雷帕霉素对低氧下人HL-60细胞增殖和凋亡的影响

本研究拟通过小分子化合物氯化钴（CoCl2）模拟的低氧环境,探讨雷帕霉素（RPM）对该低氧下人急性髓细胞白血病HL-60细胞的生物学行为的影响。低氧模拟组、低氧雷帕霉素处理组、常氧雷帕霉素处理组HL-60细胞分别采用CoCl2、CoCl2／RPM、RPM进行处理,对照组为常氧下常规培养的HL-60细胞,处理及培养24h、48h、72h后收集细胞,采用倒置相差显微镜观察细胞生长状况,常规瑞氏染色后光学显微镜下观察细胞形态;MTT比色法检测各组细胞的活性和增殖能力;AnnexinV—FITC／PI双染法流式细胞术检测细胞凋亡。结果表明,与对照组细胞形态规则,胞核呈圆形或椭圆形相比,低氧模拟组和低氧雷帕霉素处理组细胞密度降低,生长明显受抑,细胞胞核呈不规则形或杆状,染色质粗糙,伴扭曲折叠等变化。各组间不同时问细胞增殖抑制率差异显著（P〈0．05）,低氧模拟组和低氧雷帕霉素处理组增殖抑制率随着处理时间延长而增大,且低氧雷帕霉素处理组的增殖抑制率大于低氧模拟组。与常氧下的对照组及雷帕霉素处理组比较,低氧的模拟组和雷帕霉素处理组诱导细胞发生较明显的凋亡,且后期72h低氧雷帕霉素处理组凋亡率显著高于模拟低氧处理组。以上结果表明,模拟低氧环境下,HL-60细胞生长明显受抑制,且诱导细胞凋亡;雷帕霉素可增强对低氧对细胞的生长抑制和诱导凋亡作用。     

家蚕FoxG转录因子的鉴定及其在精巢发育中的功能初探

[目的]Fox家族蛋白是调控动物发育的关键转录因子.本文分析了鳞翅目昆虫家蚕Bombyxmori的BmFoxG亚家族蛋白在精巢发育中的作用,为基于生殖系统的家蚕性状优化或害虫不育技术的开发提供理论依据.[方法]利用PCR克隆家蚕BmFoxG-1 和 BmFoxG-2基因;通过生物信息学工具对BmFoxG蛋白的结构及理化性质进行分析;采用qPCR技术检测BmFoxG基因在家蚕不同发育阶段的精巢中的表达变化;在家蚕Bm12细胞株中过表达BmFoxG-1,并通过qRT-PCR分析BmFoxG-1调控的靶基因.[结果]本文克隆获得了 BmFoxG-1(933 bp)和 BmFoxG-2(702 bp)两个基因.BmFoxG-1 和 BmFoxG-2蛋白均包含保守的Forkhead结构域,但BmFoxG-1蛋白在C端多出约60个氨基酸.BmFoxG-2基因在家蚕不同发育时期的精巢中的表达量均较低;BmFoxG-1 的表达均显着高于BmFoxG-2,且随着发育时期而变化,暗示BmFoxG-1参与精巢的发育.生殖细胞发育基因BmVasa、BmCyclinA等多个细胞周期基因以及精子鞭毛发育相关基因BMSK0009828在不同发育阶段的精巢中的表达趋势与BmFoxG-1类似,且BmFoxG-1在家蚕细胞中的过表达可以显著上调BmVasa、BmCyclinA和BMSK0009828等精巢发育相关基因的表达.[结论]我们推测BmFoxG-1蛋白可能通过调节精巢细胞周期或生殖细胞的功能来调节家蚕精巢的发育.     

SB-431542抑制乳腺癌细胞BT-549的增殖和侵袭及其机理研究

肿瘤转移是导致肿瘤患者死亡的最主要原因,TGF-β超家族成员Nodal分子被证实参与肿瘤细胞的增殖和转移,因而基于Nodal信号为靶标开展抗肿瘤研究成为可能。该研究应用Western blot检测乳腺癌细胞株BT-549、T-47D、MCF-7、SK-BR-3和MDA—MB-231中的Nodal和基质金属蛋白酶-2（matrix metalloproteinase-2,MMP-2）的表达水平,发现它们在BT-549细胞中表达量最高。然后采用不同浓度_Nodal信号抑制剂SB．431542（1-50μmol／L）处理BT-549细胞48h,利用MTT法揭示20～50gmol／L的SB-431542抑制该细胞增殖。进一步利用细胞划痕和Transwell实验证明,10μmol／L的SB-431542可抑制乳腺癌细胞的迁移和侵袭。最后,通过明胶酶谱和Westernblot显示,10～30gmol／L的sB．431542可剂量依赖性地抑制MMP-2的表达和活性。上述结果说明,SB-431542通过阻断Nodal信号通路可效抑制乳腺癌细胞BT-549的增殖、迁移和侵袭,其作用机制可能与降低MMP-2的表达和活性有关。     

