microRNA-215异常激活抑制Dicer1促进肝癌细胞迁移和转化

microRNA异常表达促进癌症的发生发展.本研究通过microRNA表达谱分析2个肝癌细胞和2个正常细胞microRNA的表达,寻找与肝癌相关的microRNA,发现microRNA-215在肝癌细胞中高表达,q RT-PCR验证microRNA-215在肝癌细胞呈显著高表达.进一步研究发现,microRNA-215直接靶向Dicer1基因的3′UTR并抑制Dicer1蛋白表达,Dicer1是microRNA加工成熟过程中必需的蛋白.过表达microRNA-215抑制Dicer1从而促进肝癌细胞迁移和转化,而抑制microRNA-215表达起相反作用.Dicer1抑制后,许多抑癌microRNA表达被抑制,从而促进迁移和转化.相对于癌旁组织,Dicer1在肝癌组织呈明显低表达.本研究揭示,microRNA-215异常活化并抑制Dicer1表达与肝癌发展相关.     

两种博尔纳病病毒株持续感染PC-12细胞模型的建立

目的构建两种博尔纳病病毒株持续感染的PC-12细胞模型,为研究博尔纳病病毒感染致病机制及比较两种病毒株致病特点的差别提供工具。方法将BDV Strain V株和Hu株分别感染PC-12细胞系,并进行传代培养,最后通过Real time FQ RT-PCR、Western blot、间接免疫荧光方法进行病毒核酸和蛋白的检测。结果在培养传代6代后,两种病毒株感染的PC-12细胞均可检测到BDV核酸及蛋白。结论 BDV Strain V株和Hu株均可在PC-12细胞中复制和表达,两种博尔纳病病毒株持续感染PC-12细胞模型构建成功。     

Daxx与ΦBT1相互作用并抑制其重组活性

噬菌体整合酶ΦBT1因其具有可介导转基因位点特异性整合的能力而成为了基因治疗中一种有效的工具,它丰富了转基因载体的选择,并使得多位点特异性整合成为可能.为了能够更加安全有效地利用ΦBT1整合酶作为基因治疗载体,有必要了解ΦBT1整合酶与宿主细胞内蛋白质相互作用的情况.酵母配对实验与免疫共沉淀实验揭示了ΦBT1整合酶中4个氨基酸433RFAL436对整合酶与PML-NBs蛋白Daxx的结合起到了关键作用.通过进一步构建并利用ΦBT1整合酶哺乳动物细胞报告系统,证实过表达Daxx会抑制ΦBT1整合酶在293T细胞中的重组效率.以上结果表明,细胞内的蛋白质可以与ΦBT1整合酶发生相互作用并抑制其重组活性,对于改善ΦBT1整合酶介导的转基因操作以及选择ΦBT1整合酶靶细胞方面具有重要的参考意义.     

莱茵衣藻BBS8蛋白的原核表达、纯化及多克隆抗体的制备

为制备一支高特异性的莱茵衣藻BBS8兔源多克隆抗体, 研究首先在大肠杆菌中表达N-端6×His标签标记的BBS8融合蛋白(6×His::BBS8)并对其进行镍柱纯化, 而后将纯化所得6×His::BBS8蛋白免疫新西兰大白兔。免疫3次后采集少量抗血清, 利用间接ELISA法测定其效价为1﹕102400。然后, 利用protein A纯化珠对所得BBS8抗血清进行IgG亚型抗体富集, 接着利用大肠杆菌表达和纯化所得N-端MBP标签标记的BBS8(MBP::BBS8)对IgG抗血清进行抗原抗体亲和纯化。利用纯化后的anti-BBS8多克隆抗体对莱茵衣藻野生型CC-125和bbs8突变体藻种的全细胞蛋白提取物进行免疫印迹鉴定, 所得anti-BBS8多克隆抗体特异性较高, 适合用于后续莱茵衣藻BBS8蛋白功能的研究。     

