禽流感病毒H5N1亚型NS1基因在大肠杆菌中的表达

目的表达H5N1亚型禽流感病毒(AIV)NS1蛋白,用于AIV感染与注射灭活疫苗鸡的鉴别诊断和NS1蛋白功能研究。方法采用RT_PCR方法对H5N1亚型AIVNS1基因进行扩增,将PCR产物克隆于pGEM_T_easy载体,将该基因插入pGEX_4T_1中构建NS1基因原核表达载体,转化BL21大肠杆菌后,在IPTG诱导下表达NS1蛋白,Westernblot鉴定表达NS1蛋白。结果成功克隆H5N1亚型AIV的NS1基因,其核苷酸序列长度为690bp,编码230个氨基酸残基。构建NS1基因原核表达载体在大肠杆菌内表达出约51×103的NS1融合蛋白。Westernblot鉴定表明表达NS1蛋白与H7N2AIV感染鸡血清有反应性。结论在大肠杆菌中成功表达了H5N1亚型AIVNS1基因蛋白,具有与感染H7N2亚型AIV阳性血清反应原性。     

TBP-like Protein(TLP)通过G_2/M期阻滞抑制HeLa细胞的增殖

TBP-like protein(TLP)是真核细胞中一种常见的转录因子,在调节生长发育方面起着重要的作用。该实验构建重组质粒pEGFP-N1-TLP,研究TLP对人宫颈癌细胞HeLa增殖的影响。利用流式细胞仪检测质粒的转染效率,通过激光共聚焦显微镜观察外源TLP蛋白的亚细胞定位。经过MTT检测、RNAi-TLP诱导的基因沉默及Hoechst33258染色研究TLP对HeLa细胞的增殖抑制作用。流式细胞术、Western blot和RT-PCR实验结果表明,TLP将HeLa细胞周期阻滞于G2/M期,并抑制周期相关基因CDK1和CyclinB1的转录和翻译。研究表明,外源TLP在HeLa细胞的细胞核中表达,通过降低细胞周期相关基因CDK1和CDK1的表达水平,将HeLa细胞的细胞周期阻滞于G2/M期,从而抑制细胞的增殖。     

鸡马立克氏病抗性选育实验

马立克氏病（MD）是严重危害养鸡业发展的急性传染病。从1996年起,采用血型基因检测和后裔马立克氏病病毒（MDV）攻击选留强抗性亲本途径开展了MD抗性选育实验。结果表明：（1）亲本4上发代No.614血型基因检测阳性率逐代上升。由F0的68．8％,F1的77．3％,F2的81．8％到F3的90．5％。（2）F2－F4雏鸡10日龄MDV攻击,60日龄死亡率,亲本对No.614抗血清呈阳性反应的实验组3个世代分别是25．8％,69．2％和29．4％;亲本对No.614抗血清呈阴性反应的对照组相应是30．6％,81．0％和52．9％,实验组鞭显著低于对照组（P＜0．01或P＜0．05）。（3）实验期间F2－F4雏鸡9个内脏器官组织肿瘤病变率,实验组3个世代分别是87．6％,83．3％和58．8％;对照组相应为88．1％,84．5％和70．6％;两者比较除个别世代,个别器官实验组低于对照组（P＜0．05）外,多数没有显著差异（P＞0．05）。并对实验结果及MD抗性的遗传控制进行了讨论。     

低浓度NaHSO3促进田间水稻的光合磷酸化和光合作用

用１～２ｍｍｏｌ／Ｌ ＮａＨＳＯ３喷施于水稻（Ｏｒｙｚａ ａｔｉｖａ Ｌ．）叶面可以提高叶片的光合速率,并能持续３ｄ以上。在此条件下,光下叶片中的ＡＴＰ含量明显增高,叶片的叶绿素毫秒延迟荧光加强,反映与光合磷酸化活力有关的跨类囊体膜质子梯度增加。乳熟期喷施２次１ｍｍｏｌ／Ｌ ＮａＨＳＯ３后,水稻产量提高约１０％。研究表明ＮａＨＳＯ３的主要作用和ＰＭＳ（ｐｈｅｎａｚｉｎｅ ｍｅｔｈｏｓｕｌｆａｔｅ）     

