番茄潜叶蛾卵黄原蛋白受体基因TaVgR在生殖发育调控中的作用

【目的】本研究旨在明确卵黄原蛋白受体(vitellogenin receptor, VgR)在番茄潜叶蛾Tutaabsoluta生殖发育过程中的功能,为潜叶类害虫的绿色防控提供候选靶标。【方法】基于番茄潜叶蛾转录组数据,采用RT-PCR扩增TaVgR基因cDNA全序列,并进行生物信息分析;通过RT-qPCR分析TaVgR在番茄潜叶蛾不同发育阶段(1-4龄幼虫、1-7日龄雌蛹和雌成虫)和雌成虫不同组织(头、体壁、前肠、中肠、后肠、卵巢、脂肪体和马氏管)中的表达模式;进一步利用RNAi抑制番茄潜叶蛾雌蛹体内TaVgR的表达,并观测沉默TaVgR基因后番茄潜叶蛾卵巢发育及繁殖力的变化。【结果】克隆获得番茄潜叶蛾TaVgRcDNA(GenBank登录号: MZ682118)序列,其开放阅读框序列长5 496 bp,编码1 831个氨基酸,推测的蛋白分子量约为206 kD,等电点为5.17,信号肽包含N-端前18个氨基酸残基,并具有典型LDLR家族蛋白保守功能域。RT-qPCR结果显示,TaVgR转录水平随着番茄潜叶蛾龄期的增加逐渐上升,雌成虫羽化后达到最高水平;TaVgR在番茄潜叶蛾雌成虫的卵巢中表达量最高。TaVgR RNAi对初期雌蛹中TaVgR的表达抑制率为62.04%~72.55%,导致卵黄蛋白在卵巢中的沉积受阻,卵巢管和卵粒长度缩短,成虫10日单雌总产卵量及后代卵孵化率降低,最终引起番茄潜叶蛾繁殖力下降。【结论】TaVgR基因在番茄潜叶蛾雌成虫和卵巢中高表达,且沉默该基因严重阻碍其卵巢发育和降低繁殖力。本研究为开发以VgR基因作为靶标的鳞翅目害虫防治新技术奠定了理论基础。     

棉铃虫雌雄性腺转录组的比较分析

【目的】棉铃虫Helicoverpa armigera(Hübner)是我国重要的农业害虫,生殖力强是其发生为害的内在生物学基础,而已知的与棉铃虫生殖相关的基因信息相对较少,本研究旨在筛选棉铃虫性腺发育的相关基因。【方法】通过高通量测序技术对棉铃虫成虫的卵巢和精巢进行转录组测序。【结果】共获得100 603条unigenes,平均长度为666.05 bp,其中N50为1 114 bp。经同源性比对,52 071条unigenes获得注释信息,其中注释到Nr数据库的序列最多。通过比较转录组分析发现,在棉铃虫精巢和卵巢中存在7 714个差异表达的基因（Differentially expressed genes,DEGs）,其中3 288个DEGs表达水平在卵巢中上调,4 426个DEGs在精巢中上调。差异基因富集结果涉及到生殖系统发育的相关通路有mTOR信号通路、卵母细胞减数分裂、促性腺激素释放激素信号通路和胰岛素信号通路等。同时筛选得到部分与性腺发育相关的基因,包括vitellogenin(Vg)、vitellogeninreceptor(Vg R)、chorion-relatedgene、testis-specific serine/threonine-protein kinase和spermatogenesis-associated protein等。选取其中12个DEGs用实时荧光定量检测其表达量,结果表明RT-qPCR与RNA-Seq的结果一致。【结论】本研究获得了棉铃虫雌雄性腺的转录组数据及主要性腺发育相关基因,将有助于丰富棉铃虫繁殖相关的基因资源,为进一步研究棉铃虫生殖调控机理提供基础数据。     

