隆出杀菌 通透性增加蛋白 (BPI)基因 ,全长1 45 2bp,编码 2 7个氨基酸的信号肽和 45 6个氨基酸成熟蛋白。序列比较发现 ,此序列与国外发表的序列有 6个核苷酸的差异 ,编码蛋白有 4个氨基酸的差异。构建真核表达质粒 ,在CHO细胞中实现BPI基因的稳定表达。对重组蛋白初步纯化后进行杀菌实验 ,结果表明重组蛋白具有与天然蛋白同样的生物活性。     

次级洞巢鸟对次生林天然树洞的利用

1996年 3～ 7月对吉林省左家自然保护区次生阔叶混交林中的 5种次级洞巢鸟的巢位选择进行了研究 ,所涉及的 5种次级洞巢鸟为大山雀 (Parusmajor)、沼泽山雀 (Paruspalustris)、普通 (Sittaeuropacea)、白眉姬 (Ficedulazanthopygia)、灰椋鸟 (Sturnuscineraceus)。研究表明 :5种次级洞巢鸟在位巢选择中 ,对洞口横径、洞口纵径、洞内径、洞深和洞口方向的选择具有共性。利用的洞口 ,方向在 180°～ 2 2 5°和 315°～ 36 0°分布最少 ;而未利用的洞口 ,方向在这 2个区间的分布恰好相反。利用和未利用的巢洞特征因子差异显著。人为堵塞后又打开的巢洞会迅速被再利用 ,结果说明次生林中天然树洞资源成为次级洞巢鸟巢位选择的限制因子。     

科学奇葩——斑马鱼

模式动物一直受到发育生物学(生物体从受精卵发育成一个个体)研究者的钟爱。模式动物中最著名的当属果蝇,而蟾蜍、鸡、线虫和小鼠也在不同的时期成为了模式动物,在人类自然科学探索过程中发挥了巨大作用。     

麻雀哪儿去了？

它没有眩目的外表,卑微渺小,却最愿与人亲近;它没有锐利的爪牙,屡遭浩劫,却有着最顽强的生命力。它叫麻雀,一种单纯而又朴素的小鸟,一种令农民既爱又恨的小鸟。而如今,这个卑微又众多的生命正在无声无息地消失中,让人们思念它曾经欢畅地飞来,又感叹它哀鸣着飞走。     

仙灵骨葆对骨质疏松大鼠OPG/RANK/RANKL 表达的影响

目的:观察仙灵骨葆治疗骨质疏松模型大鼠后,对大鼠体内OPG/RANKL/RANK表达的影响。方法:卵巢摘除法建立SD大鼠骨质疏松模型,设立假手术组、对照组(单纯去卵巢组)、雌激素组(给予17β-雌二醇)和治疗组(给予仙灵骨葆)。术后1周开始给药,给药12周后检测各组大鼠股骨骨密度,ELISA法检测血清中OPG/RANKL含量,RT-PCR检测骨组织中OPG/RANK/RAN-KL mRNA表达,免疫组化检测骨组织中RANK的表达。结果:对照组大鼠骨密度显著低于假手术组;治疗组和雌激素组大鼠O-PG表达显著高于对照组,RANK及RANKL的表达显著低于对照组。结论:采用卵巢摘除法成功建立大鼠骨质疏松模型;仙灵骨葆可促进骨质疏松大鼠OPG的表达,并抑制RANK及RANKL的表达,对骨质疏松模型大鼠有治疗作用。     

hTERT基因组成型过量表达的Vero细胞系的建立

目的:建立组成型过量表达hTERT的Vero细胞系。方法:从质粒pCI-neo-hTERT酶切、分离纯化hTERT cDNA,克隆入phEF/chMAR-hyg载体中,构建重组真核表达质粒phEF/chMAR-hyg-hTERT。采用脂质体转染法转染Vero细胞,经潮霉素筛选、克隆分离培养,用RT-PCR检测转染阳性细胞克隆的hTERT mRNA表达丰度,Western blotting验证高丰度表达hTERT mRNA克隆的hTERT表达。用Cedex AS20细胞密度和活力分析系统考察过量表达hTERT Vero细胞在组织培养板中批次培养的生长特性。结果:从phEF/chMAR-hyg-hTERT转染阳性细胞中筛选出hTERT mRNA和蛋白高丰度表达的Vero细胞系(Vero-T1),Vero-T细胞在批次培养中后期的细胞密度和活力均高于野生型Vero细胞。结论:成功建立了hTERT基因组成型过量表达的Vero细胞系,为探索以组成型过量表达hTERT的技术途径改善细胞培养特性、提高病毒疫苗生产工艺水平奠定了基础。     

NLRP3炎性小体及其下游产物在TAO和ASO患者动脉中的表达及意义

目的:探讨NLRP3炎性小体及其下游产物在血栓闭塞性脉管炎(TAO)和动脉粥样硬化闭塞症(ASO)患者动脉中的表达及意义。方法:选择8例TAO患者截肢后的下肢动脉,13例ASO患者截肢后的下肢动脉,5例因窒息死亡的新生儿主动脉,将三组动脉分别进行HE染色及免疫组化分析,半定量的测量3组动脉中NLRP3、Caspase-1、IL-1β和IL-18的累积光密度值(IOD)并进行组间比较。结果:3组动脉组织的HE染色结果均符合其特征。TAO组和ASO组动脉组织中NLRP3、Caspase-1、IL-1β和IL-18的表达与对照组相比均显著升高,差异具有统计学意义(P0.05)。结论:NLRP3、Caspase-1、IL-1β和IL-18在TAO和ASO患者动脉组织中的表达明显升高,NLRP3炎性小体及其下游产物可能参与了TAO和ASO的发病过程。     

人工巢箱条件下的大山雀巢捕食

于2004—2008年在次生阔叶林中,采用悬挂巢箱的方法对大山雀的巢捕食作了研究。结果表明:不同年龄巢箱的被捕食率显著不同,新巢箱被捕食率最低,第2年被捕食率最高,第3年下降很大,第4年又略有上升。被捕食巢的窝卵数极显著的低于未被捕食巢的窝卵数。影响巢捕食的主要生境因子为巢箱高度和巢上盖度,其次为灌木的密度和高度。     

抗HBsAg二硫键稳定性Fv抗体(dsFv)基因的构建与表达

采用PCR定点突变方法,成功地构建了抗HBsAg dsFv抗体的轻、重链突变基因,NdeI和EcoRI酶切后分别插入pET20b表达质粒,经测序证明在重链第44位氨基酸和轻链第100位氨基酸已突变形成半胱氨酸(Cys).VH和VL重组质粒分别转化到大肠肝菌BL21(DE3)中,IPTG诱导后,经SDS-PAGE电泳表明在12kD处有包含体蛋白表达,表达蛋白含量分别为28%和35%.VH和VL包含体蛋白经GuHCl变性后,等量混合在复性折叠液中结合,形成了一个约24kD并有一定活性的dsFv蛋白.抗HBsAg dsFv抗体表达及复性的成功,为今后基因工程抗体的研究及应用奠定了基础.