三角帆蚌Nacrein基因克隆、蛋白提纯及其对珍珠晶体成型的影响

为研究三角帆蚌Nacrein蛋白对珍珠晶体成型的影响,通过巢式及3′-RACE PCR对三角帆蚌基质蛋白Nacrein基因3′端序列进行克隆,得到850bp碱基片段,分析表明其与合浦珠母贝同源基因序列相似度为56%,与马氏珠母贝相似度为50%。试验通过水提法初步分离出珍珠质水溶性基质蛋白,并采用快速蛋白液相色谱(fast protein liquid chromatography,FPLC)分离出分子量约为60kD的Nacrein蛋白。此外,采用配对试验设计,对试验组外套膜组织培养样品加入Nacrein蛋白,研究Nacrein蛋白对晶体成型的影响,结果显示,加入Nacrein蛋白的试验组结晶成棱形状;而未加Nacrein蛋白的对照组结晶成雪花状,而且在晶体形成的时间上,试验组也较之对照组要早。研究表明,Nacrein蛋白能加速外套膜组织分泌的钙质形成棱状结晶,从而对晶体成型产生影响。本研究为进一步研究基质蛋白对生物矿化的作用提供试验依据,对珍珠培育生产有一定指导意义。     

大鼠肝硬化形成中气体信号分子一氧化氮、一氧化碳对硫化氢/胱硫醚-γ-裂解酶体系的影响

目的:研究气体信号分子一氧化氮(NO)、一氧化碳(CO)在大鼠肝硬化中对硫化氢(H2S)/胱硫酶-γ-裂解酶(CSE)体系的影响.方法:将SD大鼠随机分为3组:正常对照组(NC组)、肝硬化模型组(CIRM组)、肝硬化模型+左旋硝基精氨酸甲酯(L-NAME)+锌原卟啉-Ⅸ(Znpp-Ⅸ)组(CIRM+L-NAME+ZnPP-Ⅸ组).采用复合因素法建立大鼠肝硬化模型.运用敏感硫电极方法检测大鼠血浆中H2S的含量;应用免疫组织化学方法对大鼠门静脉(PV)上CSE蛋白进行定位及半定量分析;利用蛋白质免疫印迹技术(Western blot)4定大鼠肝组织中CSE蛋白的表达量.结果:在大鼠肝硬化形成后,血浆H2S含量显著降低,CIRM组[(134.49±12.25)umol/L]与NC组[(180.34±11.71)umol/L]比较有显著性差异(P<0.01);门静脉上CSE蛋白的表达[NC组、CIRM组分别为(139.19±1.13)、(153.68±0.90)]及其在肝组织中的蛋白含量[NC组、CIRM组分别为(159.30±1.37)、(121.72±1.61))显著降低(P<0.01);当外源性给予L-NAME、ZnPP-Ⅸ后,CIRM+LNAME+ZnPP-Ⅸ组血浆H2S含量[(160.81±6.79)u-mol/L]显著高于CIRM组[(134.49±12.25)umol/L,P<0.01],同时,CIRM+L-NAME+ZnPP-Ⅸ组门静脉上CSE蛋白的表达(148.72±1.39)及其在肝组织中的蛋白含量(142.79±1.13)显著高于CIRM组(P<0.01).结论:在大鼠肝硬化形成中,NO、CO可以上调H2S/CSE体系.     

抗博尔纳病病毒核蛋白多克隆抗体的制备和鉴定

目的利用重组博尔纳病病毒核蛋白进行动物免疫,制备多克隆抗体并对其进行鉴定。方法将重组载体pET14b-p40转化至感受态大肠埃希菌I,PTG诱导融合蛋白的表达,His-tag亲和层析纯化重组核蛋白并作为抗原免疫新西兰大白兔,收集免疫后血清,制备和纯化多克隆抗体,ELISA测定抗体效价,并进行Western-blot鉴定。结果成功制备出核蛋白多克隆抗体,ELISA检测效价高达1︰256000;该抗体与原核和真核系统中表达的核蛋白均能发生特异性反应。结论成功制备了效价和特异性良好的抗重组核蛋白多克隆抗体,为博尔纳病病毒血清免疫学检测方法的建立奠定了基础。     