血清瘦素、鸢尾素、SHBG、AQP8与PCOS不孕症接受IVF-ET患者激素水平和妊娠结局的关系研究

摘要 目的：研究血清瘦素、鸢尾素、性激素结合球蛋白（SHBG）、水通道蛋白8（AQP8）与多囊卵巢综合征（PCOS）不孕症接受体外受精-胚胎移植（IVF-ET）患者性激素水平和妊娠结局的关系。方法：选取2020年1月～2022年1月我院收治的293例接受IVF-ET的PCOS不孕症患者,根据是否临床妊娠成功将其分为临床妊娠失败组（n=118）和临床妊娠成功组（n=175）。收集患者临床资料,检测血清瘦素、鸢尾素、SHBG、AQP8水平。Pearson相关系数分析PCOS患者不孕症血清瘦素、鸢尾素、SHBG、AQP8水平与性激素水平的相关性,多因素Logistic回归分析PCOS不孕症接受IVF-ET患者妊娠结局影响因素,受试者工作特征（ROC）曲线分析血清瘦素、鸢尾素、SHBG、AQP8水平单独及联合预测PCOS不孕症接受IVF-ET患者临床妊娠失败的价值。结果：与临床妊娠成功组比较,临床妊娠失败组促卵泡生成素（FSH）、促性腺激素（Gn）用量、获卵数、受精率、优胚率、SHBG水平降低,黄体生成素（LH）、LH/FSH、睾酮（T）、胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）、瘦素、鸢尾素、AQP8水平升高。Pearson相关系数显示,PCOS不孕症患者血清瘦素、鸢尾素、AQP8与FSH水平呈负相关,与LH、LH/FSH、T水平呈正相关（P均＜0.05）;SHBG与FSH水平呈正相关,与LH、LH/FSH、T水平呈负相关（P均＜0.05）。多因素Logistic回归分析显示,LH/FSH、T、HOMA-IR、瘦素、鸢尾素、AQP8为PCOS不孕症接受IVF-ET患者临床妊娠失败的危险因素,优胚率、SHBG为保护因素（P均＜0.05）。ROC曲线显示,血清瘦素、鸢尾素、SHBG、AQP8水平联合预测PCOS不孕症接受IVF-ET患者临床妊娠失败的曲线下面积（AUC）大于各指标单独预测。结论：血清瘦素、鸢尾素、SHBG、AQP8水平与PCOS不孕症接受IVF-ET患者FSH、LH、LH/FSH、T水平和临床妊娠失败相关,有助于预测PCOS不孕症患者妊娠结局。     

雌激素与丹栀逍遥丸对更年期女性生殖内分泌系统及免疫功能的调节作用

目的:探究雌激素联合丹栀逍遥胶囊对更年期综合征妇女生殖内分泌系统及免疫功能的调节作用。方法:选取2014年5月至2014年9月我院收治的女性更年期综合症患者60例并将其随机分为两组,其中对照组给予雌激素替代等临床常规疗法;实验组在雌激素替代治疗基础上加用丹栀逍遥胶囊联合治疗。观察并比较两组患者生殖内分泌激素(E2、FSH、LH)水平、T淋巴细胞亚群(CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+)比例以及IL-2活性的变化。结果:治疗后,两组血清E2、CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平及IL-2活性均较治疗前显著升高,而FSH、LH水平均明显低于治疗前,且实验组治疗后E2、CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平及IL-2活性显著高于对照组,FSH、LH水平均明显低于对照组,差异均有统计学意义(P0.05)。结论:雌激素联合丹栀逍遥胶囊能更加有效调节女性更年期综合征患者生殖内分泌激素水平,提高免疫功能,值得临床推广。     

阿托伐他汀钙片治疗急性冠脉综合征的临床疗效

目的:探讨阿托伐他片汀治疗急性冠脉综合征(ACS)的临床疗效。方法:选择2013年3月至2013年12月我院收治的156例ACS患者,按随机字数表法分为实验组和对照组各78例,两组均采取常规治疗,实验组在此基础上加用阿托伐他汀钙片,对照组则用辛伐他汀滴丸。对比两组治疗效果及心血管事件发生率。结果:两组治疗后总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、血清高敏C反应蛋白(hs-CRP)、纤维蛋白原(Fg)和尿酸水平均明显下降,且实验组下降更明显,比较差异均有统计学意义(P0.05);治疗期间实验组心血管事件发生率率为8.97%(7/78),显著低于对照组的24.36%(19/78),比较差异均有统计学意义(P0.05)。结论:阿托伐他汀片治疗ACS的临床效果优于辛伐他汀滴丸,能有效降低心血管事件的发生,值得的临床推广。     

不同低氧时间对SD大鼠颏舌肌肌纤维类型的影响

目的:观察不同低氧时间大鼠颏舌肌肌纤维类型的变化。方法:建立低氧模型,血气分析证实模型成功建立。在低氧不同时间点分别取低氧组和正常组雄性SD大鼠颏舌肌进行HE染色,肌球蛋白ATP酶组织化学染色和RT-PCR检测肌纤维类型的变化。结果:血气分析结果证实低氧组氧分压与血氧饱和度较对照组发生明显下降(P0.05)。低氧1周组、2周组、3周组、4周组较正常组氧分压下降至55.04±2.31 mm Hg,52.69±1.51 mm Hg,49.80±1.39 mm Hg,50.11±3.02 mm Hg(P0.05);血氧饱和度下降至77.51±1.81%,70.13±2.90%,74.20±1.95%,74.97±2.36%(P0.05)。HE染色和肌球蛋白ATP酶组织化学染色法显示低氧2、3、4周组Ⅱ型肌纤维所占比例较相应正常组依次升高:45.92±1.8%,57.44±2.1%,56.89±2.6%,在第三周时达到顶峰(P0.05)。RT-PCR结果也同样验证了这一规律。结论:随着低氧活动的进行,颏舌肌肌纤维类型发生有规律的转化,从而影响着肌肉的功能。     

