鹅源新城疫病毒ZJI株基因组cDNA克隆的序列修饰*

将鹅源新城疫病毒ZJI株全基因组cDNA克隆通过酶切切下包含T7启动子区域和转录载体的片段,将其自身环化后获得约6.5kb的质粒。设计引物,利用基因定点突变技术,在此质粒上T7启动子与NDV Leader序列之间突变插入额外的3个G碱基,将此突变最终引入到原基因组cDNA克隆中。应用RT-PCR技术从尿囊液中扩增NDV基因组F/HN基因区域部分片段,利用限制性内切酶BsmB I将扩增片段连接,最终将原cDNA克隆中相应片段替换下。测序结果表明,原基因组cDNA克隆中特定位置碱基     

正交试验优化青防肿痛外敷散纯化工艺

目的:优选青防肿痛外敷散最佳纯化工艺。方法:以干膏率、青藤碱及粉防己碱转移率为指标,设置综合评分。单因素考察筛选直接沉淀法和水沉淀法,正交试验法优选水沉淀法中最佳相对密度、放置时间和加水倍量,将水沉淀法和直接沉淀法及纯化前试验数据对比,并将最佳纯化工艺做三批重复性验证试验。结果:水沉淀法最佳工艺为将滤液减压浓缩至相对密度为1.10~1.15(70℃)的稠膏,稠膏加7倍量的水搅匀,放置48 h。单因素试验结果证明水沉淀法优于直接沉淀法。重复性试验验证结果证明工艺稳定可靠。结论:此纯化工艺可在保留活性成分的同时,有效的去除杂质,最大程度减少使用剂量,为后期制剂成型和中试放大生产研究奠定了良好基础。     

鹅源新城疫病毒ZJI株基因组cDNA克隆的序列修饰

将鹅源新城疫病毒ZJI株全基因组cDNA克隆通过酶切切下包含T7启动子区域和转录载体的片段,将其自身环化后获得约6．5kb的质粒。设计引物,利用基因定点突变技术,在此质粒上T7启动子与NDV Leader序列之间突变插入额外的3个G碱基,将此突变最终引入到原基因组cDNA克隆中。应用RT—PCR技术从尿囊液中扩增NDV基因组F／HN基因区域部分片段,利用限制性内切酶BsmBI将扩增片段连接,最终将原cDNA克隆中相应片段替换下。测序结果表明,原基因组cDNA克隆中特定位置碱基插入突变成功,F／HN基因区域碱基突变均得以纠正。以上cDNA克隆的修饰与替换为该毒株的反向遗传研究打下了基础。