微栓子监测及其在缺血性脑血管病中的应用研究进展

微栓子监测技术(Microemboli monitoring technology,MMT)是20世纪90年代发展起来的一项新技术。1990年,Spencer等定义了微栓子信号(Micro embolus signal,MES)。1992年,Russell等明确提出了微栓子监测的概念,并结合实验数据,对微栓子的监测进行了初步总结。1995年,第九届国际脑血流动力学会议确定了MES的判断标准。近年来,微栓子监测技术已经广泛应用于心脏、血管外科和神经科领域,并取得了一些进展。目前,不仅在理论上证实了应用TCD技术监测微栓子的可行性,而且大量的临床观察表明这项技术可以为研究缺血性脑血管病的发生机制、治疗效果、预后判断及疾病预防提供客观的依据。本文将对下述问题进行综述:微栓子监测在缺血性脑血管病研究中的应用(颈源性、颅内动脉源性、心源性、其他病因所导致的缺血性脑血管病);微栓子监测对缺血性脑血管病药物治疗疗效的评估;微栓子监测对卒中复发的预计;以及微栓子监测对临床缺血性脑血管病溶栓治疗的监测。综述近年来微栓子监测在临床缺血性脑血管病诊治预防中取得的新进展、面临的问题以及新的发展。     

Cyclin D1, Bcl-2, P53和Survivin在丙型肝炎病毒相关肝细胞肝癌中 临床病理意义

目的:研究cyclin D1,bcl-2,p53和survivin在丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)相关性肝细胞性肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)癌组织及癌旁组织中的表达,探讨其表达与丙型肝炎病毒相关性肝细胞性肝癌患者临床病理特征及生存预后之间的关系。方法:采用免疫组化检测方法检测cyclin D1,bcl-2,p53和survivin在丙型肝炎病毒相关性肝癌组织、癌旁组织和基本正常的肝组织中的表达,统计分析各因子的表达情况以及与患者临床病理特征的关系,并利用Kaplan-Meier分析法进一步分析各因子与患者生存预后之间的关系。结果:cyclin D1,bcl-2,p53和survivin在基本正常肝脏组织、癌旁组织和癌组织中的表达呈现递增的趋势,且cyclin D1,bcl-2,p53和survivin在癌组织的表达显著高于癌旁组织和基本正常的肝脏组织(P0.05);经统计学分析,cyclin D1,bcl-2和p53与肿瘤的分化程度相关(P0.05),而survivin与血管的浸润情况相关(P0.05);Kaplan-Meier分析显示,cyclin D1,p53和survivin与患者的不良预后有关(P0.05),而bcl-2与患者的不良预后无关(P0.05)。结论:cyclin D1,bcl-2,p53和survivin可能与丙型肝炎病毒相关性肝细胞性肝癌的发生存在一定的联系,除此之外,cyclin D1,p53和survivin与丙型肝炎病毒相关性肝细胞性肝癌患者的不良预后相关,而bcl-2与预后不存在显著相关性。     

黑河上游天涝池流域灌丛地上生物量空间分布

祁连山自然保护区是河西地区重要的水源涵养区,而灌丛作为祁连山主要植被类型之一,对该区水源涵养功能具有举足轻重的作用。以黑河上游天涝池流域灌丛为研究对象,基于野外调查结合研究区机载Li DAR(Light Detection And Ranging)数据和Geoeye-1影像,研究灌丛地上生物量的空间分布。结果表明:样方生物量与易测因子(平均丛高和样方盖度)呈幂函数关系;机载Li DAR数据能够较精确地反演灌丛平均高度以及样方盖度;利用其反演数据获得研究区灌丛地上总生物量为141 t;单位面积最大地上生物量为691.8 g/m2;在海拔3300—3400 m高度带灌丛地上生物量最大,为40.4 t;在海拔2655—3300 m高度带,随着海拔的升高灌丛地上总生物量在增加;在海拔3400—3750 m高度带,随着海拔的升高而灌丛地上总生物量逐渐减少。