H5亚型禽流感重组鸡痘病毒活载体疫苗的构建及其遗传稳定性与免疫效力

以鹅源H5亚型禽流感病毒(AIV)基因组为模板,用RTPCR扩增血凝素（Hemagglutinin, HA）基因,克隆入鸡痘病毒表达载体pFG1175,转染鸡痘病毒感染的鸡胚成纤维细胞,通过蓝斑筛选和间接免疫荧光检测,获得表达HA基因的重组鸡痘病毒（Recombinant fowlpox virus, rFPVHA）。rFPVHA经鸡胚成纤维细胞连续传15代后,报告基因LacZ和HA基因可稳定表达。用103PFU和105PFU的rFPVHA免疫无特定病原体的(Specific pathogen free, SPF)鸡,免疫后22d 血凝抑制(Hemagglutinin inhibition,HI)抗体监测阳性率分别为0%和20%,但均抵御了H5亚型毒株的致死性攻击,保护率为100%。结果表明,构建了表达HA基因的重组鸡痘病毒,该重组病毒具有良好遗传稳定性,免疫鸡可提供完全保护,显示出了一定的应用前景。     

个体化心脏运动康复训练联合简式太极训练对稳定性慢性心力衰竭患者心肺功能、心理状态和生活质量的影响

摘要 目的：观察稳定性慢性心力衰竭（CHF）患者经简式太极训练联合个体化心脏运动康复训练后,患者心理状态、心肺功能和生活质量的变化情况。方法：选取2019年7月~2021年4月在我院接受治疗的102例稳定性CHF患者。根据随机数字表法分为对照组（常规治疗的基础上开展个体化心脏运动康复训练）和观察组（对照组的基础上增加简式太极训练）,各为51例。对比干预前后两组心肺功能、生活质量和心理状态。结果：干预后,两组峰值摄氧量(VO₂peak)、峰值心率升高,二氧化碳通气当量斜率(VE/VCO₂slope)下降（P<0.05）;观察组干预后VE/VCO₂slope低于对照组,峰值心率、VO₂peak高于对照组（P<0.05）。干预后,两组焦虑自评量表（SAS）、抑郁自评量表（SDS）评分下降（P<0.05）;观察组干预后SAS、SDS评分低于对照组（P<0.05）。干预后,两组症状、心理情绪、体力受限、社会受限评分及总分下降（P<0.05）;干预后观察组体力受限、心理情绪、社会受限、症状评分及总分较对照组低（P<0.05）。结论：个体化心脏运动康复训练联合简式太极训练可促进稳定性CHF患者心肺功能和心理状态改善,进而提高患者生活质量。     

人羊膜间充质干细胞的生物学特性及临床前研究

近年来随着对间充质干细胞功能特性的深入研究,间充质干细胞已经成为细胞替代治疗的研究热点。而人羊膜间充质干细胞(human amniotic mesenchymal stem cell,hAMSC),除与时下研究热、应用广的骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cell,BM-MSC)一样具有多向分化潜能、免疫调节、造血支持等特性外,还具有来源广泛、取材方便、无伦理限制、细胞增殖能力强等优势。多项研究还证明,hAMSC移植免疫排斥少,成功率高,在各种组织器官中存活率高,存活时间长。以上诸多优势,使得其在细胞替代治疗和再生医学研究领域备受关注。     

一种新型海洋纤溶酶的分离纯化与性质鉴定(英文)

单环刺螠生活在近海泥沙地区的潮间带和低潮带,自1940年分类后曾归属于螠虫动物门,但是现在越来越认为它是多毛纲环节动物的一个分支。系统研究表明,单环刺螠的体腔液和内脏中含有高活性的溶栓物质,并从这两种组织中通过离心、过滤、硫酸铵盐析、超滤、Q.Sepharose Fast Flow、Sephadex G-75、Sephacry S-100等步骤分离到了一种纤溶酶UFE,SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳测得分子量为10.38kDa.利用尿激酶和PBS作对照的功能研究表明,UFE主要是直接降解纤维蛋白,但也表现部分激酶活性,这跟来自环节动物蚯蚓的蚓激酶一样,靠将纤维蛋白溶酶原转化为纤维蛋白溶酶降解纤维蛋白。研究表明,UFE是一种免疫原性小、纤溶能力强的具有潜在应用价值的溶栓剂。     

新城疫病毒ZJ1株F蛋白裂解位点突变对其融合活性的影响

新城疫病毒ZJ1毒株是近年来在我国水禽中流行并能引起水禽严重发病和死亡的强毒株,其F蛋白裂解位点有多个碱性氨基酸分布。将该毒株F蛋白裂解位点的112、115和117位碱性氨基酸突变成弱毒株特征的非碱性氨基酸,构建了重组表达质粒pCI-FT。分别将突变前后的F蛋白与该毒株的HN蛋白在COS-1细胞共表达,表明突变前后的F蛋白均有融合活性;分别将突变前后的F蛋白与该毒株的HN蛋白在CEF细胞共表达,表明突变后F蛋白被裂解的活性大大降低。以上研究为下一步在全长cDNA克隆水平上对F蛋白裂解位点氨基酸序列进行相应突变,研究毒力相关因素以及构建毒力致弱疫苗株等奠定基础。     

