分子内二硫键对HERV囊膜蛋白融合核心结构的影响

合胞素(Syncytin)是一类由人俘获的逆转录病毒囊膜蛋白,与胎盘的形态发生中细胞滋养层到合胞滋养层的分化过程十分相关。Syncytin与人免疫缺陷病毒I型(HIV-1)囊膜蛋白(Env)在结构上具有相似的特点,二者可能具有相似的膜融合机制。本文通过PCR对融合核心部位七肽重复区HR1和HR2之间linker中自然存在的一对保守的分子内二硫键进行定点突变,表达纯化该突变蛋白,并进行了相应的结构及稳定性探讨,通过与未突变蛋白的性质比较确证该分子内二硫键在蛋白结构的正确形成及稳定性上起着一定的作用。     

特异切割马铃薯纺锤形块茎类病毒负链的多价核酶的构建和体外活性测定

根据锤头型核酶的作用模式 ,设计、合成并克隆了特异切割马铃薯纺锤形块茎类病毒 (PSTVd)负链RNA不同区域位点的双价和三价锤头型核酶基因。通过体外转录 ,将PSTVd负链RNA分别与双价和三价核酶混合 ,37℃温育 2h。结果表明 ,双价核酶和三价核酶均表现出较高的切割活性 ,其中双价核酶处理的切割产物的大小与理论值相符合。三价核酶虽表现出较高的切割活性 ,但只是其中一价核酶在起作用。讨论了二价和三价核酶的应用前景。     

人白细胞介素11融合蛋白切割位点的改变及成熟蛋白的纯化

将 h IL- 1 1 c DNA克隆入硫氧还蛋白基因融合表达载体 p TRXFUS的 trx A基因 3′末端 ,构建符合读码框的融合基因 ,并在两基因间改变原有的肠激酶切割位点 ,引入蛋白质的羟胺切割位点序列 ,该融合蛋白在大肠杆菌中表达量达 2 0 %以上 .经羟胺切割 ,柱层析等纯化步骤后 ,得到纯度98%以上的成熟 h IL - 1 1 .用 IL- 6依赖细胞株 7TDI及 MTT法测定生物学活性 ,比活达 8× 1 0 6 IU/mg.并对纯品进行了 Western blot,N端 1 5个氨基酸测序及 h IL- 1 1氨基酸组成等分析和鉴定     

利用转hpRNA基因水稻抗水稻矮缩病毒

具有发夹结构的双链RNA(hairpin RNA,hpRNA)能高效诱导转录后基因沉默的发生.以水稻(Oryza sativaL.)矮缩病毒(RDV)基因组中第八片段编码区128～754 bp的序列为臂构建hpRNA,并克隆到植物表达载体pROK-2上.通过农杆菌介导的方法转化水稻"中花11".Southern blot分析表明,共获得12株阳性转化体.用带有RDV的叶蝉(Nephotettix cincticeps)接种Tl代转hpRNA水稻,结果表明转基因水稻对RDV具有高抗性或表现为症状延迟.而相同序列的有义链的转基因水稻和空载体的转基因水稻表现为典型的RDV侵染症状.HpRNA在转基因水稻中对RDV高抗性发挥重要作用.     

利用聚乙二醇(PEG8000)纯化小球藻病毒FJ-1

为了提取小球藻病毒基因组DNA,探索利用3%～10%的PEG8000加3%～7%的NaCl沉淀病毒。其中以7%的PEG和4%的NaCl沉淀效果最好,但其沉淀效率较低。     

利用聚乙二醇(PEG8000)纯化小球藻病毒FJ-1

为了提取小球藻病毒基因组ＤＮＡ,探索利用３％￣１０％的ＰＥＧ８０００加３％￣７％的ＮａＣｌ沉淀病毒。其中以７％的ＰＥＧ和４％的ＮａＣｌ沉淀效果最好,但其沉淀效率较低。     

