应用寡核苷酸芯片并行检测CYP1A和GSTM1基因多态性

利用寡核苷酸芯片检测方法分析CYP1A单核苷酸多态性(SNP)和GSTM1缺失与否,实验结果证明了寡核苷酸芯片技术可并行、准确、高效地检测基因的单核苷酸多态性和其他类型的基因多态型,可为疾病遗传易感性及单体型的研究提供强有力的研究工具。采用该寡核苷酸芯片,检测了84份正常人的血液DNA样本,其中GSTMl基因缺失率达到47．6％,接近报道数值。统计分析发现,CYP1A m1-m2的3种基因型组合TT-AG、TT-GG和TC-GG的发生频率都为0,而根据实验得到的m1和m2各自基因型数据计算,它们的发生频率应是11．4％、2．6％和3．1％,所以推测在所检测的样本中没有T(m1位点)和G(m2位点)的连锁组合,即m1和m2位点的组合只有3种单体型：T-A、C-A和C-G,其发生频率分别是69．6％、7．7％和22．6％。     

LIM蛋白的功能

LIM结构域的主要作用是参与蛋白质之间的相互作用,目前已发现多种蛋白含有这种结构域,将它们统称为“LIM蛋白”。目前LIM蛋白主要分为4类：LIM同源异型结构域蛋白(LHX)、单纯LIM结构域蛋白(LMO)、LIM激酶以及其它LIM蛋白。LHX蛋白的功能主要是通过激活转录参与细胞命运的决定,LMO蛋白的功能主要是通过调节转录来控制细胞的异常增生,LIM激酶的作用则是参与细胞骨架的组织。因此,LIM蛋白在机体的生长发育中发挥着重要的作用,了解LIM蛋白功能将对于我们进一步解释相关的生理和病理现象、控制疾病的发生提供一定的基础。     

条件转基因技术研究的新进展

转基因技术是近20年发展起来的在体内研究基因功能的分子生物学方法之一,近年来在原有技术的基础上,取得了许多新进展。综述条件转基因技术研究的新进展。阐明转基因的诱导表达系统争条件基因剔除系统的原理、操作过程以及这两系统各自的优缺点。     

LIM蛋白KyoT与PcG蛋白的相互作用

KyoT为LIM结构域蛋白 ,可与转录因子RBP J相互作用并抑制RBP J介导的转录激活。为了研究其功能 ,用酵母双杂交法筛选了与KyoT相互作用的蛋白质 ,其中包括同属于PcG (polycombgroup)家族的蛋白质Ring1和hPc2 (humanpolycomb2 )。为进一步验证KyoT2与Ring1和hPc2的相互作用 ,首先在酵母中证实了KyoT2与它们的相互作用并得到阳性结果。然后做GST pulldown实验在体外验证了KyoT2与Ring1和hPc2在体外的相互作用。进而又构建了KyoT2与Ring1和hPc2不同的截短体 ,利用酵母双杂交进一步验证了它们相互作用的区段 ,发现KyoT的LIM结构域与Ring1的全长相互作用 ,与hPc2的C末端和全长相互作用。本研究验证了KyoT2与Ring1和hPc2的相互作用 ,对探讨KyoT的功能以及分析Notch信号途径与PcG家族的关系提供一定的依据。     

信号肽捕获系统的建立

细胞分泌蛋白的分泌有赖于蛋白质N端的信号肽的存在,利用酵母建立了从cDNA文库中筛选编码信号肽的基因片段的遗传系统,为此,用一步基因破坏法对酿酒酵母EGY48基因组中的suc2基因（编码酵母蔗糖转换酶）进行了定位突变,获得了无蔗糖转换酶表达的酵母株EGY48－suc。将无信号肽的suc 2成熟肽基因克隆于酵母乙 氢酶（ADHI）基因启动子下游,得到用于文库筛选的酵母真核表达工体,启动子与成熟肽基因之间为多克隆位 ,用于插入待筛选的CDNA文库,用此载体转化酵母EGY48－suc,所得克隆可以在葡萄糖为碳源的培养基上生长,但不能在以棉子糖为碳源的培养基上生长,在suc 2成熟肽基因前分别插入suc 2信号肽基因片段或人IL－2受体α链信号肽基因片段,然后转染EGY48－suc,所得克隆既能在以葡萄糖为碳源的培养基上生长,也能在以棉子糖为碳源的培养基上生长,表明构建的系统可用于筛选插篱多克隆位点cDNA片段是否具有编码信号肽的功能。     