小鼠卵巢几个重要发育事件的初步研究

选定多个阶段小鼠卵巢进行切片染色和生殖细胞计数统计等分析,以发现该阶段小鼠卵巢的发育特点。结果显示在胚胎发育第12.5 d的生殖嵴中,大部分的生殖细胞正进行有丝分裂增殖,并以生殖包囊的形式存在;在出生后第2 d的小鼠卵巢中,有大量紧密接触的原始卵泡,表明生殖包囊刚完成重组形成原始卵泡;在第5 d的小鼠卵巢中,原始卵泡仍占有大部分比例,但也有大量的初级卵泡处于发育之中;在出生后第10 d的卵巢中同时有原始卵泡、初级卵泡和次级卵泡的发育;老年小鼠(16个月大)卵巢中已基本没有卵母细胞。     

环介导逆转录等温扩增技术检测中东呼吸综合征冠状病毒基因

建立了基于浊度仪和羟基萘酚蓝(Hydroxy naphthol blue,HNB)颜色变化的简单、快速和灵敏的环介导逆转录等温扩增技术(RT-LAMP)检测方法,应用于中东呼吸综合征冠状病毒(Middle East respiratory syndrome coronavirus,MERS-CoV)的检测。针对MERS-CoV的核衣壳蛋白基因(Nucleocapsid,N)设计6条特异引物,在等温条件下(63℃)进行60min扩增反应。通过实时浊度仪记录扩增曲线和扩增前在反应体系中加入HNB观察颜色变化两种方式进行检测结果判定。本文对不同人类冠状病毒及常见呼吸道病毒进行了特异性验证,对梯度稀释的体外转录MERS-CoV全N基因RNA进行了定量和检测限分析,同时与已发表的实时荧光定量PCR(rRT-PCR)进行比较。结果显示,本研究建立的RT-LAMP方法特异性高,对于每反应管103至106的拷贝数RNA,出峰时间与每反应管N基因RNA拷贝数对数值有稳定的线性关系。基于浊度仪和颜色判定的RT-LAMP检测方法检测限分别为500拷贝和1 000拷贝。因此,该方法有望应用于MERS-CoV感染的快速筛选,具有在基层医疗卫生机构和现场推广和应用的潜力。     

利用与PKD1紧密连锁的微卫星多态性对黑龙江省汉族人群进行ADPKD的症前诊断

目的：利用与PKD1紧密连锁的微卫星的多态性对黑龙江省汉族人群常染色体显性遗传性多裳肾病（autosomal dominant polycystic diseaseADPKD）家系成员进行症状前诊断。方法：扩增PKD1基因内部（KG8）及基因两侧（AC2．5、CW4）共三个微卫星遗传标记,并采用聚丙烯酰胺凝胶电泳进行检测,银染,最后进行家系连锁分析。结果：家系1中一名男孩携带了PKD1突变基因,处于发病前期。结论：通过连锁分析ADPKD进行连锁分析能高效、快捷、准确地进行早期诊断.     

儿童与成人阻塞型睡眠呼吸暂停低通气综合征代谢异常特征的比较

目的：探讨儿童及成人阻塞型睡眠呼吸暂停低通气综合症（OSAHS）发病原因、睡眠呼吸紊乱严重程度及合并代谢异常程度的差别。方法：对我院2003年1月1日至20]0年7月1日71例诊断为OSAHS住院患者进行回顾性调查,登记年龄、性男日、发病原因、血压、白细胞计数、中性粒细胞比率、淋巴细胞比率、呼吸暂停低通气指数（AHI）、夜间最低血氧饱和度、微觉醒指数。根据年龄进行分组,年龄〈18岁者为A组,年龄≥18岁者为B组。比较两组发病原因、睡眠呼吸紊乱及合并代谢异常程度的差剐。结果：1．A组慢性扁桃体炎和（或）腺样体肥大发生率明显高于B组（P〈O．01）,鼻中隔偏曲发生率明显低于B组（P〈0．01）。2．与B组比较,A组AHI及微觉醒指数降低,夜间最低血氧饱和度升高（P〈0．01）;3．与B组比较,A组高血压、中性粒细胞比率、谷丙转氨酶比例降低（P〈0．05）。结论：A组睡眠呼吸紊乱程度及代谢异常较B组程度轻,更需关注成人阻塞型睡眠呼吸暂停低通气综合症的综合治疗。