脂多糖诱导肝细胞HepG2释放HMGB-1的研究

观察小剂量LPS(lipopolysaccharide)刺激下非坏死HepG2细胞是否存在HMGB1(high mobility group box-1 protein)移位及释放.以终浓度为100μg/L的LPS作用HepG2和RAW264.7细胞0、4、8、12、16、20、24h.LPS作用16~24h,HepG2和RAW264.7细胞培养上清中均可以检测到明显的HMGB1,与对照组差别有显著性(P<0.05).而MTT法和上清中LDH(lactate dehydrogenase)含量测定显示,LPS处理24h的HepG2存活率仍然非常高.免疫荧光观察到HMGB1的释放伴随着其从细胞核向胞浆的移位.由此可见,经LPS诱导,非坏死状态的HepG2细胞可发生HMGB1的移位及释放.     

抑制性寡脱氧核苷酸对实验性肝损伤细胞因子的影响

探讨抑制性寡脱氧核苷酸（suppressive oligonucleotides,Sup ODN）对刀豆蛋白A（Con A））诱导的小鼠实验性肝损伤的保护作用．实验采用Balb／C小鼠40只,随机分4组．分别为生理盐水（NS）组、对照寡脱氧核苷酸（control oligonucleotides,Con ODN）组、环孢菌素A（cyclosporin A,CsA）组、Sup ODN组．Con A（20mg,kg）尾静脉注射Ba1b/C小鼠,2h时腹腔给药,给药8h时观察小鼠的血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）活性、死亡率;检测血清TNF-α、IFN-γ、TIL-4水平;RT-PCR检测肝组织TNF-α、IFN-γ mRNA的表达;并观察肝组织的病理改变．发现Sup ODN组与NS组、Con ODN组相比,ALT活性明显降低（P〈0．01）;与NS组、Con ODN组和CsA组比较,IFN-γ明显降低（P〈0．01）,IL-4明显升高（P〈0．01）,TIFN-γ mRNA表达亦显著减少：而且Sup ODN可明显减轻肝脏炎性细胞浸润和肝细胞坏死（P〈0．05）．实验表明Sup ODN对Con A小鼠实验性肝损伤有明显保护作用．     

鲤稚鱼耳石锶标记效果

对鲤稚鱼开展了不同浸泡浓度和不同标记时间梯度的SrCl₂·6H₂O暴露标记试验,以确认其耳石Sr标记的可行性及基本条件.首先,基于4个浓度(0、4、8、12 mg·L^-1)水平的SrCl₂·6H₂O溶液,浸泡标记2 d来筛选基本浸泡标记浓度.然后,在SrCl₂·6H₂O为8 mg·L^-1浓度下,基于5个浸泡时间(1、2、3、4、5 d)来筛选基本浸泡标记时间.电子探针分布分析结果显示:对照组(0 mg·L^-1)耳石Sr/Ca比值低且稳定,标记组均出现了高Sr/Ca比值区.对照组耳石剖面为均一的低Sr蓝色图谱,而标记组耳石上均有高Sr红色标记环带,且标记成功率为100%.试验期间,标记组和对照组的死亡率、平均全长和平均体质量无显著差异,表明Sr标记对供试鱼无不良影响.由于耳石上清晰、完整的高Sr红色标记环带出现在标记浓度为8 mg·L^-1及以上,标记时间为2 d及以上,故建议分别选择8 mg·L^-1和2 d为基本浸泡标记浓度和基本浸泡标记时间.本研究证实耳石Sr标记技术对鲤稚鱼具有很好的可行性.     

可溶性GST-rh TRAIL55-281最佳表达条件及凋亡活性研究

将本室构建的重组质粒pGEX-5X-TRAIL55-281转入大肠杆菌JM109和HB101中,鉴定后诱导表达,然后针对培养温度、培养时间及诱导剂IPTG浓度设立梯度试验,发现重组质粒pGEX-5X-TRAIL在JM109与HB101中的表达情况相近,可溶性的人GST-rh TRAIL55-281最佳表达条件为26℃,0.06 mmol/L IPTG,200 r/min.利用亲和层析法纯化出大量可溶性GST-rh TRAIL55-281后,通过Western Blot及流式细胞仪检测发现GST-rh TRAIL55-281有较好的免疫学活性与生物学活性.为今后TRAIL作为抗肿瘤药物的开发做必要的准备.     

H9c2心肌细胞多巴胺受体的表达

为明确H9c2心肌细胞是否能够表达多巴胺受体（dopamine receptor,DR）,应用RT-PCR和Westernblot-ting分别检测H9c2心肌细胞和SD成年雌鼠左心室心肌组织中,DR的两种亚型,D1DR和D4DR的表达.结果发现,H9c2心肌细胞可在mRNA和蛋白水平上表达出与SD大鼠心肌组织相同的产物.这说明能以H9c2心肌细胞为研究材料,进一步深入研究心肌D1DR和D4DR基因的表达调控机制以及心肌DR的功能.     