HIV-1 Gag蛋白的高效表达调控研究

LTR位于HIV前病毒同DNA基因组的两末端,Gag基因位于5′端LTR的下游。LTR对转录的调控作用主要是由5′端LTR进行的。LTR具有启动子的作用,在结构上具有真核启动子的典型特征。另外,HIV-1 Gag蛋白还有能够自我装配成病毒样粒子(virus like particle,VLP)并从细胞中释放出来的重要特性。 我们利用痘苗病毒表达系统,探索了在细胞质环境中LTR中的多种功能结构对Gag蛋     

HIV-2 Gag蛋白的表达研究

HIV-2是引起艾滋病的主要病原之一,与HIV-1相比,其致病性弱,感染的潜伏期长,有的甚至不发展成艾滋病。但HIV-2的易感宿主较HIV-1广,除人和猩猩之外,HIV-2还能感染猴等灵长类动物,这将为艾滋病疫苗和实验动物模型的研究提供有利条件。 我们应用原核高效表达载体pBV220在大肠杆菌中分别表达了HIV-2gag全部和部分蛋白(去掉与pol重叠序列)。在此基础上我们又将gag全部和部分序列置于痘苗病毒P7.5和     

HIV-1 Gag p17-p24在痘苗病毒中的表达及性质研究

研究了重组痘苗病毒表达的HIV-1核心蛋白(Gag)p17-p24蛋白的一些生物学及免疫学特点。间接免疫荧光、Dot ELISA及Western blot结果表明,构建的两株重组病毒分别表达了HIV-1 Gag p24及p17-p24融合蛋白。电镜观察证实,Gag p24及p17-24重组蛋白均可形成病毒样粒子。重组病毒可诱导小鼠产生抗HIV-1 Gag p24抗体。重组病毒感染BHK21细胞后,可见由于细胞凋亡而致的染色体DNA断裂“梯子”电泳图。     

HIV-1 Gag p17-p24在痘苗病毒中的表达及性质研究

研究了重组痘苗病毒表达的HIV1核心蛋白(Gag)p17p24蛋白的一些生物学及免疫学特点。间接免疫荧光、DotELISA及Westernblot结果表明,构建的两株重组病毒分别表达了HIV1Gagp24及p17p24融合蛋白。电镜观察证实,Gagp24及p1724重组蛋白均可形成病毒样粒子。重组病毒可诱导小鼠产生抗HIV1Gagp24抗体。重组病毒感染BHK21细胞后,可见由于细胞凋亡而致的染色体DNA断裂“梯子”电泳图。     

Injecting skin fibroblasts into muscles to express human clotting factor IX cDNA

Ｉｔｉｓｅａｓｙｔｏｄｅｒｉｖｅｐｒｉｍａｒｙｍｙｏｂｌａｓｔｓｆｒｏｍｈｕｍａｎｂｉｏｐｓｙ.Ｔｈｅｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄｍｙｏｂｌａｓｔｓｃｏｕｌｄｅｘｐｒｅｓｓｆｏｒｅｉｇｎｇｅｎｅａｔｈｉｇｈｌｅｖｅｌ.Ｂｕｔｌｅｓｓｍｙｏｂｌａｓｔｓｅｘｉｓｔｉｎａｄｕｌｔｓ[1],ａｎｄａｒｅｌｉａｂｌｅｔｏｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅａｎｄｆａｉｌｔｏｄｉｖｉｄｅ,ｌｅａｄｉｎｇｔｏｌｏｗｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙｏｆｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎａｎｄａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｉｎｖｉｔｒｏ,ａｎｄｓｕｂｓｅｑｕｅｎ…     

皮肤成纤维细胞肌内注射表达外源基因的可行性

将分别带有报告基因lacZ和人凝血因子ⅨcDNA的兔原代皮肤成纤维细胞直接注射到兔肌肉组织后 ,皮肤成纤维细胞可以长期存活并持续表达外源基因 .其中β 半乳糖苷酶表达至少持续 3个月 ,人凝血因子Ⅸ蛋白表达持续 1个月 .研究结果将皮肤成纤维细胞的优点和肌肉组织途径的优势有机地结合起来 ,为血友病B及其他遗传病的体细胞基因治疗提供一条新的途径 .