1272例尿液标本细菌培养结果及耐药性分析

目的调查临床送检中段尿标本菌群分布及体外抗生素耐药性,为临床合理使用抗生素提供依据。方法回顾性分析2010年1月至2012年6月住院患者送检中段尿标本中,分离的1272株细菌（剔除重复菌株）临床分布及耐药性。采用美国BDphoenix100全自动细菌鉴定药敏分析仪进行菌种鉴定及药敏试验,结合相关临床资料,应用WHONET5．6分析软件进行耐药性分析。结果从分离到的l272株细菌中,检出前5位的细菌是大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、屎肠球菌、粪肠球菌和铜绿假单胞菌,构成比分别为20．3％、14．4％、14．2％、9．4％和7．4％。肠杆菌对氨苄西林的耐药率最高为93．9％,耐药率较低的有亚胺培南、美洛培南、头孢哌酮／舒巴坦和多粘菌素B,它们的耐药率在10．5％～15．9％。非发酵菌对氯霉素、氨苄西林、头孢唑啉和阿莫西林／克拉维酸的耐药率最高在90．1％～100％,对多粘菌素B和头孢哌酮／舒巴坦的耐药率较低,分别为7．7％和16．9％。肠球菌对利奈唑胺、万古霉素、替考拉宁和呋西地酸的耐药率最低,分别为2．6％、7．2％、8．8％和8．8％;葡萄球菌对万古霉素的耐药率为0,对喹奴普汀-达福普汀的耐药率为0．8％,对呋哺妥因、替考拉宁、夫西地酸、利奈唑胺、利福平的耐药率在2．5％～10．7％。结论泌尿系统感染主要病原菌为肠杆菌和肠球菌,由于各病原菌均存在不同程度的耐药性,临床医师应根据尿液细菌培养结果,科学合理使用抗菌药物。     

全身麻醉和硬膜外麻醉对老年骨科手术患者术后短期 认知功能的影响

目的：探讨全身麻醉和硬膜外麻醉对老年骨科手术患者术后短期认知功能的影响。方法：按随机数字方式将2010 年3 月至 2013 年5 月收治的全麻骨科手术老年患者64 例分为两组,全身麻醉组（32 例）给予全身麻醉进行手术,硬膜外麻醉组（32 例）给 予硬膜外麻醉进行手术,对比分析两组观察麻醉前后动脉血压与心率,睁眼、拔管及应答时间,术后6、12、24、72 h的MMSE 评分 差异,并统计术后POCD的发生情况。结果：两组的年龄、体重、麻醉时间、受教育时间、出血量等一般临床资料均无明显差异（P＞ 0.05）;两组麻醉前、麻醉后术前、手术0.5h 及手术结束时动脉血压和心率差异均不显著（P＞0.05）;全身麻醉组的睁眼、拔管及应 答时间分别为（30.3 ± 10. 5）min、（30.3 ± 7.8）min、（33.2 ± 9.6）min;膜外麻醉组的睁眼、拔管及应答时间分别为（30.6 ± 11.6）min、 （30.1± 6.6）min、（34.3 ± 8.5）min,两组差异不显著（P＞0.05）;全身麻醉组麻醉前MMSE 评分为29.2 ± 1.5,而膜外麻醉组麻醉前 MMSE 评分为29.1 ± 1.0,差异不显著（P＞0.05）;麻醉后,两组的MMSE 评分均出现先减少后恢复的变化,膜外麻醉组麻醉后 24h 时的MMSE 评分28.7 ± 1.0 明显高于全身麻醉组的27.3 ± 0.8（t=5.491,P=0.000<0.05）;全身麻醉组麻醉后6h 和12hPOCD 的发生率均明显高于膜外麻醉组的（P<0.05）,而两组在麻醉后24h 开始POCD的发生率无明显差异（P＞0.05）。结论：全身麻醉 对老年骨科手术患者术后短期认知功能的影响明显大于硬膜外麻醉。     

