利用酵母双杂交技术筛选与生殖支原体黏附蛋白(MgPa)相互作用的宿主蛋白

从利用基于分离的泛素介导膜蛋白酵母双杂交系统构建的人尿道上皮细胞cDNA文库中筛选生殖支原体(Mg)黏附蛋白(MgPa)的互作蛋白。以pET30a-MgPa为模板,经PCR扩增MgPa基因,将其分别连接到pBT3STE和pBT3SUC载体以构建诱饵质粒pBT3STE-MgPa和pBT3SUC-MgPa;将诱饵质粒分别转化到酵母菌株NMY32内,检测其毒性和自激活活性;将人尿道上皮细胞cDNA文库质粒pPR3-N-207-Zeng转入到含pBT3SUC-MgPa诱饵质粒的酵母菌株中,筛选阳性克隆。检测阳性克隆LacZ报告基因的活性。提取阳性克隆质粒进行DNA测序与BLAST分析。结果显示,成功构建的诱饵质粒pBT3STE-MgPa和pBT3SUC-MgPa两者都没有自激活功能,且pBT3SUC-MgPa的活性强于pBT3STE-MgPa。用pBT3SUC-MgPa转化NMY32酵母作为受体酵母细胞。经DNA测序与BLAST分析结果表明筛选到的28个阳性克隆归属于23个不同的蛋白。从利用分离的泛素介导膜蛋白酵母双杂交系统构建的人尿道上皮细胞cDNA文库中筛选到23个与MgPa相互作用的蛋白,为阐明MgPa的功能及Mg可能的致病机制提供参考。     

激素替代周期子宫内膜微创术治疗卵巢早衰的疗效分析

目的:探讨激素替代周期子宫内膜微创术治疗卵巢早衰患者的临床疗效及安全性。方法:选择2013年12月~2015年12月于我院进行治疗的卵巢早衰患者68例,随机分为实验组与对照组,每组34例,实验组患者采用激素替代周期子宫内膜微创术进行治疗,对照组患者服用中药抗衰复巢汤。比较治疗前后两组患者血清卵泡刺激素(FSH)、促黄体生成素(LH)及雌二醇(E2)水平,同时对两组患者的不良反应情况进行统计,治疗结束后比较两组患者的临床疗效。结果:与治疗前相比,两组患者血清FSH、LH水平均降低,E2水平均升高;治疗结束后,与对照组相比,实验组患者血清FSH、LH水平较低,E2水平较高(P0.05),不良反应发生率较低(P0.05),临床总有效率较高(P0.05)。结论:应用激素替代周期子宫内膜微创术可以减少卵巢早衰患者在治疗后的不良反应,提高临床疗效。     

微量元素Mn离子对DY芽孢杆菌芽孢形成影响的研究

目的研究DY芽孢杆菌发酵过程中微量元素Mn离子对芽孢形成率的影响。方法通过实验设计,调整发酵用水中锰离子的浓度,进行DY芽孢杆菌生产曲线的同步发酵分析,并对发酵终产物进行生化反应鉴定。结果实验结果显示0．08mg／L锰离子发酵浓度,显著提升了DY芽孢杆菌发酵过程中芽孢形成率,且最终发酵产物生化反应鉴定符合生产菌种原始特征。结论DY芽孢杆菌发酵过程中,除发酵培养基的选择、培养条件的控制等因素会影响芽孢形成率外,作为微量元素,适量Mn离子的引入,可以影响菌体生长曲线,促进芽孢的形成,使菌体活性更高,从而使发酵效果得到显著提升,为今后更进一步提高发酵质量提供了基础和依据。     

广州绿道系统木本植物多样性与生长特征分析

木本植物是绿道系统中重要的生物组成要素。以广州市域分布的绿道为研究对象, 进行实地调查与统计处理, 并对主要树种组成、开花时间特征、重要值、乡土植物使用情况等开展综合分析。结果表明: (1)广州绿道常见观花木本植物有28种; 全年皆有开花树种, 主要集中在夏季, 如6、7和8月份分别有15、14和12种; (2)优势植物主要有细叶榕、羊蹄甲、高山榕和杧果等, 乡土植物使用率占总数的73%, 但部分乔木树种(如细叶榕)运用频率较高导致群落组成单一; (3)广州绿道树木长势较为良好, 病虫害情况较少, 但也需要加强后期病虫害防护措施; (4)多数常见树种的胸径与冠幅、树高呈现出线性正相关关系。为避免绿道植物群落同质化现象, 建议后续在绿道建设和维护过程中栽植更多种类的乔灌植物, 加强林木病虫害监测与防治, 提升广州市绿道森林景观和生态功能。     