人sTNFR1基因的克隆以及在NIH3T3细胞中的稳定表达

以He1a细胞的总RNA为模板,用RT—PCR方法扩增sTNFR1全编码区基因片段,构建含有目的片段的T载体克隆及真核表达载体pcDNA3．1（-）重组质粒亚克隆,将重组质粒和脂质体共同转染NIH3T3细胞系,G418筛选稳定转染细胞株．经核苷酸序列测序和酶切鉴定,成功构建了pcDNA3．1（-）-sTNFR1真核表达质粒,脂质体法建立了高效表达sTNFRI的稳定转染细胞系,并经RT—PCR和Western Blotting鉴定．人sTNFR1基因能在NIH3T3细胞系中稳定表达,为今后的研究打下了基础．     

乙肝病毒X基因真核表达质粒及细胞模型的建立

采用聚合酶链反应（PCR）方法扩增HBVX基因,定向亚克隆入真核表达载体pRc／CMV2．构建重组质粒pCMV／X;采用脂质体法转染QSG7701细胞,筛选阳性细胞克隆;RT—PCR法检测HBV XmRNA的表达情况．Western blotting法鉴定HBx蛋白的表达,结果表明,构建的真核重组表达质粒pCMV／X中包含有完整的HBVX基因片断,pCMV／工转染的QSG7701细胞中有HBVXmRNA及HBx蛋白的稳定表达．成功建立了HBVX稳定转染的细胞系,为进一步探讨HBx在HCC的发生发展过程中所起的作用,提供了一个有价值的细胞模型．     

厦门海域两头中华白海豚体内微量元素的积累

对2004年4月在厦门海域搁浅死亡的两头中华白海豚（Sousa chinensis）进行了肝脏、胰、胃、肾、肠、肺、肌肉、心脏等多组织微量元素锌（Zn）、铜（Cu）、汞（Hg）、铅（Pb）、镉（Cd）和砷（As）浓度的测定。两豚各组织总体上必需元素Zn、Cu浓度高于有毒元素Hg、Pb、Cd和As。XM20040430体内特别高的Zn、Hg、Pb、Cd浓度分别出现于皮肤（500μg/g干重）、肝脏（255μg/g干重）、肺（13.0μg/g干重）和肾（2.82μg/g干重）中,而Cu和As在各组织中的浓度较为相似。XM20040429体内仅肝脏中Zn（448μg/g干重）和Cu（52.0μg/g干重）的浓度远高于其他组织。虽然两海豚微量元素的总体积累多低于急性毒性水平,但有毒元素Hg、Pb、Cd、As的明显检出和XM20040429肝脏中异常高的Zn浓度均显示出进一步研究微量元素慢性胁迫效应的必要性。结果还显示厦门港海域近年来Hg、Cd、Pb污染未见减轻,As也明显检出,必须引起高度重视。今后有关水生哺乳动物中As积累的研究也有待加强。     

不同生长阶段背角无齿蚌对养殖池塘藻类的摄食选择特征

正背角无齿蚌(Anodonta woodiana)是我国淡水水体中分布很广的淡水双壳类软体动物之一,因其分布广、在湖泊中多营底栖生活[1],对污染物具较强耐受且可在体内富集,易采集等特点,可被用做评价湖泊污染的指示生物3][2,。"淡水贝类观察监测体系"自2003年由本实验室提出后,背角无齿蚌被确定为该研究体系的"指示生物",进而创新性地培育出一种规格、遗传质量、数量、污染背景值等均可控,且可野外移殖和回捕的标准化监测指     

三角酵母D-氨基酸氧化酶基因的克隆、测序及表达*

利用跨越内含子的PCR技术,三角酵母(Trigonopsos variabilis)变种FA1-10中扩增得到D-氨基酸氧化酶基因(daao),并通过TA克隆的方法将其克隆至pGEM—T载体。序列测定结果表明,所得daao基因的5’端内含子已被删除,基因总长度为1071bp,它与Trigonopsis variabilis D-氨基酸氧化酶同源性达98.3％,与Fusarium solanii和Rhodotoru-la gracilis的同源性分别是38.9％和30.8％。为提高表达水平,又将此基因转移至高表达载体pET-28b上．在大肠杆菌BL-2l(DE3)中进行诱导表达。经IPTG诱导,目的蛋白的产生量可占菌体总蛋白量的46％,分子量约为38kD。D-氨基酸氧化酶的活力可达802u／L。