用RAPD方法对平菇、香菇属间原生质体融合子的研究

RAPD是一种新的分子生物学技术。本实验用28个随机引物对平菇、香菇及其融合子进行PCR扩增, 在融合子谱带中,有64条与平菇相同(与平菇的相似指数SI=70.6%),14条与香菇相同(SI=33.6%),另外有26条谱带为双亲与融合子所共有。本实验结果说明融合子是双亲融合的产物,但在融合过程中,从双亲获得的遗传信息不等。本实验首次在食用真菌中获得了原生质体融合的分子生物学证据。我们认为,在食用菌研究中,RAPD将是一种有重要价值的分析方法。 Abstract:RAPD is a novel molecular biological technique.P.sapidus,L.edodes and their intergeneric fusants were tested by RAPD method using 28 randomly selected primers.In bands gained from fusants by amplification reaction,there were 64 bands with the same position as in P.sapidus (the similarity index (SI) was 70.6%),14 bands as in L.edodes.This results illustrated that fusants are true hybrid derived from protoplast fusion procedure,but the genetic information obtained from the two parents were not equal.Molecular biological evidence of protoplast fusion had obtained first time in edible mushroom by RAPD method in this experiment,we suggest that this technique is a valuable genetic marker for mushroom study.     

水稻同源盒序列的扩增、分析及染色体定位

广泛存在的同源盒基因家族与生物的发育控制过程有关 .用特异PCR扩增获得同源盒保守序列 ,并通过LM PCR方法获得保守序列的侧翼序列 ,进而对克隆的扩增片段进行序列分析和Southern分析 ,并在水稻的分子连锁遗传图上定位了 6个同源盒序列 .它们分别被定位在水稻第 3 ,4和第 7染色体上 ,在第 3染色体上共定位了 4个同源盒序列 .值得注意的是水稻同源盒序列定位的结果与玉米已知的同源盒基因的定位结果相当符合 .     

五个水稻类受体激酶的抗体制备及检测

类受体激酶在植物发育、自交不亲和、雄性不育、抗逆和抗病等生命过程中起着重要的调控作用。为了对水稻类受体激酶的功能及生物学特性进行深入研究,本实验克隆表达了水稻中5个类受体激酶抗原表位片段,以纯化的蛋白质为抗原免疫新西兰兔,获得了特异性较高的多克隆抗体。Western blotting检测结果表明,5个类受体激酶均在叶片中表达。     

用RAPD方法对平菇、香菇属间原生质体融合子的研究

RAPD是一种新的分子生物学技术。本实验用28个随机引物对平菇、香菇及其融合子进行PCR扩增, 在融合子谱带中,有64条与平菇相同(与平菇的相似指数SI=70.6%),14条与香菇相同(SI=33.6%),另外有26条谱带为双亲与融合子所共有。本实验结果说明融合子是双亲融合的产物,但在融合过程中,从双亲获得的遗传信息不等。本实验首次在食用真菌中获得了原生质体融合的分子生物学证据。我们认为,在食用菌研究中,RAPD将是一种有重要价值的分析方法。 Abstract:RAPD is a novel molecular biological technique.P.sapidus,L.edodes and their intergeneric fusants were tested by RAPD method using 28 randomly selected primers.In bands gained from fusants by amplification reaction,there were 64 bands with the same position as in P.sapidus (the similarity index (SI) was 70.6%),14 bands as in L.edodes.This results illustrated that fusants are true hybrid derived from protoplast fusion procedure,but the genetic information obtained from the two parents were not equal.Molecular biological evidence of protoplast fusion had obtained first time in edible mushroom by RAPD method in this experiment,we suggest that this technique is a valuable genetic marker for mushroom study.     

三条新颖短肽筛选及抑菌作用的初报

[目的]为了发现新的农作物病原菌抗菌肽,人工设计并构建了大容量短肽文库,从中筛选并合成96条短肽用于鉴定其对农作物病原菌的抑菌活性.[方法]采用琼脂扩散法,对靶标菌一棉花枯萎病菌(Fusarium f.sp.vasinfecum)、棉花红腐病菌(Fusarium moniliforme)、小麦根腐病菌(Bipolaris sorokiniana)和马铃薯早疫病菌(Alternaria solani)进行抑菌初筛,并测定了有抗菌作用短肽的最小抑菌浓度和抑菌持久性.[结果]得到了A6、D4和F10对上述四种病原真菌抑菌效果较强,抑菌时间较长的抗菌肽,通过与抗菌肽数据库氨基酸序列对比,未见这3条抗菌肽的同源序列.[结论]研制的3条短肽属于新颖抗菌肽,为防治农作物真菌病害提供了新的基因资源.     

水稻病程相关PR1家族蛋白质在叶片生长及与白叶枯病菌互作反应中的表达北大核心CSCD

病程相关(PR)蛋白质经常被用作抗病反应的分子标记。利用免疫印迹(WB)技术检测了7个PR1家族蛋白质在水稻(Oryza sativa)叶片生长及与白叶枯病菌互作反应过程中的表达,发现6个PR1家族蛋白质在叶片生长中有表达。检测PR1蛋白质在Xa21介导的抗白叶枯病过程中的表达,结果显示PR1#052、PR1#072、PR1#073和PR1#121四个蛋白质在抗病反应后期呈上调或诱导表达,PR1#071则表达下调。进一步比较它们在抗病、感病和对照(Mock)反应中的表达丰度,发现在抗病和感病反应中的变化幅度均明显大于对照反应,推测这些PR蛋白质在水稻-白叶枯病菌互作反应中发挥作用。另外,对PR1基因上游启动子区的cis元件进行了分析。该研究初步揭示了水稻PR1家族蛋白质的表达谱,为进一步了解PR1蛋白质的功能提供了线索。     