龋齿DNA疫苗(PGJAP)中污染大肠杆菌噬菌体的检测方法的建立

龋齿DNA疫苗工程菌采用的大肠杆菌DH-5α在生产过程中极易污染大肠杆菌噬菌体,所以应对原始菌种、主菌种和工作菌种及大量生产时的发酵液作大肠杆菌噬菌体检测。用大肠杆菌噬菌体VCSM13为标准噬菌体株,对大肠杆菌C3000和DH-5α分别作噬菌斑检测和pfu值计算,验证并确定以VCSM13作为标准噬菌体株,C3000作为检测菌株,对龋齿DNA疫苗原始菌种、主菌种(第一代)、工作菌种(2007001)和其发酵液(200703)分别作噬菌体检测,并建立了检测大肠杆菌噬菌体的直接噬菌斑法。结果显示VCSM13在DH-5α的噬菌斑计数为76,pfu/ml为7.6×1013,C3000的噬菌斑计数为81,pfu/ml为8.1×1013,龋齿DNA疫苗的原始菌种、主菌种、工作菌种和发酵液,噬菌斑计数全部为0。Pfu也为0。阳性对照为74,pfu/ml是7.4×1013,阴性对照为0。通过对阳性对照样本作增殖法试验及挑斑接种验证后,证明此法操作简单,灵敏度高。     

钴对蔬菜毒害的临界值

采用水培+土培的方法研究了钴对蔬菜的毒害临界值。首先从18种福建常见蔬菜中筛选出钴高敏感蔬菜,再通过土培试验研究土壤钴对高敏感蔬菜的毒害临界浓度。结果表明,在水培条件下钴对蔬菜生长存在较低浓度的刺激效应和高浓度的抑制效应。综合表观症状和蔬菜地上部生物量减少20%的效应浓度值(EC20)确定,早熟5号大白菜(Brassica pekinensis)和黄瓜(Cucumis sativus)为钴高敏感作物。以黄瓜为指示作物的土培试验表明,钴对黄瓜未表现出增产效应,随着钴添加量的增加,黄瓜地上部生物量显著下降。以黄瓜地上部减产10%和野外土壤有效钴和全钴的回归关系为依据,确定土壤钴毒害临界值为:土壤有效钴(DTPA)为2.7mg·kg-1,土壤全钴含量为98mg·kg-1。     

第二极体排出时间早晚与胚胎发育潜能相关性的研究

目的探讨第二极体排出时间早晚与胚胎质量及发育潜能之间的关系。方法以本生殖医学中心2009年6月-8月IVF—ET周期患者受精卵子为研究对象,共计1170枚卵子。以受精5h为时间界限将受精胚胎分为第二极体正常排出组（正常组）和延迟排出组（延迟组）。分别观察两组卵子正常／异常受精率（2PN率,1PN和3PN率）和优质胚胎率;同时统计阳性妊娠结局所移植胚胎中,正常组和延迟组的胚胎比例各占多少。采用卡方检验对数据进行统计学处理。结果①两组正常受精卵数目之间以及异常受精卵数目之间均有显著性差异（P〈0．05）;两组总受精卵数目之间有非常显著差异（P〈0．001）。②两组的优质胚胎率之间显著性差异（P〈0．05）。③统计阳性妊娠结局所移植的97个胚胎中,来自于正常组的胚胎有92个（94．9％）,仅5个是来自于延迟组（5．1％）。结论受精5h内排出第二极体的卵子其总受精率、正常受精率以及所发育的胚胎质量均显著高于第二极体出现晚的卵子,而且有着较高的胚胎植入率。对受精5h的卵子进行第二极体观察有助于早期预测患者本次IVF-ET周期胚胎的发育潜能以及妊娠结局;还可以作为决定是否行早补救ICSI的判定指标之一。     