基于三代测序的食蟹猴Mafa-B等位基因共表达与进化分析

【背景】主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex,MHC)的多态性在很大程度上会影响生物医学实验的结果,而且特定的MHC-B等位基因与多种疾病的发展进程密切相关。食蟹猴(Macaca fascicularis,Mafa)是一种开展生物医学研究的重要实验动物,与人类相比,目前尚缺乏对食蟹猴Mafa-B等位基因的综合表征。【目的】获得全面的食蟹猴Mafa-B等位基因信息,鉴定Mafa-B等位基因共表达与进化关系。【方法】基于三代测序获得的食蟹猴MHC-B基因组信息,设计特异性引物扩增33只越南食蟹猴群体中的Mafa-B序列,并结合多种生物信息学方法进行分析。【结果】基于92个Mafa-B等位基因信息,鉴定了65个新的Mafa-B等位基因。其中,8个Mafa-B等位基因与其他地理来源的食蟹猴群体中已报道的序列相同,32个Mafa-B等位基因与其他猕猴物种中已报道的序列相同。此外,鉴定了7个高频Mafa-B谱系和7对共表达的Mafa-B等位基因,并检测到了一个潜在的重组事件。进化分析表明不同地理来源的食蟹猴群体Mafa-B序列具有很高的相似性。【结论】越南食蟹猴群体中共表达的Mafa-B等位基因经历了某些抗原的选择,不同地理来源的食蟹猴群体可能微调其Mafa-B序列以适应病原体的选择压力,本文为食蟹猴MHC遗传背景研究奠定了基础。     

含有拟病毒RNA的绒毛烟草斑驳病毒在克里夫兰烟原生质体内的增殖

利用酶联免疫吸附分析(ELISA)的双抗体夹心法和未标记免疫过氧化物酶法(PAP),研究了含有拟病毒RNA (Virusoid RNA)的绒毛烟草斑驳病毒(Velvet tobacco mottle virus,VTMoV)侵染克里夫兰烟(Nicotiana elevelandii A. Gray)原生质体的最适条件以及病毒在原生质体内增殖的一步生长曲线,建立了一种适宜VTMoV增殖的原生质体细胞体系。     

酵母校正tRNA的提取及其对番茄花叶病毒增殖的抑制作用

从酵母(Saccharamyces cerevisiae SUP-6-1温度突变株,含SUPt RNATyr,SUFtRNAleo,SUPtRNAHis)和菠菜提取了总tRNA,经过BD-纤维素柱层析,得到部份纯化的amber终止密码校正tRNA,它们在兔网织细胞裂解液翻译体系中能促进番茄花叶病毒(ToMV)RNA183k抄读蛋白的合成。研究了酵母SUP6-l校正tRNA对ToMV在烟草中增殖的影响。在用酵母SUP6-l校正tRNA处理的植株顶部新生叶中病毒滴度接种3、5、11、15和20天后,分别是对照的3％、12％、3 8％、42％和67％。用校正tRNA处理的烟草植株中层叶片,在接种后11—20天明显低于对照。下层接种叶中的病毒滴度无显著差异。讨论了校正tRNA对ToMV增殖抑制的机理。     

3-氰基吡啶水合酶的纯化及性质

马红球菌(Rhodococcus equi)SHB-121胞内3-氰基吡啶水合酶经硫酸铵分级沉淀、DEAE-cellulose DE52和羟基磷灰石柱层析并经过Sephadex G-25处理,得到了聚丙烯酰胺凝胶电泳均一的3-氰基吡啶水合酶,纯化了31倍。该酶由一条肽链组成,其分子量为30kD,等电点为4.1。3-氰基吡啶水合酶能催化3-氰基吡啶水合生成尼克酰胺。酶反应最适pH为8.0,最适温度为30℃。Ag~+、Hg~(2+)、Cu~(2+)及NH_4~+对酶活力有强烈抑制作用。当以3-氰基吡啶为底物时,其K_m为0.1mol/L。NaCN为该酶反竞争性抑制剂,其K_I为5mmol/L。