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Itiseasytoderiveprimarymyoblastsfromhumanbiopsy.Thetransformedmyoblastscouldexpressforeigngeneathighlevel.Butlessmyoblastsexistinadults[1],andareliabletodifferentiateandfailtodivide,leadingtolowefficiencyoftransfectionandamplificationinvitro,andsubsequen… 相似文献
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人体淋巴细胞和中国仓鼠杂种细胞FD1的建立和鉴定 总被引:1,自引:0,他引:1
本文以中国仓鼠肺细胞Wg3-h(HGPRT~-)和正常人的淋巴细胞作为亲本,借助仙台病毒促融,HAT培养液选择得到FD1杂种细胞。通过观察细胞形态、Giemsa-11分化染色,G-分带、G-6-PD和LDH同工酶的电泳等一系列鉴定指标,以及细胞周期的研究,证实FD1细胞是包含全套中国仓鼠染色体组和少数几条人的染色体(5、11、12、21、22、xq~-、Y等)的杂种,其中还存在中国仓鼠和人体染色体的易位。FD1等杂种细胞的建立将有助于进行人类基因制图以及人体基因的结构功能和表达调控的研究。 相似文献
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为了降低腺病毒的免疫反应,延长人凝血因子Ⅸ基因在动物体内的表达时间,制备了带有人hFⅨ小基因的微小腺病毒AdGTi’Ⅸ,同时制备了带有人hFⅨ小基因的第1代腺病毒AdSPi’Ⅸ作为对照。经CsCl超离心纯化,AdGTi‘Ⅸ中辅助腺病毒比率低于0.8%。分别用AdSPi’Ⅸ和AdGTi’Ⅸ以MOI为50的比例感染3T3细胞,hFⅨ表达量分别为(1.6±0.3)μg/(10~6·24h)和(1.4±0.2)μg/(10~6·24h)。血友病B小鼠分别腹腔注射1×10~(10)pfu/只的AdGTi’Ⅸ和AdSPi’Ⅸ,小鼠血浆中人FⅨ表达水平最高分别为590和690ng/mL,表达时间分别持续了16和10周。与血友病B小鼠相比,出血时间从原来的超过30min缩短到7.5min,5min内失血量从原来的430μL减少到60μL。免疫组化和抗Ad-IgG分析的结果表明,微小腺病毒AdGTi’Ⅸ与第1代重组腺病毒AdSPi’Ⅸ相比,在宿主体内引起的免疫反应强度明显降低。结果表明,微小腺病毒与第1代腺病毒相比,同样能够介导外源基因在离体细胞和动物体内高效表达,而且在动物体内的表达时间上有所延长,病毒引起的免疫反应强度则明显降低,为进一步的研究提供了实验依据。 相似文献
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通过重组HSV/AAV辅助病毒方法制备出高滴度(>10~(12))的重组AAV/mFⅨ病毒颗粒,并注射到血友病B小鼠的后肢骨骼肌中,获得了稳定的高水平小鼠Ⅸ因子表达(>370ng/mL),持续时间超过350d。治疗组小鼠体内的Ⅸ因子活性达到正常值的30%,而且出血症状得到显著改善。在小鼠血浆中未发现抗Ⅸ因子的中和抗体,第1次注射后抗AAV抗体的水平也非常低。重复注射AAV/mFⅨ病毒后,不同剂量组的小鼠体内的抗AAV抗体出现了不同的结果。组织分析结果证实了血浆中有功能的FⅨ因子确实来源于骨骼肌。以上结果显示,AAV介导的基因转移是血友病B基因治疗的极有前途的方法。 相似文献
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Hemophilia B is an X-linked disorder caused by the deficiency of clotting factor IX (FIX). Compared with conventional blood transfusion treatment, gene therapy offers a more attractive approach to achieve the goal of prophylactic hemostasis without the extreme costs, infectious and thrombotic risks, and the need for repeated and frequent injections of factor IX concentrates. Since 1987, our lab has conducted study of gene therapy for hemophilia B. In 1991, clinical trials involving four pa… 相似文献
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Constitutive expression of hFIX protein in nonhepatocytes was studied. The gene targeting vector was constructed and transferred into HeLa cells. With the detection system of PCR, we demonstrated that the endogenous hFIX promoter was replaced with an hCMV promoter when targeted insertion of the constructor was directed by the sequence homology. The expression of hFIX in the modified HeLa cells, 11.2 ng/106 cell/24 h, strongly suggested that hFIX gene could be activated by a powerful promoter in nonhepatocytes. The results would make it possible to examine the feasibility of re-regulate gene expression by promoter replacement. 相似文献
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以小鼠C2C12成肌细胞为对象开展血友病B基因治疗研究.除已有的XLIX,LNCIX和GlNaCIX反转录病毒载体外,又首次将微小MCK(muscle creatinekinase)增强子顺序构建到hCMV(human cytomegalovirus)启动子上游,共同控制FIXcDAN的转录.用带有上述4种载体的病毒悬液分别感染C2C12细胞后,ELISA检测结果发现,FIX蛋白离体表达水平为:G1NaMCIX>GlNaCIX>LNCIX>XLIX.其中C2C12/G1NaMCIX混合克隆高达640ng/(10~6细胞·24h).C2C12/G1NaMCIX细胞注射C3H小鼠后肢骨骼肌肉组织,人FIX蛋白持续表达35d,其中最高表达峰达206ng/mL血浆.此结果对于研究FIX cDNA在脱细胞中的表达调控以及采用成肌细胞移植途径开展血友病B基因治疗研究有重要意义. 相似文献