酿酒酵母发酵与自然发酵过程中霍山石斛酵素的代谢物及抗氧化变化*

为实现霍山石斛的全质利用和高值化利用,以接种酿酒酵母发酵与自然发酵两种工艺制备霍山石斛酵素,研究不同工艺发酵过程中代谢物(有机酸、总酚、总糖等)和抗氧化活性(OH·清除率、ABTS·清除率、还原力)的变化趋势,并结合多元统计分析,建立综合评价指标。结果表明,酿酒酵母发酵组的酵母菌数量高于自然发酵组;自然发酵组检测到的4种有机酸的含量均高于酿酒酵母发酵组,其中乳酸和乙酸含量均呈上升趋势;酿酒酵母发酵组的草酸含量明显下降,而自然发酵组的草酸含量没有明显变化。酿酒酵母发酵组与自然发酵组的总酚含量分别下降了24.02%、24.98%;总糖含量分别下降了64.21%、22.89%;pH值分别下降了0.12和0.24,总酸含量分别增加了62.98%、70.98%;糖酸比分别降低了80.13%、59.47%,酿酒酵母生产的酵素口感以酸甜为主,自然发酵的酵素口感以甜为主。在抗氧化方面,酿酒酵母发酵组显著高于自然发酵组,OH·清除能力分别提高了42.57%和40.67%;ABTS·清除能力分别提高了55.36%和30.06%;还原力无显著变化。相关性分析和主成分分析结果表明乳酸、乙酸等有机酸具有一定的抗氧化性。酵母菌发酵第 14 d的综合评价指标达到阶段高点,酵母菌生长数量在14 d后趋于稳定,进入生长稳定期,可作为最佳发酵节点。综上结果表明酿酒酵母发酵相较于自然发酵霍山石斛提高了抗氧化活性,丰富了酵素口感,缩短了发酵时间,酵素品质较好。     

银杏毛状根褐化机制的初步研究

该实验依据现有发根农杆菌侵染法,以银杏无菌苗叶片为外植体,对农杆菌诱导银杏毛状根的实验操作进行优化,并观察记录银杏毛状根继代生长情况,测定继代不同天数的毛状根组织内多酚含量、多酚合成相关酶基因和POD基因相对表达量,以探讨银杏毛状根褐化的生理机制。结果显示:(1)银杏农杆菌侵染最适预培养时间为3d、菌种为R1601、共培养基为White、侵染时间为30min,优化侵染操作后的银杏毛状根诱导率可达72.36%;银杏毛状根继代生长的最适IBA浓度为0.5mg/L。(2)银杏毛状根初始发根时颜色为乳白色,多在伤口处簇生,伸长生长时无向地性,不分叶正背面都能在伤口处诱导出根,且在除菌培养20d时毛状根长可达0.4～0.8cm;继代培养25d时毛状根为白色,继代35d时部分毛状根从根部至中部开始转黄,继代45d时大部分毛状根由白转黄,根部至中部开始有褐化出现。(3)继代35d时毛状根的PAL、C4 H、4CL和POD基因表达量分别为25d的68%、44%、51%、52%;继代45d时PAL、C4 H、4CL、POD基因表达量分别为35d的19%、75%、86%、105%。(4)继代35d、45d的银杏毛状根总酚类含量分别为17.14和13.78mg/g。研究发现,PAL基因表达量变化与其下游的两个关键酶基因(C4 H、4CL)表达量变化不一致,且PAL基因表达量的大幅降低并未对下游C4 H、4CL基因表达有明显影响,说明PAL基因表达量变化对其下游合成速率影响不大,可能不是银杏毛状根苯丙氨酸代谢途径的限速酶;而C4 H与4CL基因表达量变化趋势高度一致,说明C4H应是该途径中的限速酶之一;推测继代前期可能是由PPO作为关键酶参与毛状根褐化反应,导致后期毛状根生长受抑制,POD基因表达水平随之上升,POD参与褐化反应。     

不同剂量右美托咪定对肺癌根治术后认知功能的影响

目的：探讨不同剂量右美托咪定麻醉对肺癌根治术患者术后认知功能的影响。方法：选取我院收治的肺癌根治术患者60 例,根据不同剂量的右美托咪定分为A 组（高剂量）、B组（低剂量组）及C 组（不加右美托咪定）,每组各20 例。比较三组患者治疗 前后超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）、苏醒时间、拔管时间以及认知功能。结果：三组患者的基线资料及术中情况比较 无差异,P＞0.05;术后SOD 水平呈先降低后升高的趋势,MDA呈先升高后降低的趋势。A组在第三天时SOD值较其他两组高, MDA在第1天与第3 天时较其他两组低,P＜0.05;术后1 天认知程度比较,A 组认知功能较其他两组高,P＜0.05;三组苏醒时间 和拔管时间相比较,A 组明显优于其他两组,P＜0.05。结论：右美托咪定麻醉能够降低氧化应激损伤,影响肺癌根治术患者术后认 知功能,缩短苏醒时间、拔管时间。