龟的影像学和血液学研究

龟鳖以颈和四肢的伸缩运动而产生呼吸，先呼气，后吸气，这种特殊的呼吸方式叫做“咽气式”呼吸，简称龟吸。应用现代先进的医疗诊断技术，对１只缅甸陆龟进行螺旋ＣＴ、ＭＲＩ和ＭＲＡ检查，发现龟背甲下方左右各有一个大气囊，腹甲上面的软组织有胸主血管和腹主血管。影像学研究和解剖对比分析，发现龟肺发育不良是咽气式龟吸的基础，不健全的龟肺决定了龟的新陈代谢必然缓慢。对龟的血液成分进行定性定量测定，发现龟的红细胞大而     

三种不同手术方案对子宫内膜异位囊肿伴不孕症患者卵巢功能的影响

目的:观察和比较开腹剥除术、腹腔镜剥除术及超声引导穿刺术对子宫内膜异位囊肿伴不孕症患者卵巢功能的影响。方法:选取2011年1月-2013年6月我院收治的子宫内膜异位囊肿伴不孕症患者168例,根据患者手术治疗方案分为A、B、C三组,A组患者应用开腹剥除术,B组患者行腹腔镜剥除术,C组给予超声引导穿刺术治疗,对比三组患者手术前后促卵泡成熟激素(FSH)、黄体生成激素(LH)、雌二醇(E2)及窦卵泡数目(AFC)等卵巢储备功能指标水平的变化、临床妊娠数、流产情况及术后复发率。结果:治疗后,三组患者AFC数量均较治疗前显著下降(P0.05),且C组AFC显著高于B、A两组(P0.05);三组患者治疗后血清FSH、E2、FSH/LH水平均较治疗前显著提高,A组血清FSH、E2、FSH/LH水平明显高于B、C组,而C组血清FSH、E2、FSH/LH水平明显高于B组(P0.05)。术后1、2、3年,A组妊娠率均显著低于B、C组(P0.05),且自然流产率显著高于B、C两组(P0.05),而B、C组妊娠率和自然流产率相比差异均无统计学意义(P0.05)。结论:应用超声引导穿刺术及腹腔镜剥除术治疗子宫内膜异位囊肿伴不孕症患者对其卵巢储备功能影响均较小,且妊娠情况较好,临床可根据患者情况选择恰当手术方式,以提高治疗效果。     

再生胰腺提取物诱导人羊膜间充质干细胞定向分化为胰岛素分泌细胞

利用天然生物诱导剂大鼠再生胰腺提取物(Rgenerating pancreatic extract,RPE)定向诱导人羊膜间充质干细胞(Human amniotic mesenchymal stem cells,hAMSCs)向胰岛素分泌细胞分化。切除大鼠60%胰腺刺激胰腺再生,而后制备RPE,以终浓度为20 mg/L的RPE诱导hAMSCs。实验通过形态学鉴定、双硫腙染色、免疫荧光分析、RT-PCR基因检测和高糖刺激胰岛素分泌等实验鉴定细胞诱导结果。实验结果显示P3代hAMSCs经RPE诱导后形态变化明显,诱导15 d后细胞呈簇状生长,经双硫腙染色可见棕红色细胞团;免疫荧光染色结果显示诱导细胞呈胰岛素阳性表达;RT-PCR实验证明诱导细胞阳性表达人胰岛相关基因Pdx1和insulin;高糖刺激实验证明培养液中有胰岛素成分产生,且分泌量随刺激时间的延长先增加而后趋于稳定。实验结果表明hAMSCs在体外经RPE诱导可以分化为胰岛素分泌细胞。     

鹅源新城疫病毒ZJI株基因组cDNA克隆的序列修饰*

将鹅源新城疫病毒ZJI株全基因组cDNA克隆通过酶切切下包含T7启动子区域和转录载体的片段,将其自身环化后获得约6.5kb的质粒。设计引物,利用基因定点突变技术,在此质粒上T7启动子与NDV Leader序列之间突变插入额外的3个G碱基,将此突变最终引入到原基因组cDNA克隆中。应用RT-PCR技术从尿囊液中扩增NDV基因组F/HN基因区域部分片段,利用限制性内切酶BsmB I将扩增片段连接,最终将原cDNA克隆中相应片段替换下。测序结果表明,原基因组cDNA克隆中特定位置碱基     

新城疫病毒ZJ1株F蛋白裂解位点突变对其融合活性的影响*

新城疫病毒ZJ1毒株是近年来在我国水禽中流行并能引起水禽严重发病和死亡的强毒株,其F蛋白裂解位点有多个碱性氨基酸分布。将该毒株F蛋白裂解位点的112、115和117位碱性氨基酸突变成弱毒株特征的非碱性氨基酸,构建了重组表达质粒pCI-FT。分别将突变前后的F蛋白与该毒株的HN蛋白在COS-1细胞共表达,表明突变前后的F蛋白均有融合活性;分别将突变前后的F蛋白与该毒株的HN蛋白在CEF细胞共表达,表明突变后F蛋白被裂解的活性大大降低。以上研究为下一步在全长cDNA克隆水平上对F蛋白裂解位点氨基酸序列进行相应