核糖体蛋白L6/Taxreb107的核定位信号的分析

核糖体蛋白L6（RpL6,Taxreb107）含有三个具有核定位信号特征的基序.用作者构建的核定位信号捕获系统分析了这些核定位信号是否具有介导蛋白质进行核转位的功能.将RpL6/Taxreb107分段插入核定位信号捕获载体的克隆位点后转化宿主酵母,发现其前两个核定位信号可以介导融合蛋白进入细胞核,而第三个核定位信号无此作用.将RpL6/Taxreb107分段与绿色荧光蛋白融合后转染培养的哺乳类细胞,证实了以上在酵母中所得的结果.进一步发现RpL6/Taxreb107的前两个核定位信号同时具有核仁定位的功能.当在细胞中表达的早期,进入核内的融合蛋白优先定位于核仁.这些结果一方面有助于理解RpL6/Taxreb107核转位的机理,同时说明作者构建的核定位信号捕获系统也可用在蛋白质中寻找核定位信号.     

星状神经节阻滞治疗烧伤后应激性溃疡的临床研究

目的:探讨星状神经节阻滞(stellate ganglion block,SGB)对烧伤所致应激性溃疡的临床疗效及其可能作用机制。方法:选取我院烧伤科收治的烧伤后应激性溃疡出血患者40例,将其随机分为星状神经节阻滞组(SGB组,n=20)和常规治疗组(Control组,n=20)。SGB组进行烧伤规范治疗的同时采用星状神经节阻滞治疗,隔日一次,持续治疗一周;Control组只进行常规烧伤治疗。检测和比较两组患者治疗前后血浆ET-1、NO的含量及治疗后临床症状的改善情况。结果:与Control组相比,SGB组患者治疗后血浆ET-1及NO含量均显著降低(P0.05),患者的临床总有效率明显高于Control组(P0.05)。结论:星状神经节阻滞可有效提高烧伤后应激性溃疡患者的临床疗效,可能与其调节血浆ET-1、NO的含量有关。     

带有蛋白转导结构域的Bcr/Abl癌蛋白片段的表达及其跨膜转运

HIV 1编码的反式激活蛋白TAT具有将细胞外蛋白转导进入细胞的基序 ,称为蛋白转导结构域 (PTD) .为研究PTD介导的PTD Bcr Abl融合蛋白的跨膜转运 ,合成了编码PTD的基因片段 ,并与PCR扩增的慢性粒细胞白血病癌蛋白bcr abl基因片段融合 .在大肠杆菌中表达纯化了融合蛋白 ,将纯化的融合蛋白加入培养的HL60细胞和C2C12细胞后 ,发现PTD基序可以介导Bcr Abl蛋白自由从细胞外跨膜转导进入细胞内 .研究结果可能为用外源蛋白负载 (loading)免疫活性细胞如抗原提呈细胞提供新的途径 .     

秸秆还田配施氮肥对土壤水肥状况和玉米产量的影响

本文主要围绕宁夏中部干旱区土壤贫瘠、肥力低下等问题开展研究.在玉米秸秆全量(9000 kg·hm^-2)还田条件下,设3种纯氮施用水平(150、300、450 kg·hm^-2),以秸秆还田不施氮肥处理为对照,研究秸秆还田配施氮肥对土壤水肥状况和玉米产量的影响,以探寻该区秸秆还田条件下氮肥的合理用量.结果表明: 在玉米生育中后期,施纯氮300和450 kg·hm^-2处理使0～100 cm 层土壤贮水量分别较对照显著提高10.1%和9.0%;施纯氮300 kg·hm^-2处理改善土壤肥力效果最优,其土壤有机质、全氮、碱解氮、有效磷、速效钾含量分别较对照提高12.8%、31.6%、11.6%、20.6%、74.2%.玉米籽粒以施纯氮300和450 kg·hm^-2处理增产效果最佳,分别较对照增产32.1%、23.7%.施纯氮300和450 kg·hm^-2处理的纯收入分别较对照提高31.8%和16.8%.在宁夏中部干旱区,秸秆还田配施适量氮肥可改善土壤水肥状况,实现玉米增产增收.试验以秸秆还田配施纯氮300 kg·hm^-2效果最为显著.