丹参硫氧还蛋白基因SmTrxh的克隆和生物信息学分析

对丹参EST数据库进行BLAST同源性比对发现,登录号为CV165156的EST序列与硫氧还蛋白基因（Trx）有很高的同源性。进一步用PCR方法从丹参基因组水平上克隆到长1806bp的DNA序列（登录号为FJ217699）,与cDNA序列比对发现,该基因（SmTrxh）含有2个内含子。生物信息学分析表明,SmTrxh所编码蛋白的分子质量为13．4kDa,理论等电点为5．53,无信号肽,属于定位于细胞质中的稳定类蛋白。该蛋白与其他7种植物中的Trx高度同源,同源性介于68％-74％之间。实时定量PCR检测的结果显示,SmTrxh在丹参中为组成型表达基因,在根、茎和叶中都有表达,主要在根部表达,茎中的表达量最低。     

华中五昧子AFLP反应体系的建立

目的:建立一个适于华中五味子研究用的AFLP反应体系.方法:以华中五味子硅胶干燥嫩叶为试材,采用改良CTAB法提取到高质量DNA.通过琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳对Mse I/EcoR Ⅰ双酶切、连接、预扩增和选择性扩增过程中的关键因素进行分析.结果:双酶切6 h,片段主要集中在250～2 000bp;连接产物和预扩增产物最适稀释倍数均为10倍;预扩增产物经选择性引物E-ACF/M-CAT和E-ACA/M-CAG扩增,琼脂糖电泳检测其主带分别集中在250～375 bp和500～750 bp,6%聚丙烯酰胺凝胶电泳检测及银染,条带清晰可辨.结论:该体系具有稳定性高、重复性好等优点,可用于华中五味子AFLP分析.     

丹参DHN1基因的克隆与序列分析

丹参(Salvia miltiorrhiza Bge．)是一种重要的药用植物。以组织培养2～13w的丹参幼苗为材料,构建丹参cDNA库并进行大规模EST序列分析,所得序列经NCBI的BLAST工具分析,克隆号为rsmsxl-009377的序列与晚期胚胎丰富(Late Embryogenesis Abundant)基因家族Ⅱ中的成员有较高的同源性。根据其5’单向测序的结果设计引物“5'-GTGCGTAGACACATCGGTTC-3'”继续向3’测序,得到一个全长969bp的序列,序列分析发现该序列包含一个长690bp的开放阅读框(ORF),编码229个氨基酸,与NCBI注册的脱水素家族基因具有较高的同源性,且含有ⅡLEA蛋白的特征序列,表明本基因可能是一种新的脱水素基因,命名为DHN1,并住GENEBANK上进行了注册,序列号为：AY695932。     

银线草营养器官结构及主要成分的组织化学定位

采用植物解剖学和组织化学定位方法研究银线草营养器官的显微结构和萜类、黄酮类化合物在营养器官中的分布规律.结果表明:银线草的根皮层细胞排列整齐,细胞间隙较小,韧皮部狭窄;茎皮层细胞也排列整齐,在韧皮部外方包围有多层束状纤维;叶为异面叶,栅栏组织和海绵组织分化明显,叶片上、下表皮均无毛被,气孔器多为不规则型.组织化学定位结果显示萜类和黄酮类化合物分布在根的皮层、茎的皮层和韧皮部细胞中.     

秦艽香叶醇-10羟化酶（G 10H）基因的克隆及序列分析

香叶醇-10羟化酶(geraniol 10-hydroxylase, G10H)是中药秦艽中龙胆苦苷等环烯醚萜苷类成分合成途径的限速酶。本研究克隆了秦艽G 10H基因,并对其基因及编码蛋白序列的特征进行了生物信息学分析,结果显示：秦艽G 10H基因包含一个完整的长1491 bp的ORF框,编码496个氨基酸;GmG10H与长春花、川西樟牙菜等植物G10H蛋白具有很高的同源性(逸69%),无跨膜结构域、信号肽等结构,可能定位于细胞质中。定量PCR结果显示,GmG10H主要在秦艽的花和根中进行表达。     

丹参抗性基因SmORA1的克隆及诱导表达分析

该研究采用PCR方法从丹参中克隆出一条乙烯应答因子结合蛋白(ERF)转录因子编码基因,命名为SmORA1,GenBank登录号为KT359598。经分析发现该基因全长648bp,不包含内含子,编码206个氨基酸残基。编码蛋白SmORA1含有典型的AP2结合结构域。表达分析结果表明,SmORA1主要在丹参根中表达,且该基因的表达明显受到茉莉酸甲酯(MeJA)、脱落酸(ABA)、乙烯(ET)、机械创伤和病原菌等逆境信号的诱导,但低温和脱水情况下SmORA1表达下调。研究表明,SmORA1参与丹参生物胁迫反应,可整合JA、ABA、ET和病原菌等胁迫信号途径。     

HPLC法测定九节菖蒲中琥珀酸含量

目的:建立九节菖蒲中琥珀酸含量的HPLC测定法。方法:采用Kromasil C18色谱柱(150 mm×4.6 mm,5μm);甲醇-0.02mol/L KH2PO4缓冲液(7:93)(pH 2.5)为流动相;流速0.5 mL/min;柱温为30℃;检测波长为214 nm。结果:琥珀酸在4～48μg范围内具有良好的线性关系,平均加样回收率为99.15%。九节菖蒲样品中的琥珀酸含量,以干燥品计为0.200%～0.318%。结论:该方法可行,重复性好,可用于九节菖蒲中琥珀酸含量的测定。     

不同采收期连翘叶中连翘苷、连翘酯苷和芦丁的含量测定

采用HPLC法测定不同采收期的连翘叶中连翘苷、连翘酯苷和芦丁的含量,综合比较各指标用以评价连翘叶的质量及其最佳的采收期。结果显示：连翘苷以5月份含量最高;连翘酯苷和芦丁以6月份含量最高,连翘叶以5、6月份采收为最佳。     

不同产地山茱萸种子中油脂含量及脂肪酸组成分析

山茱萸( Cornus officinalis Sieb. et Zucc.)为山茱萸科( Cornaceae)山茱萸属( Cornus Linn.)的多年生木本植物[1],主要产自中国的陕西、河南和浙江等地,在四川、安徽和山东等地亦有栽培[2]。山茱萸是世界三大名贵木本药材之一[3],临床上常以成熟果实去核后的果肉入药,而占山茱萸果实质量约80%的种子则被大量废弃。因此,对山茱萸种子资源的研究有利于提高山茱萸的综合利用价值。     

槐树组织细胞培养的研究

系统研究了槐树叶片、子叶及花药的培养方法和植株再生,获得了大量的试管苗,建立了槐树二倍体和单倍体植株快速繁殖的培养程序。实验表明在MS附加高浓度比值BA／IBA或2,4-D的培养基中可诱导各种外植体在短期内产生大量的不定芽和试管苗,但同时,又诱导产生了许多超度含水态苗。在培养过程中,BA浓度先高后低,既可获得大量的试管苗,又相对降低了超度含水态苗的比率,是槐树快速繁殖程序中的重要一环。组织学观察显示,槐树子叶切块培养中形成的胚状体来自于子叶的表皮及叶肉细胞,通过单细胞起源和多细胞出芽两种方式产生。