HE4和HE4/CA125并联诊断卵巢癌的系统评价

目的:通过Meta分析方法系统评价血清人附睾蛋白4(HE4)及HE4并联糖类抗原125(CA125)诊断卵巢癌的价值。方法:中国知网期刊数据库(CNKI)、中文科技期刊数据库(中国万方数据库)、中文电子期刊数据库及维普网等数据库检索2005年1月至2015年3月的相关文献,使用Meta-Disc软件进行Meta分析,分析异质性及处理后选择适当效应模型合并效应量,得出合并敏感性、合并特异性及合并似然比,制作SROC曲线并计算曲线下面积(AUC)。对HE4及HE4/CA125并联检测诊断卵巢癌的AUC应用Z检验进行比较。采用STATA13.0软件应用Egger检验法进行发表偏倚检测。结果:16篇文献符合纳入标准,将对照组分为健康人群和良性疾病组,经Meta分析后得出:以健康人群为对照,HE4和HE4/CA125并联检测卵巢癌的AUC分别为0.8611±0.0399、0.8959±0.0237,差异无统计学意义(Z值=0.749871,P0.05)。以良性疾病组为对照,HE4和HE4/CA125并联检测卵巢癌的AUC分别为0.9443±0.0153、0.9328±0.0132,差异无统计学意义(Z值=0.569105,P0.05)。结论:HE4/CA125并联检测提高了卵巢癌检测的灵敏度,而单独检测HE4有良好的特异度,两者对卵巢癌诊断均有较高的AUC,但HE4与HE4/CA125并联检测的诊断价值差异并无统计学意义。     

鼎湖山季风常绿阔叶林林下层3种优势树种游离氨基酸和蛋白质对模拟氮沉降的响应

报道了林下层3种优势树种光叶山黄皮（Randia canthioides）、黄果厚壳桂（Cryptocarya concinna）和厚壳桂（Cryptocarya chinensis）叶片游离氨基酸和蛋白质对模拟氮沉降的响应,并探讨这3种植物中重要氨基酸对氮沉降的指示作用,以及γ-氨基丁酸含量的变化对植食性动物的可能影响,为揭示氮沉降对森林植物生理生态影响及其机理,以及监测氮沉降对植被的影响等一系列问题提供初步的理论基础.结果表明,试验21个月后,3个树种叶片游离氨基酸和蛋白质的含量均发生了明显的变化.对总的游离氨基酸含量而言,光叶山黄皮和厚壳桂对氮处理的响应相似,氮处理样地的含量均高于对照,并且中氮处理显著高于对照（p＜0.05）,但两者在高氮处理下均出现了下降的趋势;黄果厚壳桂随着氮处理强度的增加,游离氨基酸总量呈现下降趋势.对于可溶性蛋白质含量来说,光叶山黄皮、黄果厚壳桂和厚壳桂在氮处理下都出现了增加的趋势,黄果厚壳桂和厚壳桂增加尤为明显.找出了对氮沉降响应敏感的指示剂.游离氨基酸丝氨酸、精氨酸和γ-氨基丁酸,特别是精氨酸,可以用来作为光叶山黄皮对氮沉降响应的指示剂;γ-氨基丁酸可以作为黄果厚壳桂对氮沉降响应的指示剂;丝氨酸和γ-氨基丁酸可以作为厚壳桂对氮沉降响应的指示剂.个别游离氨基酸的积累情况可被用来监测氮沉降对植被的影响.     

不同遮荫处理罗汉果内在品质的变化研究

以罗汉果‘永青1号'品种为试验材料,在授粉30 d后,设置不遮荫、遮荫70%、遮荫95%三个处理,探讨遮荫对罗汉果总苷、总糖、维生素C等内在品质的影响。结果表明:在授粉30 d后,对罗汉果进行一定程度的遮荫处理,显著提高了罗汉果果实重要内含物总苷、甜苷Ⅴ、总糖和维生素C的含量,可有效改善罗汉果果实的内在品质。遮荫70%处理条件下较适宜罗汉果果实内含物的累积。     

罗汉果主要性状遗传效应研究

罗汉果近交后代发生明显衰退,花和果变小甚至畸形,种子活力降低,品种间衰退速度不同;杂交F_1后代果实形状、大小、颜色、总苷含量、甜苷Ⅴ含量和雌花柱头生长方式产生严重分离变异,其中果实大小、总苷含量、甜苷Ⅴ含量表现出明显杂种优势;雄性败育系的花粉败育是由遗传决定的,其败育性可通过杂交传递给雌性系产生无籽果实;F17芽变枝条所得雌雄同花两性突变属于遗传变异。     

心脏发育候选基因AHNAKβ的克隆和表达研究

心脏发育过程是一个错综复杂的过程,由一系列的基因参与完成.虽然目前已经鉴定出很多与心脏发育相关的基因,但是仍有很多心脏发育相关基因有待鉴定.作者从小鼠心脏cDNA文库中分离并鉴定了一个心脏发育候选基因AHNAKβ.AHNAKβ位于11q12.2,长1 064 bp,由6个外显子和5个内含子组成,其中开放阅读框(ORF)长450 bp (258~710 nt),编码含有149个氨基酸,蛋白质大小约为16.0 kD.我们构建了原核细胞表达载体,在大肠杆菌中表达并纯化了GST- AHNAKβ融合蛋白,然后制备了该蛋白的兔免疫血清.利用该抗体进行了小鼠成体组织Western blot以分析该基因的蛋白表达模式.研究结果表明AHNAKβ在小鼠成体子宫、小肠等多种组织表达,在心脏中表达较高,提示它可能在心脏组织中具有某种重要作用.