水稻OsPR10A的表达特征及其在干旱胁迫应答过程中的功能

利用免疫印迹(WB)分析了水稻(Oryza sativa) OsPR10A在其不同生长时期、不同组织部位及多种非生物逆境胁迫下的表达特征, 发现OsPR10A在干旱、盐胁迫以及茉莉酸甲酯(MeJA)和脱落酸(ABA)诱导下表达量明显升高, 表明该蛋白可能在干旱和盐胁迫应答过程中发挥作用。为证明这一推测, 我们构建了OsPR10A超表达载体, 经农杆菌介导转化水稻, 获得超表达OsPR10A的纯合株系。田间表型观察表明, 转基因株系株高变矮、穗长变短、结实率降低。用20% PEG6000在水稻种子萌发过程中进行干旱处理, 结果显示, OsPR10A超表达株系的根长和芽长均显著高于野生型, 证明超表达OsPR10A可增强水稻萌发期耐旱性。该研究有助于增进人们对水稻OsPR10A功能的了解。     

缺氮介导的莱茵衣藻油脂合成过程的内参及标志物蛋白质的筛选鉴定

微藻被认为是最有潜力的生物能源原料之一,了解油脂合成机理、提升油脂合成的效率是重要的生物学问题.莱茵衣藻缺氮胁迫是油脂合成机理研究的模式系统,组学研究已经积累了大量的数据,但针对莱茵衣藻缺氮介导的油脂合成过程的内参及标志物蛋白质还鲜有报道.本研究对莱茵衣藻进行了对照和缺氮胁迫培养,比较了多个时间点(0、1、2、4和6d)在2种处理条件下的培养物表型、细胞密度、油脂含量以及总蛋白质含量的变化等特征.结果显示:莱茵衣藻细胞在受到缺氮胁迫后表现为培养物颜色由绿变黄;A750和细胞计数结果显示细胞生长趋于停滞;尼罗红染色定量实验鉴定到油脂含量的显著升高;考马斯亮蓝染色实验检测到总蛋白质含量降低.以20个莱茵衣藻蛋白质为候选,利用蛋白质印迹技术(Western blot,WB)检测了其在不同处理和不同时间点的表达特征变化,通过计算总蛋白质和候选蛋白质含量的皮尔森相关系数(Pearson’s correlation coefficient, PCC)筛选了莱茵衣藻缺氮胁迫的内参蛋白质,发现Histone H3、 RBCL(ribulose-1, 5-bisphosphate carboxylase/oxygenase large subunit)和BCR1(biotin carboxylase,ACCase complex 1)在对照和缺氮胁迫条件下均与总蛋白质含量变化呈现极显著或显著正相关,所以被选作内参蛋白质.进而通过比较候选蛋白质的平均相对倍率变化(average relative fold change, ARF),鉴定了莱茵衣藻缺氮胁迫的标志物蛋白质,发现ATPs-β(ATP synthase CF1beta subunit)、 GAP2(glyceraldehyde 3-phosphate dehydratase 2)和RMT1(rubisco large subunit N-methyltransferase 1)蛋白质的ARF值分别为180.59、52.90和12.48,明显高出其他蛋白质,由此把它们选做缺氮胁迫的标志物蛋白质.接下来,对缺氮胁迫早期(0、2、4、8、12、18、24和48 h)的样品进行蛋白质印迹法分析,发现可检测的ATPs-β、GAP2和RMT1的缺氮诱导条带出现的时间分别是8、18和12 h.综上可以认为,在所有候选蛋白质中,ATPs-β是出现最早且变化幅度最大的缺氮处理标志物蛋白质.本研究鉴定的内参和标志物蛋白质对了解缺氮应答及油脂合成机理会有所帮助,所积累的蛋白质表达信息可供研究同行参考.     

水稻蛋白激酶的规模化克隆、表达及活性研究(简报)

蛋白激酶几乎与所有重要的发育代谢过程有关,已知在植物的发育、自交不亲和、雄性不育、抗逆和抗病等生命活动过程中起重要的调控作用[1]。蛋白激酶在各种生物中广泛存在,根据网络公布的水稻全基因组序列图谱,通过同源序列比对,TIGR Rice Genome Annotation-Release4共找到了1532个具有激酶结构域的蛋白质(PF00069)[2],拟南芥中也存在1053个激酶[1],这些激酶与它们的上下游蛋白质组成了一个复杂而有序的网络,调节着植物的正常生长发育和对外界环境的反应。     

Structural and functional analysis of a MADS box containing genomic DNA sequence cloned from rice

Ａｎｉｎｃｒｅａｓｉｎｇｎｕｍｂｅｒｏｆｈｏｍｅｏｔｉｃｇｅｎｅｓｃｏｎｔｒｏｌｌｉｎｇｐｌａｎｔｆｌｏｗｅｒｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｈａｓｂｅｅｎｃｌｏｎｅｄｉｎｒｅｃｅｎｔｙｅａｒｓ.Ｔｈｅｓｅｓｔｕｄｉｅｓｈａｖｅｂｅｅｎｆａｃｉｌｉｔａｔｉｎｇｏｕｒｕｎｄｅｒｓｔａｎｄｉｎｇｏｆｍｏｌｅｃｕｌａｒｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆｐｌａｎｔｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ[1].Ｉｔｈａｓｂｅｅｎｋｎｏｗｎｔｈａｔｄｉｆｆｅｒｅｎｔｔｙｐｅｓｏｆｇｅｎｅｓａｒｅｉｎｖｏｌｖｅｄｉｎｉｎｆｌｏｒｅｓｃｅｎｃｅｍｅｒｉ…